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免疫学杂志 2004年第5期20卷 346-349页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定... 详细信息

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果　克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论　成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。

关键词： PD-L2 基因克隆大肠杆菌重组蛋白

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雷帕霉素对小鼠星形胶质细胞体外诱导凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2015年第4期31卷 652-658页

作者：尹乐乐苏运钦黄秀艳叶莎莎陈真曾耀英暨南大学附属第一医院临床检验中心广东广州510632 生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,Rapa)对小鼠星形胶质细胞体外凋亡的影响。方法:无菌分离并体外培养C57BL/6J幼鼠脑组织星形胶质细胞。通过MTT比色法测定并分析Rapa浓度对幼鼠星形胶质细胞存活的影响;SYTOXGreen荧光染色联合荧光酶标仪... 详细信息

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,Rapa)对小鼠星形胶质细胞体外凋亡的影响。方法:无菌分离并体外培养C57BL/6J幼鼠脑组织星形胶质细胞。通过MTT比色法测定并分析Rapa浓度对幼鼠星形胶质细胞存活的影响;SYTOXGreen荧光染色联合荧光酶标仪检测并分析Rapa对H2O2、ionomycin、deferorxamine等诱导剂作用一定时间内细胞存活的影响;Di OC6(3)染色分析Rapa在H2O2氧化应激损伤条件下对星形胶质细胞线粒体膜电势的影响;分别采用H2DCFDA和Mito SOXTMRed荧光染色联合流式细胞术检测Rapa预适应对星形胶质细胞ROS生成以及线粒体内ROS含量的影响。结果:Rapa能促进H2O2以及ionomycin联合deferorxamine损伤作用下的星形胶质细胞的存活,对线粒体膜电势有保护作用,可降低H2O2损伤作用下星形胶质细胞ROS的产生并可以维持胞内线粒体ROS的含量在较低水平。结论:Rapa能够减少细胞内ROS的生成量并降低胞内线粒体内ROS水平;能够减轻H2O2对细胞线粒体膜的损伤破坏,维护线粒体膜电势的稳定性,进而对氧化应激损伤介导细胞凋亡有一定的抑制作用。

关键词：雷帕霉素星形胶质细胞细胞凋亡

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CD40L-PLL-CpG寡核苷酸交联复合物的制备及其对B淋巴细胞的靶向性

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中国病理生理杂志 2005年第5期21卷 902-905页

作者：蒋建伟郑梅珍曾慧兰曾耀英狄静芳严玉霞吴美玉暨南大学医学院生化教研室广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的探讨CpG寡核苷酸(CpGODN)对B淋巴细胞的靶向性及免疫增强效应。方法制备CD40配体(CD40L)-多聚左旋赖氨酸(PLL)-CpGODN交联复合物。复合物与脐血单个核细胞(MNCs)共培养,流式细胞仪检测MNCs对羧基荧光素FAM标记CpGODN的摄取率、淋巴... 详细信息

目的探讨CpG寡核苷酸(CpGODN)对B淋巴细胞的靶向性及免疫增强效应。方法制备CD40配体(CD40L)-多聚左旋赖氨酸(PLL)-CpGODN交联复合物。复合物与脐血单个核细胞(MNCs)共培养,流式细胞仪检测MNCs对羧基荧光素FAM标记CpGODN的摄取率、淋巴细胞亚群的表达;MTT法测MNCs增殖情况;ELISA法测培养上清IgG水平。结果与CpGODN相比,MNCs对CD40L-PLL-CpGODN交联复合物摄取率更高(>98%),达摄取峰值时间更早,细胞内荧光强度维持更稳定;MNCs与之共培养后CD19+、CD22+、CD20+细胞表达明显升高,MTT法测MNCs增殖情况、ELISA法测培养上清IgG水平均明显升高。结论CD40L-PLL载体系统能将CpGODN靶向作用于B细胞,增强其免疫效应。

关键词： CD40配体寡核苷酸类交联复合物 B淋巴细胞靶向

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麦胚凝集素诱导小鼠成纤维细胞L929发生凋亡的研究

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中国病理生理杂志 2001年第7期17卷 602-605,T001页

作者：孙荭何贤辉黄柏炎徐丽慧程云华曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学生物工程学系广东广州510632 暨南大学医学院第一附属医院广东广州510632

目的 :研究麦胚凝集素 (WGA)是否能够诱导小鼠成纤维细胞L92 9发生凋亡及其可能的分子机制。方法 :分别收集以WGA或琥珀酰化WGA(sWGA)处理 2 4h的L92 9细胞 ,经碘化丙啶染色后 ,以流式细胞仪分析细胞凋亡百分率 ,同时以荧光显微镜观察... 详细信息

目的 :研究麦胚凝集素 (WGA)是否能够诱导小鼠成纤维细胞L92 9发生凋亡及其可能的分子机制。方法 :分别收集以WGA或琥珀酰化WGA(sWGA)处理 2 4h的L92 9细胞 ,经碘化丙啶染色后 ,以流式细胞仪分析细胞凋亡百分率 ,同时以荧光显微镜观察吖啶橙染色细胞的形态。结果 :WGA处理过的细胞 ,其DNA亚二倍体峰 (Sub -G1)即凋亡峰的百分率明显升高 ,且与WGA剂量呈正相关 ;而sWGA处理的细胞则无此现象。同时 ,荧光显微镜观察发现WGA处理的细胞发生核碎裂 ,但sWGA无此作用。结论 :WGA能诱导L92 9细胞发生凋亡 ,而sWGA不能诱导该细胞凋亡 ,提示WGA结合至细胞表面唾液酸残基是其诱导凋亡所必需 ;WGA诱导细胞凋亡的能力可部分解释其细胞毒性。

关键词：麦胚凝集素小鼠成纤维细胞L929 细胞凋亡细胞形态

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PDBu对大鼠生长板软骨细胞增殖和分化的影响

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基础医学与临床 2007年第9期27卷 961-965页

作者：季煜华曾耀英季秋虹暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632 南通大学附属医院江苏南通226001

目的探讨蛋白激酶C(PKC)对生长板软骨细胞增殖、细胞外基质合成和转录因子SOX9表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGC),分别采用倒置显微镜、同位素掺入、RT-PCR和Western blot方法检测1、10和100nmol/L的PKC激动剂PDBu... 详细信息

目的探讨蛋白激酶C(PKC)对生长板软骨细胞增殖、细胞外基质合成和转录因子SOX9表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGC),分别采用倒置显微镜、同位素掺入、RT-PCR和Western blot方法检测1、10和100nmol/L的PKC激动剂PDBu对第一代无血清培养RGC的细胞形态、增殖、胶原和蛋白多糖的合成及COL2A1和AGGRECAN的转录及转录因子SOX9表达的影响。结果100nmol/LPDBu的处理,使无血清培养RGC的细胞形态接近于血清组(10%FBS);抑制增殖并促进胶原和蛋白多糖的合成,3H-TdR、3H-proline和35S-sulfate掺入量分别是无血清对照组的83%、152.6%和146.5%(P<0.05);促进COL2A1和AGGRECAN的转录和SOX9的表达。结论PKC的活化抑制了生长板软骨细胞增殖,促进其分化。

关键词：蛋白激酶C 生长板软骨细胞增殖分化 SOX9

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通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第1期19卷 93-94页

作者：陈纪藩陈光星李晓娟胡英杰黄可儿刘晓玲全世明曾耀英广州中医药大学第一附属医院六内科广东广州510405 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法:培养小鼠淋巴细胞,加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后,再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA),24 h后,用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结... 详细信息

目的:研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法:培养小鼠淋巴细胞,加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后,再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA),24 h后,用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结果:不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69,均有明显的下调作用(对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞),呈明显的量效关系。结论:TBL总碱可明显抑制活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达,为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据。

关键词：通痹灵总碱小鼠 T淋巴细胞 CD69

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健康青年人HCMV特异性CD8^+T细胞频率和表型分析

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 260-264,269页

作者：查庆兵徐丽慧刘芳孙荭贾仟涛李丰耀何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生物工程研究所暨南大学附属第一医院临床实验中心广州510632

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪... 详细信息

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪对样品进行三色荧光分析。结果健康中国青年人外周血中存在高频率的pp65495-503特异性CD8+T细胞,占CD8+T细胞的百分率为0.14~6.84%(均数2.45%);表型分析显示其CD28+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为为32.5%(±21.7%)和58.58%(±10.4%)(P<0.001);CD57+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为55.8%(±18.4%)和27.4%(±8.3%)(P<0.001)。同时,对三例健康青年人CD8+T细胞上多种表面分子的详细分析显示,pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞有不同比率的细胞表达CD62L、CD45RO、CD38和CD27,而且还有一定比例的细胞表达CD45RA,但不表达活化抗原CD69分子。结论青年中国人外周血中存在高频率的HCMV特异性CD8+T细胞,这些细胞的表型存在高度异质性,可能是处于不同分化阶段的记忆和效应细胞群体组成。

关键词：四聚体技术人巨细胞病毒记忆型CD8^+T细胞流式细胞术

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尿素酶预处理-气相色谱-质谱法诊断琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病

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基础医学与临床 2004年第3期24卷 327-330页

作者：宋元宗柳国胜张霆王自能暨南大学第一医院围产医学中心及组织移植与免疫研究中心广州510632 首都儿科研究所北京100020

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋... 详细信息

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋白、真空干燥处理 ,残余物进行三甲基硅烷化衍生后进样行GC MS法分析。尿液中可检测到明显的 4 羟基丁酸、2 ,4 二羟基丁酸、3,4 二羟基丁酸和 4 ,5 二羟基己酸信号。在TIC图上 ,其绝对保留时间 (相对保留时间 )分别是 6 32min(0 4 34) ,7 80min(0 5 36 ) ,7 94min(0 5 4 6 ) ,8 80min ,8 90min(0 6 0 5 ,0 6 12 )。在质谱图上 ,其特征离子 (m z,TMS)分别是M 15 (2 33,2 ) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (349,3)。GC MS法分离鉴定尿液代谢成分 ,可作为诊断该病的一种可靠手段。

关键词：琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病尿素酶气相色谱-质谱法遗传性代谢病

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hNIS转基因介导^(131)碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 387-392页

作者：钟兴弓健曾祥凤徐浩暨南大学附属第一医院医学影像中心广东广州510630 暨南大学附属第一医院核医学科广东广州510630 暨南大学组织与免疫移植实验中心广东广州510632

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可... 详细信息

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG。采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况。CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS。CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8min。131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01)。结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。

关键词：人钠/碘同向转运体基因转染碘放射性同位素

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氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究

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中国现代医学杂志 2005年第7期15卷 1005-1008页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英王通王希朝曾翔凤暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多... 详细信息

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂C on A和O M T的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析O M T对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度。结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞C FSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖。C on A组明显的出现3个峰,说明C on A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显。在C on A+O M T各剂量组中,高剂量组即O M T500μg/m L组,原代峰显著高于C on A组,各子代峰显著低于C on A组,但与对照组比较差异无显著性,说明O M T明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即O M T125μg/m L组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的O M T仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,O M T低剂量组即O M T31μg/m L组和C on A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的O M T对淋巴细胞增殖抑制作用不明显。培养72h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致。经C ELLQ uest软件拟合后得到各项增殖指标显示,O M T在500?

关键词： CFDA—SE OMT 淋巴细胞增殖

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