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国际眼科杂志 2009年第3期9卷 440-443页

作者：邓宏伟陈建苏李辰姚晓明赵松滨狄静芳暨南大学附属深圳眼科医院中国广东省深圳市518001 暨南大学医学院眼科中国广东省广州市510632 暨南大学医学院组织移植免疫中心中国广东省广州市510632

目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。... 详细信息

目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。分别于术后15d及30d行常规病理学检查。并通过免疫组化检查CD25,CD5+4在角膜植片基质中的表达。结果:0.3g/LTⅡ及0.5g/LFK506抑制角膜移植免疫排斥反应的效应均有效,两者相比效果无显著性差异。HE染色及免疫组化分析可见15d时各有效组角膜植片厚度基本正常,基质中仅有少量CD25,CD5+4阳性细胞表达、淋巴细胞浸润,新生血管少见。结论:TⅡ与FK506疗效近似。具有抑制高危角膜移植免疫排斥反应发生的临床应用价值。

关键词：雷公藤多甙(TII) 角膜移植移植物排斥

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CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第5期13卷 974-978页

作者：曾慧兰蒋建伟郑梅珍古晨韩新爱曾耀英狄静芳严玉霞暨南大学附属第一医院广东省广州市510632 暨南大学医学院生化教研室广东省广州市510632 中山大学中山医学院临床医学系广东省广州市510632 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东省广州市510632

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异... 详细信息

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-04/2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养。分别于24,48,72,96h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平。结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(>98%),达摄取峰值时间更早。共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05)。结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应。

关键词： CD40配体 CPG寡核苷酸 B淋巴细胞靶向投递

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补阳还五汤预处理大鼠对其脑死亡后肝脏的保护作用

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中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 1081-1081页

作者：刘嘉雯陈洁曾慧兰曾耀英苏泽轩暨南大学附属第一医院泌尿外科/器官移植科广州510630 暨南大学附属第一医院血液科广州510630 暨南大学附属第一医院组织移植与免疫中心广州510630

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化... 详细信息

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化和反应性氧族（ROS）的变化，探讨其对肝脏的保护机制。

关键词：补阳还五汤脑死亡预处理保护作用肝脏 p38丝裂原活化蛋白激酶大鼠慢性排斥反应

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电... 详细信息

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image

关键词：初步研究差异蛋白质点差异表达

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体... 详细信息

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细

关键词：细胞增殖几丁质膜培养体系

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠... 详细信息

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细胞生长情况;普通培养和几丁质膜共培养4w后,表皮干细胞克隆形成率的差异;免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4w,表皮干细胞的增殖、分化情况等。结果:表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右,细胞开始克隆增殖,12d左右融合成片,传代培养后增殖能力逐渐减低,融合成片时间逐渐延长,传代培养3-4代后细胞终末分化,失去增殖能力;几丁质膜培养表皮干细胞,2w后呈棋盘式集落生长,4w后几丁质膜上有大量的表皮干细胞小集落,集落上有大量的增殖细胞附着生长,扫描电镜下见几丁质膜纤维直径约10μm,以纤维为主,上下两层呈纵横排列成十字孔,孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜支架材料培养表皮干细胞4w后,其克隆形成率明显高于普通培养皿培养(P<0.05)。表皮干细胞几丁质膜支架植入裸体内培养4w后,细胞大量增殖形成"巢状"排列,在"表皮巢"周围,可见皮肤附件结构形成。结论:表皮干细胞在体外普通培养皿培养,可增殖生长,但维持增殖时间较短;与几丁质膜材料培养,可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性;植入体内后表皮干细胞大量增殖,并可分化形成毛囊等皮肤附件结构。

关键词：细胞增殖培养体系传代培养皮肤附件

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶... 详细信息

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image Scanner□透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像,利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度校正、点检测、背景消减、匹配,以获取两种细胞的差异蛋白点;切取差异蛋白点,MOLDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱分析,利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰,Mascot软件搜索NCBInr数据库(http://***),寻找匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。结果:两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,表皮干细胞与角质形成细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为(930±15)、(982±18)个,匹配点数分别为(798±11)、(850±13)个,匹配率分别为85.81%、86.56%;两种细胞蛋白质间匹配点数(868±8)个,匹配率是76.98%;找到差异蛋白质点11个,其中只在表皮干细胞表达或高表达的有8个,只在角质形成细胞表达或高表达的有3个。差异蛋白质点分别进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,鉴定出11个有意义的蛋白质。其中表皮干细胞表达或表达明显增高的8个蛋白质包括Rho GDP解离抑制蛋白□(dissociation inhibitor(GDI))、翻译延长因子1(Translationelongation factor-1)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、谷胱苷肽S-转移酶(Glutathione S-transferase Mu 2,GSTM-2)、醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)等;角质形成细胞表达或表达明显增高的3个蛋白质,包括Nitrilasehomolog 2(Nit 2)、膜联蛋白A5(Annexin A5)和Ubiquitin-protein hydrolase等。结论:利用双向电泳和质谱分析技术,成功分离和鉴定出鼠表皮干细胞和角质形成细胞差异表达的蛋白质。这些差异蛋白质可能与表皮干细胞和角质形成细胞体外增殖、分化特性的差异有一定关系,为进一步研究调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系奠定了基础。

关键词：差异蛋白质点初步研究差异表达

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鼻息肉患者T淋巴细胞的活化状态及其细胞因子的分泌

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广东医学院学报 2009年第5期27卷 488-491页

作者：陈嵘史剑波曾山马永忠黄桂球广东省中山市人民医院耳鼻咽喉科广东中山528403 中山大学第一附属医院耳鼻咽喉科医院广东广州510080 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的分析T淋巴细胞膜表面标志的表达及其细胞因子的分泌,了解人鼻息肉T淋巴细胞的活化状态及Th1/Th2反应的特点。方法采用流式细胞术检测45例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T细胞膜表面标志CD3、CD69的表达和Th1代表性细胞因子IFN-γ、... 详细信息

目的分析T淋巴细胞膜表面标志的表达及其细胞因子的分泌,了解人鼻息肉T淋巴细胞的活化状态及Th1/Th2反应的特点。方法采用流式细胞术检测45例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T细胞膜表面标志CD3、CD69的表达和Th1代表性细胞因子IFN-γ、Th2代表性细胞因子IL-4的分泌水平,并与正常人下鼻甲黏膜及外周血的相应指标进行比较。结果(1)患者鼻息肉组织及外周血T细胞均表达CD69分子,在鼻息肉组织局部CD69分子的表达更高(P<0.01)。而在正常人下鼻甲黏膜中几乎未见CD3+CD69+细胞。(2)鼻息肉组织及患者外周血T细胞中均检测到IL-4、IFN-γ的表达,而在正常人下鼻甲黏膜中几乎未见CD3+IL-4+和CD3+IFN-γ+细胞。与正常人相比,患者外周血中IL-4、IFN-γ的含量均升高(P<0.01);与同一患者外周血相比,鼻息肉组织中IL-4的含量增高(P<0.01)而IFN-γ的含量降低(P<0.01)。结论鼻息肉组织中的T细胞高度表达CD69分子,处于免疫活化状态,产生Th1/Th2混合模式的细胞因子,与外周血相比Th细胞因子分泌优势发生改变,可能与鼻息肉"微环境"形成及黏膜免疫系统有关。

关键词：鼻息肉 T淋巴细胞淋巴细胞膜表面标志细胞因子流式细胞术

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凋亡细胞线粒体膜电势与物理参数变化的可视化研究

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第2期29卷 105-109,120页

作者：梁佩燕曾耀英王通楼湘莹暨南大学组织移植与免疫研究中心暨南大学附属第一医院妇产科广东广州510632

目的:通过放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,探讨线粒体膜电势与细胞物理参数的变化。方法:建立CHX诱导HL-60细胞凋亡模型。于6和18 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡和晚期凋亡细胞及坏死细胞比率;利用JC-1染色... 详细信息

目的:通过放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,探讨线粒体膜电势与细胞物理参数的变化。方法:建立CHX诱导HL-60细胞凋亡模型。于6和18 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡和晚期凋亡细胞及坏死细胞比率;利用JC-1染色流式细胞术,通过对对照组和CHX组FL1/FL2散点图上具有不同荧光强度的细胞群划分为R2,R3,R4 3个细胞群,并分别对这些细胞群在FSC/SSC二维散点图上进行反向设门,分析细胞凋亡过程中线粒体膜电势变化与细胞物理参数间的关系。通过透射电镜观察凋亡细胞形态结构改变。结果:CHX可引起HL-60细胞凋亡;与对照组相比,CHX组R2和R3细胞群物理参数为FSC和SSC均显著增高,但线粒体膜电势无显著性差异,P>0.05;R4细胞群则为FSC降低,SSC增高,P<0.05,且线粒体膜电势降低。CHX可诱导HL-60细胞体积变小,皱缩,并出现凋亡特征,如核固缩形成新月体和质膜"出芽"现象。结论:流式细胞仪FSC/SSC图可视为细胞指纹图谱。本模型中线粒体膜电势降低的细胞变小,且颗粒程度增加,可能与细胞凋亡过程中的结构改变有关。

关键词：线粒体膜电势细胞物理参数放线菌酮 HL-60细胞

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雌激素处理DCs在诱导小鼠同种皮肤移植免疫耐受中的作用

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中国病理生理杂志 2008年第10期24卷 2020-2024页

作者：沈媛曾耀英肇静娴暨南大学附属第一医院广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510632

目的:研究雌二醇(17β-estradiol,E2)处理的供体骨髓来源树突细胞(dendritic cells,DCs)在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:体外培养小鼠骨髓来源DCs,然后用E2处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注经E2处理的... 详细信息

目的:研究雌二醇(17β-estradiol,E2)处理的供体骨髓来源树突细胞(dendritic cells,DCs)在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:体外培养小鼠骨髓来源DCs,然后用E2处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注经E2处理的供体小鼠DCs、供体小鼠成熟DCs以及不成熟DCs,输注PBS为对照组。1周后对受体小鼠进行同种异基因皮肤移植,手术后观察皮肤存活情况,应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率的变化。结果:在同种异基因皮肤移植中,受体小鼠尾静脉输注经E2处理的DCs组与对照组和不成熟DCs组比较,移植皮肤存活时间显著延长,较不成熟DCs组存活时间平均延长10.6d(P<0.01);与对照组和不成熟DCs组比较,E2处理组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率明显升高(P<0.01)。结论:在同种异基因小鼠皮肤移植模型中,E2处理的供体小鼠DCs可以延长移植皮肤存活时间。

关键词：树突细胞雌二醇免疫耐受皮肤移植小鼠

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