检索结果-内蒙古大学图书馆

早、中、晚孕期胎盘因子对人外周血淋巴细胞CD4,CCR5和CXCR4表达的影响(英文)

中南大学学报（医学版） 2008年第6期33卷 461-467页

作者：李莉平康佳丽夏薇曾耀英广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的:通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4,CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机制。方法:制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为... 详细信息

目的:通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4,CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机制。方法:制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25%的早、中、晚孕期PF作用,培养24h后收集细胞,荧光抗体标记,流式细胞术检测外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4,CCR5和CXCR4表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞、CXCR4+细胞、CCR5+CXCR4+细胞所占的百分率。结果:各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,其中早孕期PF的作用明显强于中、晚孕期PF的作用;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率明显低于中、晚孕期PF组;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CXCR4+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CXCR4+细胞的百分率显著低于晚孕期PF组。结论:各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞和CCR5+CXCR4+细胞的百分率,早孕期PF作用最强,中、晚孕期PF效应相当,PF可能通过抑制R5病毒的入胞而具有抗R5病毒的作用,并可能在阻断HIV-1宫内感染中具有重要作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 CD4 CCR5 CXCR4

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孕酮对人树突状细胞成熟和免疫功能的影响

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中国病理生理杂志 2008年第6期24卷 1143-1147页

作者：沈媛曾耀英肇静娴暨南大学附属第一医院妇产科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510632

目的:研究孕酮(P4)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。方法:在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P4(10-7mol/L和10-6mol/L)处理,光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化,以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表... 详细信息

目的:研究孕酮(P4)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。方法:在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P4(10-7mol/L和10-6mol/L)处理,光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化,以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型,用ELISA方法测定其分泌的IL-10和IL-12水平,[3H]-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。结果:加入P4培养后,DCs树突状和膜面状伪足减少,表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86,其分泌的IL-10水平升高,IL-12水平明显下降,DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。结论:P4抑制人外周血来源DCs的成熟,对其免疫学功能具有负性调节作用。

关键词：树突细胞孕酮免疫功能

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适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

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中山大学学报（医学科学版） 2008年第3期29卷 337-341页

作者：聂燕芳曾耀英吴晓萍刘钧澄黄秀艳暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广东广州510080

【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋... 详细信息

【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点。【结果】成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱。人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100ku之间。银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase14前体和27ku热激蛋白1。【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础。

关键词：人表皮组织双向电泳蛋白质组肽质量指纹图谱

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婴儿肠道不同部位T细胞亚群及其表面分子检测--婴儿肠道HIV-感染和复制的可能性分析

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现代免疫学 2008年第6期28卷 496-501页

作者：黄秀艳曾耀英刘钧澄唐先高陈洁张志崇佘锦标王辉暨南大学组织移植与免疫中心广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广州510080 暨南大学附属第一医院器官移植中心广州510632 深圳市东湖医院肝病研究所深圳518020

通过对婴儿外周血(PB)、肠系膜淋巴结(MLN)和肠上皮内(IE)来源淋巴细胞的比较性研究,以分析婴儿肠道HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞与分子基础。分离婴儿外周血单个核细胞(PBMC),肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)和肠上皮间淋巴细胞... 详细信息

通过对婴儿外周血(PB)、肠系膜淋巴结(MLN)和肠上皮内(IE)来源淋巴细胞的比较性研究,以分析婴儿肠道HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞与分子基础。分离婴儿外周血单个核细胞(PBMC),肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)和肠上皮间淋巴细胞(iIEL),制备单细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染色技术:(1)检测不同部位的CD3+T细胞中CD4+辅助性T细胞和CD8+杀伤性T细胞比例;(2)检测不同部位的CD4+T细胞CCR5和CXCR4以及CD69和HLA-DR的表达水平。结果发现:(1)iIEL中的CD4+辅助性T细胞占CD3+T细胞的比例明显低于PBMC和MLNL,而CD8+杀伤性T细胞占CD3+T细胞的比例明显高于PBMC和MLNL;(2)iIEL中CD4+T细胞CCR5和CXCR4以及CD69和HLA-DR的表达水平均明显高于PBMC和MLNL。结果表明:婴儿iIEL中CD4+T淋巴细胞与PBMC和MLNL的CD4+T淋巴细胞相比较,高表达HIV-1入胞共受体CCR5和CXCR4,提示iIEL更易被HIV-1感染;iIEL中CD4+T淋巴细胞高表达细胞活化标记分子CD69和HLA-DR,说明其更有利于HIV-1复制,这种高基础活化率可能与其不断接触小肠来源的食物和共生菌抗原有关。由此可见,婴儿肠道具有了HIV-1感染容许性和HIV-1复制支持性的细胞和分子基础,因此成了HIV-1最易感的解剖部位,这可能是围产期HIV感染的婴儿病毒载量明显高于成年人,且病情进展也比成年人快的原因。

关键词： HIV病 CD4+T细胞肠上皮间淋巴细胞免疫过度活化

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喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响

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中国病理生理杂志 2008年第6期24卷 1178-1182页

作者：江颖娟曾耀英肇静娴古洁若中山大学附属第三医院风湿科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究喜树碱(CPT)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法:以ConA刺激小鼠T淋巴细胞,建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型,以不同浓度的CPT作用于该模型,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分... 详细信息

目的:研究喜树碱(CPT)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法:以ConA刺激小鼠T淋巴细胞,建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型,以不同浓度的CPT作用于该模型,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达;以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色流式细胞术分析CPT在ConA刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数(PI);以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。结果:ConA作用6h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为(58.88±0.55)%,不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)CD69的表达率分别为(55.48±0.98)%、(54.67±1.05)%、(50.40±0.82)%、(42.47±1.32)%,均可明显抑制CD69的表达(P<0.01);ConA刺激48h后流式细胞术分析显示,不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)的增殖指数(PI)明显低于对照组(P<0.05);细胞周期分析显示刺激48h后不同浓度的CPT组(10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)均出现明显的凋亡峰(apoptosispeak,AP),sub-G1期、G0/G1期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论:CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖,同时使淋巴细胞阻滞于G0/G1期。

关键词：喜树碱 T淋巴细胞细胞增殖细胞周期流式细胞术

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NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 627-632页

作者：杨志刚熊丹曾耀英梁亮李庆华吴国才广东医学院附属医院血液科广东湛江524001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT... 详细信息

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明:在致死剂量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70%vs0.0%);白细胞数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)%vs(4·68±0·32)%]。移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)%vs(50.40±5·06)%,p<0.01],移植后60天两组比较差异无显著性(p>0.05)。在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达。结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

关键词：天然杀伤细胞骨髓移植同种异基因反应性造血重建

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人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 939-944页

作者：黄秀艳曾耀英张彩朱斌暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632 中山大学附属第一医院妇产科(黄埔院区) 广东广州510700 广州市番禺区何贤纪念医院产科广东广州511400

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12... 详细信息

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L,接种于75cm2培养瓶中(记作first0d);7-10d后,进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d);4-5d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0h);2h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果:我们所分离的小胶质细胞中,>98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球。结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。

关键词：小神经胶质细胞 CD68 吞噬作用

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骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 497-500页

作者：肖平曾耀英聂燕芳林蔚吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同... 详细信息

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。

关键词：白血病双向电泳蛋白质组

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早、中、晚孕期胎盘因子体外抗HIV-1的研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 230-233页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫国家重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形... 详细信息

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形成;用HIV-1ⅢB感染MT2细胞,并分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,用MTT法检测HIV-1感染细胞的存活率,用ELISA方法检测细胞培养上清中p24抗原水平。结果各孕期PF并不能抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB细胞的融合,但可以增加HIV-1感染细胞的存活率及减少HIV-1p24抗原的表达,且效应以早孕期PF最大,中孕期PF其次,晚孕期PF最小,并与剂量呈正相关。结论PF在体外具有抗HIV-1的作用,并呈现孕期和剂量相关性,可能在阻断HIV-1垂直传播中具有一定作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 Calcien-AM

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鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第25期12卷 4851-4854页

作者：李孝建李延仓4暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科曾耀英沈雁杨小红谭见容暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科广东省广州市510220 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东省广州市510220

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得... 详细信息

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得稳定生长的鼠表皮干细胞，拟建立或完善能够调控其增殖分化的体外培养体系。设计、时间及地点：细胞观察，于2007—05／11在广州市创伤外科研究所完成。材料：清洁级1～3d龄Wistar大鼠20只用于制备表皮干细胞。方法：采用两步酶消化法获得单个表皮细胞悬液，Ⅳ型胶原快速贴壁法分选贴壁细胞，加入含胎牛血清、0．05mmol／LCaCl2及表皮细胞生长因子、腺苷、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素等复合的DMEM培养基进行培养，原代分离细胞时胎牛血清体积分数为0．2以维持细胞活性，第2次换液时改为0．1。主要观察指标：光镜下观察细胞生长情况，免疫组化法检测目的细胞角蛋白19和P63整合素的表达，流式细胞仪检测01整合素和CD71的表达，通过细胞周期及生长曲线观察其增殖能力。结果：①Ⅳ型胶原筛选的细胞在复合DMEM培养基中生长良好，细胞活性〉98％，培养6d后形成含100～200个细胞的大克隆，呈鹅卵石样铺满瓶底。②角蛋白19和P63均呈阳性表达，β1整合素表达率为98.57％，CD71表达率为9．05％。③94．99％细胞处于GdG，期，细胞呈指数增长。结论：两步酶消化＋Ⅳ型胶原快速黏附法可成功分选稳定生长的鼠表皮干细胞。含霍乱毒素、腺苷、胰岛素等因子的复合DMEM培养基可维持表皮干细胞的增殖能力，其中合适的血清浓度及Ca^2＋浓度至关重要。

关键词：表皮干细胞细胞培养鉴定

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