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中山大学学报（医学科学版） 2016年第6期37卷 834-839页

作者：张梦媛颜宇琦秦洪琼王森林施珊珊吴莎江振友暨南大学医学院微生物与免疫学系//广东省分子免疫学与抗体工程重点实验室广东广州510632

【目的】研究小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒作用的机制。【方法】以50μL流感病毒FM1株LD50滴鼻感染RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠,建立小鼠流感模型,分别用小檗碱和奥司他韦治疗。... 详细信息

【目的】研究小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒作用的机制。【方法】以50μL流感病毒FM1株LD50滴鼻感染RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠,建立小鼠流感模型,分别用小檗碱和奥司他韦治疗。观察小鼠的生存率以及肺组织炎症损伤状况;RT-q PCR和Western-blot检测正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。【结果】正常野生型C57BL/6小鼠小檗碱组的生存率为80%,与病毒组50%相比明显提高,其肺组织病变局限,炎症明显减轻。通过RT-q PCR和Western-blot检测到小檗碱可下调正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。与病毒组相比,RIG-I、NF-κB和MAVS的m RNA表达量分别降低42.28%、33.12%和48.12%,同时,它们的蛋白表达量分别降低17.37%、13.83%和28.91%。【结论】小檗碱对于FM1株引起的小鼠流感具有较好的治疗作用,可通过影响RLH信号传导通路的活化来发挥抗流感病毒作用。

关键词：小檗碱 RLH信号通路流感病毒FM1株炎症反应

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二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体抑制人肺癌细胞生长的作用研究

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免疫学杂志 2016年第10期32卷 835-841页

作者：蔡亚雄张晋霞姜浩武于云飞姚双娥邓宁暨南大学生命科学技术学院生物医学转化研究院广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细... 详细信息

目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用,Western blot分析其作用于肿瘤细胞的机制,Transwell检测其对肿瘤细胞迁移侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积及裸鼠体质量变化。免疫组化法检测肿瘤组织CD31和LYVE1的表达情况,初步探讨抗b FGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。结果成功纯化得到具有抗原结合活性的ds-Diabody。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌A549细胞株的增殖。Western blot结果表明ds-Diabody能有效阻断与b FGF相关的MAPK和Akt通路。Transwell结果表明ds-Diabody可以显著抑制A549细胞的迁移及侵袭。裸鼠体内试验中,ds-Diabody抗体显著地抑制了肿瘤的生长,抑制率为86.54%。免疫组化的结果显示ds-Diabody抗体处理组肿瘤组织中微血管密度和淋巴管密度均有下降。结论抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体可有效地抑制人肺癌A549细胞的生长。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子二硫键稳定的双链抗体人肺癌细胞血管新生淋巴管新生

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PD-L1单抗的制备及其在抗肿瘤免疫应答中的作用

PD-L1单抗的制备及其在抗肿瘤免疫应答中的作用

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭郝代玲王敏珍暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

目的:制备PD-L1的m Ab并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法:应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的m Ab并用腹水方式产生大量PD-L1 m Ab;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 m Ab与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞... 详细信息

目的:制备PD-L1的m Ab并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法:应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的m Ab并用腹水方式产生大量PD-L1 m Ab;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 m Ab与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞仪分析制备的PD-L1 m Ab与人肿瘤细胞膜表面的PD-L1结合、肿瘤免疫组化方法鉴定PD-L1 m Ab;通过用表达PD-1的T细胞细胞对不同程度表达PD-L1蛋白的肿瘤进行杀伤,并与加入PD-L1抗体,检测其T细胞毒性、肿瘤细胞凋亡情况、细胞因子表达变化,研究PD-L1抗体是否能增强T细胞的杀伤活性。结果:共制备出4株高亲和力、高特异性的抗人PD-L1 m Ab,腹水效价2×106。Western-blot结果显示制备的抗PD-L1 m Ab能与人肿瘤细胞裂解液中PD-L1蛋白特异性结合。间接免疫荧光标记人肿瘤细胞流式分析证实制备的单克隆抗体能特异结合人肿瘤细胞的膜蛋白PD-L1。免疫组化结果显示该抗体在免疫病理组织中有高度特异性,在1mg/ml的抗体浓度中稀释50000倍后仍与病理组织有很强的反应性。结论:间接荧光标记PD-L1 m Ab与肿瘤细胞膜表面PD-L1特异性识别提示制备的抗体可应用于流式分析中表型测定的荧光抗体;PD-L1 m Ab与乳腺癌免疫病理组织的高度特异性反应将提示该抗体可应用于免疫病理组织的检测,与其他肿瘤组织芯片的反应试验正在进行;初步的细胞实验证明该抗体有一定的促进T细胞对肿瘤细胞的杀伤,进一步的研究是T细胞联合PD-L1单抗的体内抑瘤效果。

关键词： PD-L1 单克隆抗体免疫检验点免疫治疗

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分子模拟计算与抗体设计

分子模拟计算与抗体设计

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中国细胞生物学学会细胞工程与转基因生物分会2016年年会

作者：张宇暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室

抗体药物在全球的销售额持续增加,是近年来制药工业中增长最快的领域,治疗疾病包括肿瘤、感染性疾病和自身免疫病等.未来抗体的开发可能会更多利用计算机的分子模拟辅助,这更加具有针对性,并可以大幅降低成本,提高效率.

关键词：抗体药物分子模拟生物信息计算机

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PD-L1单抗的制备及其在抗肿瘤免疫应答中的作用

PD-L1单抗的制备及其在抗肿瘤免疫应答中的作用

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2016第十一届全国免疫学学术大会

作者：冯沛然黄建芳向军俭郝代玲王敏珍暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的：制备PD-L1的mAb并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法：应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的mAb并用腹水方式产生大量PD-L1 mAb;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞仪... 详细信息

目的：制备PD-L1的mAb并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法：应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的mAb并用腹水方式产生大量PD-L1 mAb;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞裂解液中的PD-L1结合、间接荧光标记方法通过流式细胞仪分析制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞膜表面的PD-L1结合、肿瘤免疫组化方法鉴定PD-L1 mAb;通过用表达PD-1的T细胞细胞对不同程度表达PD-L1蛋白的肿瘤进行杀伤，并与加入PD-L1抗体，检测其T细胞毒性、肿瘤细胞凋亡情况、细胞因子表达变化，研究PD-L1抗体是否能增强T细胞的杀伤活性。

关键词： PD-L1 单克隆抗体免疫检验点免疫治疗

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EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响

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肿瘤 2015年第4期35卷 370-376页

作者：吕成定吴斌华翁锐强杨晶邓宁广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

目的：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法... 详细信息

目的：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法：设计合成靶向EGFL 6基因的siRNA（命名为EGFL6-siRNA）,通过脂质体转染法将该siRNA转染入黑素瘤A375细胞,然后采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测黑素瘤A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法和Transwell实验分别检测A375细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：在成功转染EGFL6-siRNA 48 h后,A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P值均〈0.01）。EGFL6-siRNA转染组A375细胞在转染后24~72 h各时间点的细胞增殖能力均受到明显抑制（P值均〈0.01）,且细胞侵袭能力显著降低（P〈0.01）。结论：特异性siRNA能够有效地沉默人黑素瘤A375细胞中EGFL 6基因的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。

关键词：黑素瘤 RNA干扰基因表达细胞增殖细胞迁移分析表皮生长因子样结构域蛋白6

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Th17细胞介导肿瘤免疫的双向性及其意义

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国际免疫学杂志 2016年第5期39卷 466-469,505页

作者：陈千林晨李扬秋暨南大学微生物与免疫学系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 暨南大学微生物与免疫学系血液病研究所广州510632

Th17细胞作为众多CD4＋辅助性T细胞的一种,其标志性特点是能分泌炎性因子白细胞介素（IL-17）参与炎症反应.随着人们对炎症的深入了解,发现Th17细胞不只是发挥炎性效应,其在肿瘤的发生、发展及抗肿瘤方面也有重要的作用.研究发现,在多... 详细信息

Th17细胞作为众多CD4＋辅助性T细胞的一种,其标志性特点是能分泌炎性因子白细胞介素（IL-17）参与炎症反应.随着人们对炎症的深入了解,发现Th17细胞不只是发挥炎性效应,其在肿瘤的发生、发展及抗肿瘤方面也有重要的作用.研究发现,在多种肿瘤中存在Th17细胞及其相关的细胞因子,Th17细胞分泌炎性因子IL-17主动增强相关的抗肿瘤信号通路,调控抗肿瘤免疫应答.另外,固有免疫细胞IL-17＋γδT细胞以及IL-17＋ Foxp3T细胞不仅分泌IL-17发挥促肿瘤效应,还能协同Th17细胞参与到抗肿瘤免疫反应中,共同调控机体的抗肿瘤免疫反应.因而研究Th17细胞参与肿瘤应答的机制以及与IL-17＋γδT细胞和IL-17＋ Foxp3T细胞在肿瘤免疫中的相互作用关系具有重要意义.

关键词： Th17细胞炎症肿瘤免疫

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靶向c-myc基因的siRNA基因干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响

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分子诊断与治疗杂志 2016年第2期8卷 109-113,118页

作者：刘集鸿蒋楠楠张丽科邓宁惠州市第一人民医院检验科广东惠州516001 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的阐述靶向c-myc基因的si RNA基因转染干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响作用。方法将靶向c-myc基因的si RNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,通过实时荧光定量PCR法检测c-myc m RNA表达水平,原位末端标记法(terminal... 详细信息

目的阐述靶向c-myc基因的si RNA基因转染干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响作用。方法将靶向c-myc基因的si RNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,通过实时荧光定量PCR法检测c-myc m RNA表达水平,原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick end labeling,TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况及噻唑蓝法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测细胞的增殖能力。结果经过转染的Lovo细胞组与未转染的对照组c-myc m RNA表达量比率为0.22∶1,c-myc m RNA表达量比例有统计学差异(P<0.05)。经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的凋亡指数分别为32.4%与65.4%,具有显著性统计学差异(P<0.01)。MTT检测经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的细胞增值率,分别为79.28%与38.32%,具有极其显著性统计学差异(P<0.001)。结论将靶向c-myc基因的si RNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,从而证实c-myc抑制大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,从而为大肠癌的基因治疗寻求更多的治疗靶点。

关键词： Survivin hTERT c-myc 大肠癌 Lovo细胞转染凋亡

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抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第8期31卷 1115-1119页

作者：杨全利刘诗琴谈思怡邵晨晨黄建芳向军俭暨南大学抗体工程中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测企业重点实验室暨南大学分室广东广州510632

目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;... 详细信息

目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到（1.0-2.6）×10^6（A450约为1.0时的抗体稀释倍数）。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体（2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7）,其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为（25-1000）ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围（25-500）ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%（19/20）,阴性检出率为100%（40/40）。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。

关键词：人肌红蛋白细胞融合单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法

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凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究

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食品科学 2015年第1期36卷 170-173页

作者：孙一帆黄建芳向军俭王彩霞陈成枫暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的:鉴定凡纳滨对虾分子质量40 k D过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法:运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾40 k D过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:凡纳滨对虾40 k D过敏原为精氨酸激酶(arginine kinase,AK);其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类(96%~100%)、蟹类(91%~93%)、贝类(49%~52%)、蟑螂(83%)中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论:精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。

关键词：凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶质谱序列同源性免疫交叉反应

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