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第九次全国药理学教学学术会议

作者：孙晓东四川大学华西基础医学院与法医学院药理学教研室成都 610041

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3种机械门控离子通道在AMsh神经胶质细胞对触觉刺激响应中的作用

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新疆医科大学学报 2015年第11期38卷 1357-1361页

作者：蔡阳薛雅丹张虎程汉奎康利军程路峰新疆医科大学基础医学院药理学教研室乌鲁木齐830011 浙江大学基础医学院杭州310053

目的探讨3种机械敏感通道在AMsh神经胶质细胞对机械刺激钙信号响应中的作用,为医学研究奠定基础。方法运用分子遗传学构建一系列转基因线虫品系,通过在体胞内钙成像技术,检测并分析AMsh神经胶质细胞对机械刺激的钙信号变化。结果机械刺... 详细信息

目的探讨3种机械敏感通道在AMsh神经胶质细胞对机械刺激钙信号响应中的作用,为医学研究奠定基础。方法运用分子遗传学构建一系列转基因线虫品系,通过在体胞内钙成像技术,检测并分析AMsh神经胶质细胞对机械刺激的钙信号变化。结果机械刺激可引起AMsh神经胶质细胞的钙浓度升高,野生型荧光比值(FGCamp5.0/FmCherry)升高,与trp-4(sy695);deg-1(u38)双基因突变体荧光比值升高差异无统计学意义(P>0.05),与trp-4(sy695);mec-4(e1611)双基因突变体荧光比值升高差异有统计学意义(P<0.05)。结论机械敏感通道TRP-4和DEG-1均不参与AMsh神经胶质细胞对机械刺激的响应,但是机械敏感通道MEC-4参与了AMsh神经胶质细胞对机械刺激的响应。AMsh神经胶质细胞上的机械敏感受体可能是某种全新的离子通道;ALM等触觉神经元可能对AMsh神经胶质细胞的活性起着调节作用。

关键词： AMsh胶质细胞触觉生成机械敏感离子通道胞内钙成像

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抗惊恐障碍药物的临床研究进展

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海峡药学 2015年第4期27卷 1-4页

作者：许丽华胡全戴海斌杭州师范大学药学院杭州3100363 杭州师范大学医学神经生物学市级重点实验室基础医学部药理学教研室杭州310036 浙江大学医学院附属第二医院杭州310009

本文综述了临床上用于治疗惊恐障碍的相关药物,评价并比较这些药物的疗效、不良反应及差异。结果发现,在当前选择性5-羟色胺再摄取抑制剂西酞普兰、依他普仑、氟伏沙明、氟西汀、帕罗西汀、舍曲林,5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂... 详细信息

本文综述了临床上用于治疗惊恐障碍的相关药物,评价并比较这些药物的疗效、不良反应及差异。结果发现,在当前选择性5-羟色胺再摄取抑制剂西酞普兰、依他普仑、氟伏沙明、氟西汀、帕罗西汀、舍曲林,5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、三环抗抑郁药和苯二氮艹卓类为治疗惊恐障碍的有效药物。另外,β受体阻断剂、抗惊厥药、孕激素、肌醇、丁螺环酮等在惊恐障碍的治疗中也有使用。因此,当前惊恐障碍药物的临床研究很好的反应了这些药物的作用和差异,这有助于临床医护工作者有效的选择药物。

关键词：惊恐障碍抗抑郁药物苯二氮卓类比较研究

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孟鲁司特和HAMI3379对体外大鼠皮层神经元缺血性损伤的抗氧化作用

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浙江大学学报（医学版） 2014年第3期43卷 257-264页

作者：徐栋敏张霞燕王晓蓉陈璐张丽慧石巧娟方三华卢韵碧张纬萍魏尔清浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058 杭州师范大学基础医学部药理学教研室杭州市医学神经生物学重点实验室浙江杭州310036

目的：在体外培养大鼠皮层神经元缺血性损伤模型中探讨两种半胱氨酰白三烯受体（CysLT1R和CysLT2R）拮抗剂——孟鲁司特和HAMI 3379的抗氧化作用.方法：以CysLT1R拮抗剂孟鲁司特和CysLT2R拮抗剂HAMI 3379预处理后,对大鼠皮层神经元进行... 详细信息

目的：在体外培养大鼠皮层神经元缺血性损伤模型中探讨两种半胱氨酰白三烯受体（CysLT1R和CysLT2R）拮抗剂——孟鲁司特和HAMI 3379的抗氧化作用.方法：以CysLT1R拮抗剂孟鲁司特和CysLT2R拮抗剂HAMI 3379预处理后,对大鼠皮层神经元进行缺糖缺氧/恢复或过氧化氢处理,观察神经元活性氧产生、线粒体膜电位、神经元存活率变化以及两种药物的作用.同时,以RNA干扰抑制CysLT1R和CysLT2R表达,观察以上变化.结果：缺糖缺氧处理1h后神经元活性氧产生增加（270.0％±6.8％,P＜0.01）,在缺糖缺氧恢复30 min时达高峰（356.0％±17.4％,P＜0.01）;0.01 ～1 μmol/L孟鲁司特和HAMI 3379均能轻度抑制缺糖缺氧及恢复诱导的活性氧产生（均P＜0.05）.缺糖缺氧及恢复诱导神经元线粒体膜电位下降,0.01～1μmol/L孟鲁司特一定程度抑制该作用（P＜0.05）,而HAMI 3379无明显作用.外源性活性氧过氧化氢呈浓度和时间依赖性损伤神经元,0.1～1 μmol/L的孟鲁司特和0.001～0.1μmol/L的HAMI 3379能轻度减轻过氧化氢诱导的损伤（均P ＜0.05）.CysLT1R小分子干扰RNA和CysLT2R短发卡RNA对以上反应均无显著影响.结论：孟鲁司特和HAMI 3379在神经元缺血性损伤中均有轻度抗氧化作用,且此作用可能不依赖受体.

关键词：白三烯拮抗剂药理学神经元药物作用创伤和损伤乙酸盐类治疗应用喹啉类治疗应用氧化性应激

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橘皮素通过下调microRNA-21的表达体内外协同增敏5-氟尿嘧啶对结肠癌的化疗效果

橘皮素通过下调microRNA-21的表达体内外协同增敏5-氟尿嘧啶对结...

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第十二届全国化疗药理学术研讨会

作者：熊尧周黎明四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室

背景:5-氟尿嘧啶(5-FU)为嘧啶类似物,是临床结肠癌化疗金标准,然而,患者对5-FU反应率持续降低成为临床结肠癌治疗的最大障碍。MicroRNA-21为一活跃癌基因广泛参与结肠癌发生、发展及治疗的多个环节中,抑制其表达可能为提高化疗效果的有... 详细信息

背景:5-氟尿嘧啶(5-FU)为嘧啶类似物,是临床结肠癌化疗金标准,然而,患者对5-FU反应率持续降低成为临床结肠癌治疗的最大障碍。MicroRNA-21为一活跃癌基因广泛参与结肠癌发生、发展及治疗的多个环节中,抑制其表达可能为提高化疗效果的有效策略。橘皮素为天然来源多甲基黄酮化合物,具有多重生物活性还长期用于临床治疗。目的:观察橘皮素对miR-21的调控作用,同5-FU对结直肠癌细胞的联合效果,及其相关机制探索。方法:利用荧光定量PCR方法检测30例术前接受或未接受5-FU化疗患者的结肠癌及癌旁标本中miR-2 1表达及三株常用结肠癌细胞的miR-2 1表达水平。MTT法检测橘皮素及5-FU对结肠癌细胞的生长抑制作用,基于等效线法的Chou-Falalay模型用于评价橘皮素与5-FU的联合作用。Western Blotting法检测橘皮素作用细胞后miR-21下游蛋白的表达水平。CT-26鼠源性结肠癌移植瘤模型用于评价橘皮素联合5-FU的体内抗瘤活性。结果:与未接受5-FU化疗患者相比,miR-21在术前接受化疗患者中表达明显较高(P<0.01),平均上调倍数为6.63;而体外细胞显示miR-21表达水平越高的细胞对5-FU敏感性越低。橘皮素在体外抑制结肠癌细胞生长,同时增强5-FU对结肠癌的生长抑制作用,两药联用发挥协同作用。橘皮素能够显著下调结肠癌细胞中miR-21表达,同时恢复下游靶蛋白PTEN活性,进而阻止Akt磷酸化。体内试验同时验证了橘皮素对5-FU的增敏作用,同时还能避免单独使用5-FU所致的免疫毒性和体重降低。结论:高表达miR-21降低结肠癌细胞对5-FU的敏感性。体内外实验均验证,橘皮素可以通过下调miR-21的表达与5-Fu联用发挥协同抗肿瘤效果,为临床结肠癌治疗提供新策略。

关键词：结直肠癌 miR-21 橘皮素 5-FU 协同作用

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MiR-451a通过调节巨噬细胞游走抑制因子(MIF)增强乳腺癌他莫昔芬敏感性研究

MiR-451a通过调节巨噬细胞游走抑制因子(MIF)增强乳腺癌他莫昔芬...

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纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛

作者：刘振茹冯婷朱婷婷吴啟虹周黎明李虹四川大学华西第二医院妇儿疾病及出生缺陷教育部重点实验室四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室

目的探讨miR-451a对乳腺癌细胞增殖及他莫昔芬敏感性的调控作用。方法构建重组慢病毒表达载体pHBLV-miR-451a及pHBLV-miR-451a sponge,利用脂质体法将重组慢病毒载体及辅助包装原件质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,浓缩后测定病... 详细信息

目的探讨miR-451a对乳腺癌细胞增殖及他莫昔芬敏感性的调控作用。方法构建重组慢病毒表达载体pHBLV-miR-451a及pHBLV-miR-451a sponge,利用脂质体法将重组慢病毒载体及辅助包装原件质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度;将包装好的重组慢病毒感染乳腺癌细胞MGF-7和LCC2,荧光显微镜观察转染效率;建立miR-451a过表达及抑制表达的稳定细胞株,Real-Time PCR检测miR-45 1a及巨噬细胞游走抑制因子(MIF)mRNA表达水平;Westernblot检测MIF的蛋白水平;MTT比色法测定细胞增殖能力;克隆形成实验测定细胞克隆形成能力;Transwell侵袭实验测定细胞的侵袭能力。结果成功构建慢病毒载体Lv-miR-451a和Lv-miR-451a sponge,病毒滴度测定为1×108 CFtU/ml,利用puromycin筛选获得稳定表达Lv-miR-451a及Lv-miR-451a sponge的细胞株;过表达miR-451a(Lv-miR-451.a)可显著下调MIF mRNA及蛋白表达水平,从而抑制细胞增殖,克隆形成及侵袭能力,恢复他莫昔芬的敏感性;下调miR-451a(Lv-miR-451a sponge)则可促进细胞增殖,克隆形成及侵袭能力增强,对他莫昔芬的耐药性增强。结论 miR-451a/MIF信号通路对乳腺癌细胞的生物学特性发挥调控作用,是临床治疗乳腺癌的潜在靶点。

关键词：慢病毒载体 MiR-451a 乳腺癌他莫昔芬巨噬细胞游走抑制因子

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MicroRNA-21、PTEN基因真核及shRNA表达载体构建

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生物医学工程学杂志 2013年第2期30卷 359-364页

作者：伍怡颖张媛媛万莉红陈健周黎明汪晓东四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041

为了构建microRNA-21、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)真核表达载体pEGFP-N1-pre-miR21、pEGFP-N1-PTEN及短发夹状RNA(shRNA)表达载体Psilencer4.1-CMV-mir21-shRNA、Psilenc-er4.1-CMV-PTEN-shRNA,我们根据microRNA-21、PTEN基因序列设计合成shRNA及PCR引物;将microRNA-21、PTEN shRNA片段退火后的DNA模板定向克隆到Psilencer4.1-CMV质粒;另采用RT-PCR技术从人结肠癌细胞HCT-116中扩增pre-miR-21及PTEN,并将PCR产物双酶切后定向克隆到pEGFP-N1质粒上,构建重组载体。经菌落筛选、双酶切及DNA测序分析检测重组载体构建是否成功。结果显示筛选出的阳性克隆经双酶切鉴定得到与载体及目的片段大小一致的两条片段。测序证实目的基因pre-miR-21、PTEN及其shRNA序列分别正确连接到pEGFP-N1及Psilencer4.1-CMV的多克隆位点。结论:成功构建microRNA-21、PTEN基因真核表达及shR-NA表达载体,为进一步研究microRNA-21及PTEN基因在结直肠癌中的作用奠定了基础。

关键词： microRNA-21 第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因 pEGFP-N1 Psilencer4 1-CMV 表达载体

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5-脂氧酶在全脑缺血海马CA1神经元损伤中的作用

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浙江大学学报（医学版） 2013年第1期42卷 61-66页

作者：陈文健李成檀赵建波张晓燕韩华阳魏尔清张丽慧杭州师范大学医学神经生物学市级重点实验室基础医学部药理学教研室浙江杭州310036 浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058

目的:观察全脑缺血后海马神经元损伤中5-脂氧酶(5-LOX)的表达变化,并探讨5-LOX选择性抑制剂zileuton对全脑缺血海马神经元损伤的保护作用。方法:在双侧颈总动脉阻断结合降压药诱导大鼠全脑缺血模型,Western blot方法检测脑缺血损伤中5-... 详细信息

目的:观察全脑缺血后海马神经元损伤中5-脂氧酶(5-LOX)的表达变化,并探讨5-LOX选择性抑制剂zileuton对全脑缺血海马神经元损伤的保护作用。方法:在双侧颈总动脉阻断结合降压药诱导大鼠全脑缺血模型,Western blot方法检测脑缺血损伤中5-LOX的表达改变;免疫组织化学及免疫荧光双标染色方法观察5-LOX的分布特征。应用5-LOX选择性抑制剂zileuton(10、30、50 mg/kg,缺血前后2 h灌胃给药,以后每日2次,共3 d)观察脑缺血后海马神经元的损伤变化。结果:大鼠全脑缺血后3～14 d,海马CA1神经元产生迟发性神经元死亡;海马5-LOX表达在全脑缺血后1～7 d增高,并于3 d达高峰;在海马CA1区,5-LOX主要表达在神经元胞浆,脑缺血后5-LOX发生核移位现象。5-LOX抑制剂zileuton(30和50 mg/kg)能减少全脑缺血后海马CA1神经元的死亡。结论:5-LOX参与大鼠全脑缺血诱导的海马神经元损伤,5-LOX抑制剂zileuton对全脑缺血海马神经元损伤有保护作用。

关键词：羟基脲/治疗应用脂氧合酶抑制剂/药理学脑缺血/药物疗法海马/细胞学神经元/细胞学疾病模型,动物

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半胱氨酰白三烯受体CysLT_1R和CysLT_2R以及GPR17在帕金森病模型小鼠脑内的表达分布

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浙江大学学报（医学版） 2013年第1期42卷 52-60页

作者：王浩石巧娟史文珍张霞燕王晓蓉张丽慧方三华卢韵碧张纬萍魏尔清浙江省立同德医院神经内科浙江杭州310012 浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058 杭州师范大学基础医学部药理学教研室浙江杭州310036

目的:探讨MPTP小鼠帕金森病(PD)模型脑内半胱氨酰白三烯受体CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达分布特征。方法:C57BL/6小鼠连续5 d皮下注射MPTP 25 mg/kg诱导PD模型,第10 d处死动物。应用免疫组化方法,观察CysLT1R、CysLT2R和GPR17在黑质表... 详细信息

目的:探讨MPTP小鼠帕金森病(PD)模型脑内半胱氨酰白三烯受体CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达分布特征。方法:C57BL/6小鼠连续5 d皮下注射MPTP 25 mg/kg诱导PD模型,第10 d处死动物。应用免疫组化方法,观察CysLT1R、CysLT2R和GPR17在黑质表达的变化,并用免疫双标方法进行细胞定位。结果:正常小鼠黑质中有CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达,主要表达在TH阳性多巴胺能神经元以及小胶质细胞,CysLT2R还表达于星形胶质细胞;其中,在多巴胺能神经元中91%表达GPR17,77%表达CysLT1R,52%表达CysLT2R。与对照组比较,PD模型组小鼠黑质中TH阳性细胞数显著减少;同时CysLT1R、CysLT2R和GPR17阳性细胞数以及表达CysLT1R、CysLT2R和GPR17的多巴胺细胞数均显著减少。在正常小鼠纹状体中有CysLT1R、GPR17表达,主要表达于神经元;而CysLT2R表达很少,主要表达于星形胶质细胞。PD模型组小鼠纹状体中CysLT1R、GPR17阳性细胞数减少;但CysLT2R表达升高,主要表达于增生的星形胶质细胞。结论:CysLT1R、CysLT2R和GPR17可能参与MPTP所致的小鼠PD损伤过程。

关键词：半胱氨酸受体,白三烯受体,G-蛋白偶联帕金森病疾病模型,动物免疫组织化学

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电刺激促骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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生物医学工程学杂志 2013年第3期30卷 556-561页

作者：严中琴杨刚崔燎何学令况薇吴文超刘小菁李良四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程研究室成都610041 四川大学电气信息学院医学信息工程学成都610065 广东医学院药理学教研室湛江524023 四川大学华西医院再生医学研究中心心血管疾病研究室成都610041

观察体外电刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向心肌样细胞分化的影响。选用第3、4代rBMSCs用于实验。实验分为3组:(1)电刺激组,rBMSCs分别暴露于1、2、4、6V电压,频率2Hz,脉宽5ms的电刺激,2h/d,连续刺激10d;(2)5-氮胞苷(5-Aza)组,给... 详细信息

观察体外电刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向心肌样细胞分化的影响。选用第3、4代rBMSCs用于实验。实验分为3组:(1)电刺激组,rBMSCs分别暴露于1、2、4、6V电压,频率2Hz,脉宽5ms的电刺激,2h/d,连续刺激10d;(2)5-氮胞苷(5-Aza)组,给予10μmol/L 5-Aza诱导24h,然后采用完全培养液培养10d;(3)对照组,采用完全培养液培养10d。通过倒置相差显微镜逐日连续观察细胞的生长状况和形态特征;采用实时荧光定量PCR方法检测GATA4,α-肌动蛋白(α-actin),α-辅肌动蛋白(ACTN2),心肌肌钙蛋白T(TNNT2)的mRNA表达;采用免疫荧光染色技术检测TNNT2的蛋白表达。结果显示:电刺激组、5-Aza组的GATA4、α-actin、ACTN2和TNNT2mRNA表达与TNNT2蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);提示,电刺激可以促进rBMSCs向心肌样细胞分化,电压2V的电刺激效果最佳。

关键词：电刺激大鼠骨髓间充质干细胞心肌样细胞

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