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中国临床药理学与治疗学 2018年第1期23卷 8-12,28页

作者：王棣张欢欢方杰钟宇森余陈欢杭州市江干区人民医院内科浙江杭州310016 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的:探讨柠檬苦素(LM)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的影响。方法:40只ICR雄性小鼠,按体质量随机分为4组:正常组、模型组、地塞米松(Dex)给药组和LM给药组,每组10只。Dex和LM均在滴注LPS前2 h分别小鼠腹腔注射10 mg/kg给药,之后除正... 详细信息

目的:探讨柠檬苦素(LM)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的影响。方法:40只ICR雄性小鼠,按体质量随机分为4组:正常组、模型组、地塞米松(Dex)给药组和LM给药组,每组10只。Dex和LM均在滴注LPS前2 h分别小鼠腹腔注射10 mg/kg给药,之后除正常组小鼠只给予腹腔注射等体积的生理盐水外,其余小鼠气管滴注致死量的5 mg/kg LPS。LPS注射6 h后,处死小鼠,解剖小鼠取肺脏,计算小鼠肺指数、湿干比值。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态。采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量;比色法检测血清髓过氧化物酶(MPO)含量。实时定量PCR检测TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA表达情况。Western blot检测TLR4和NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺指数和湿干比值明显升高,肺组织间质炎性细胞浸润,伴明显的肺泡充血、水肿,血清MPO、TNF-α、IL-1β和IL-6含量及其肺组织mRNA表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,LM给药组小鼠肺指数和湿干比值明显降低,肺组织病理状态明显改善,血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平及肺组织TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TLR4和NF-κB p65蛋白表达量均明显降低(P<0.01)。结论:LM可通过调控TLR4/NF-κB通路抑制炎症因子的表达从而改善LPS诱导的小鼠肺组织损伤。

关键词：柠檬苦素抗炎作用脂多糖急性肺损伤

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lncRNAs在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中的表达变化

lncRNAs在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中的表达变化

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华东地区第15届实验动物科学学术交流会

作者：方杰张欢欢王志远余陈欢应华忠浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性评价重点实验室杭州 310013

目的探讨在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中长链非编码RNA(lncRNA)的表达变化及其与肝组织病理学损害的关系。方法小鼠腹腔注射20%四氯化碳100μl,每周两次,连续6周。采用HE、MASSON染色、ELISA法和荧光定量PCR检测法,分别对造模0、2、4... 详细信息

目的探讨在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中长链非编码RNA(lncRNA)的表达变化及其与肝组织病理学损害的关系。方法小鼠腹腔注射20%四氯化碳100μl,每周两次,连续6周。采用HE、MASSON染色、ELISA法和荧光定量PCR检测法,分别对造模0、2、4、6周小鼠的肝组织病理、血清肝纤生化指标及肝脏特异性lncRNAs定量分析。

关键词：肝纤维化 lncRNAs H19 HULC MEG3

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半胱氨酰白三烯受体拮抗剂通过下调自噬减轻长爪沙鼠的全脑缺血再灌注损伤

半胱氨酰白三烯受体拮抗剂通过下调自噬减轻长爪沙鼠的全脑缺血再...

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华东地区第15届实验动物科学学术交流会

作者：石巧娟郭红刚楼琦卢领群潘若真应华忠周文伟褚晓峰浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州 310013 浙江省实验动物公共服务平台杭州 310031

目的探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂(普鲁司特、HAMI3379)对长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法采用结扎双侧颈总动脉缺血10 min再灌注24h,建立长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、普鲁... 详细信息

目的探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂(普鲁司特、HAMI3379)对长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法采用结扎双侧颈总动脉缺血10 min再灌注24h,建立长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、普鲁司特、HAMI 3379组,每组20只,术前3d开始腹腔注射给药,1次/日,术前30 min给药1次。

关键词：长爪沙鼠全脑缺血普鲁司特 HAMI 3379 自噬

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扶正康复合剂与顺铂联用抑制移植性肺癌的实验研究

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中华中医药学刊 2017年第5期35卷 1219-1224,I0008-I0011页

作者：韩淑萍余道军潘莉余陈欢胡毅翔杭州市第一人民医院浙江杭州310006 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移... 详细信息

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移植性裸鼠肺癌模型,接种15 d后开始给药,连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,ELISA法检测裸鼠血清BUN、Cr、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6的表达水平,免疫组化法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin的表达情况,q-PCR法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin mRNA的表达水平。结果:扶正康复合剂高剂量组、顺铂组、顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组与模型对照组相比:荷瘤裸鼠瘤质量显著减轻(P<0.05),血清TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-2水平显著升高(P<0.05),血清IL-6水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达量显著减少,Bax表达量增加。其中顺铂+扶正康复合剂高剂量给药组裸鼠抑瘤率最高,两者具有协同作用。与顺铂组相比:顺铂+扶正康复合剂高剂量组裸鼠血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),顺铂+扶正康复合剂中、高剂量组裸鼠血清TNF-α、INF-γ水平显著升高(P<0.01);顺铂+扶正康复合剂高剂量组Bcl-2、Survivin、VEGF表达量降低,Bax表达量增加。结论:扶正康复合剂与顺铂联用能够降低顺铂的肾损伤作用,调节机体的Th1/Th2细胞免疫平衡,通过抑制Bcl-2、Survivin、VEGF并促进Bax的表达,进而促进肺癌细胞的凋亡。

关键词：扶正康复合剂肺癌凋亡免疫调节 NOD/SCID裸鼠

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苍术酮对急性肺损伤小鼠保护作用的研究

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现代中西医结合杂志 2018年第24期27卷 2623-2626页

作者：陈天阳刘廷亮侯天禄平键胡毅翔成扬陈建杰上海市浦东新区传染病医院上海201299 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心上海200127 浙江省医学科学院/浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的观察苍术酮对急性肺损伤小鼠的保护作用。方法将144只雄性SPF级ICR小鼠分为正常组、模型组、利巴韦林组及苍术酮高、中、低剂量组,除正常组外,其余组均通过呼吸道感染甲型流感病毒诱导小鼠急性肺损伤模型。在造模2 h后,利巴韦林组... 详细信息

目的观察苍术酮对急性肺损伤小鼠的保护作用。方法将144只雄性SPF级ICR小鼠分为正常组、模型组、利巴韦林组及苍术酮高、中、低剂量组,除正常组外,其余组均通过呼吸道感染甲型流感病毒诱导小鼠急性肺损伤模型。在造模2 h后,利巴韦林组给予利巴韦林50 mg/kg灌胃,苍术酮低、中、高剂量组分别给予10 mg/kg、20 mg/kg、40mg/kg灌胃,正常组和模型组灌胃等量生理盐水,每天1次,连续5 d。5 d后处死小鼠取出肺组织,计算肺指数,HE染色法观察肺组织病理变化。另取雄性SPF级ICR小鼠120只,按上述实验方法处理,灌胃5 d后继续观察,第15天统计各组小鼠存活情况及存活时间。结果模型组的肺指数明显高于正常组(P<0.05),利巴韦林组和苍术酮各组的肺指数均明显低于模型组(P均<0.05),且苍术酮高剂量组明显低于苍术酮低剂量组(P<0.05);HE染色显示,与模型组比较,各给药组肺组织肺泡明显,细胞相对较完整,炎性渗出减少,肺细胞间隔增厚较轻,细支气管上皮柱状细胞脱落减少。利巴韦林组和苍术酮各组小鼠存活时间显著长于模型组,生存率明显高于模型组,且苍术酮高剂量组存活时间显著长于苍术酮低剂量组,生存率明显高于苍术酮低剂量组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论苍术酮对甲型流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤具有保护作用,可延长存活时间,提高生存率,且呈剂量依赖性,但其作用机制仍需进一步研究。

关键词：苍术酮急性肺损伤肺指数生存率

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长爪沙鼠体外受精与早期胚胎体外培养体系的初步建立

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中国实验动物学报 2017年第6期25卷 624-631页

作者：郭红刚李莉周生来卢领群李坤杜江涛石巧娟金秀清李长龙萨晓婴应华忠褚晓峰浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013 杭州市疾病预防控制中心杭州310021 中国医科大学实验动物部沈阳110001 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性,为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精,并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果长爪沙鼠体外受... 详细信息

目的探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性,为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精,并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果长爪沙鼠体外受精率在60%以上,沙鼠2细胞胚胎能够在体外进一步发育。结论初步建立了长爪沙鼠体外受精和胚胎发育体系,但需要进一步优化。

关键词：长爪沙鼠体外受精体外培养

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CRISPR系统特异性敲除目的基因在肝病小鼠模型中的应用

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国际流行病学传染病学杂志 2017年第3期44卷 151-155页

作者：马月莫丽方杰张欢欢余陈欢浙江省医学科学院动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013 浙江省中医药大学药学院杭州310053

目的利用腺相关病毒（AAV）转导和CRISPR技术建立肝脏相关疾病小鼠模型。方法AAV-绿色荧光蛋白（GFP）表达系统（AAV-GFP）和CRISPR靶向基因敲除质粒系统（px330-sgGFP—Cas9），三组FVB／NJ小鼠采用尾静脉高压水动力注射技术分别注射... 详细信息

目的利用腺相关病毒（AAV）转导和CRISPR技术建立肝脏相关疾病小鼠模型。方法AAV-绿色荧光蛋白（GFP）表达系统（AAV-GFP）和CRISPR靶向基因敲除质粒系统（px330-sgGFP—Cas9），三组FVB／NJ小鼠采用尾静脉高压水动力注射技术分别注射生理盐水（对照组）、AAV-GFP（AAV-GFP组）、AAV—GFP＋px330-sgGFP-Cas9（sgGFP组），采用小动物活体成像仪检测小鼠肝脏GFP表达情况。结果生理盐水对照组小鼠肝脏不表达GFP；AAV—GFP组小鼠肝脏72h后开始表达GFP，2周后GFP表达稳定；sgGFP组在第9、12天均表达GFP蛋白，但2周后GFP蛋白明显减弱。结论本研究所构建的AAV—GFP表达系统能够在小鼠肝脏中稳定表达GFP。所构建的CRISPR质粒系统可以特异性敲除小鼠肝脏所携带的目的基因，建立合适的肝脏疾病研究模型。

关键词：质粒 CRISPR技术腺相关病毒系统水动力注射技术

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微RNA-22在甲状腺乳头状癌中的表达及与化疗敏感性的关系

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国际流行病学传染病学杂志 2017年第2期44卷 95-99页

作者：谢珲张欢欢应华忠余陈欢张松照陈勤浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013 浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目的研究微RNA（miRNA,miR）-22在甲状腺乳头状癌组织、血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系.方法收集21例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料、组织、血清样本,同时收集21例健康体检者和21例甲状腺结节患者血清样本作为对照,... 详细信息

目的研究微RNA（miRNA,miR）-22在甲状腺乳头状癌组织、血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系.方法收集21例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料、组织、血清样本,同时收集21例健康体检者和21例甲状腺结节患者血清样本作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法检测miR-22在癌组织、癌旁组织、血清、人甲状腺正常细胞系和人甲状腺乳头癌细胞系中的表达并进行统计学分析,利用生物信息学软件预测miR-22的靶基因及参与的信号通路.结果 miR-22在癌组织中的表达显著低于癌旁组织,在癌患者血清中的表达显著高于健康体检者和甲状腺结节患者,在癌组织中的表达与血清中表达呈负相关（r=-0.851,P＜0.01）.miR-22在T3～T4期癌组织中的相对表达量为0.45±0.08,低于T1～T2期的0.61±0.18（t=-2.809,P＜0.01）,在N-期癌组织中的相对表达量为0.64±0.16,高于N＋期的0.48±0.10 （t=2.789,P＜0.01）;在T3～T4期患者血清中的相对表达量为12.76±1.60,高于T1～T2期的9.91±2.74（t=2.806,P＜0.01）;在化疗高敏感组患者癌组织中的相对表达量为0.71±0.14,高于化疗低敏感组的0.42±0.13（t=4.575,P＜0.01）.利用生物信息学软件预测SIRT1和HMGB1为miR-22的靶基因,其参与细胞内吞作用、肌动蛋白细胞骨架调节、丝裂原活化蛋白激酶和癌症等多个信号通路.结论 miR-22在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中的表达量显著降低,且与肿瘤T、N分期和化疗敏感性有关,但在血清中的表达量显著升高;miR-22参与多个信号通路,可能通过靶向调控SIRT1和HMGB1影响甲状腺乳头状癌的发生发展.

关键词：微RNAs 甲状腺乳头状癌表达量化疗敏感性

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长爪沙鼠肝星状细胞的分离培养与鉴定

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中国比较医学杂志 2016年第3期26卷 29-34页

作者：楼琦李巍石巧娟卢领群郭红刚杜江涛萨晓婴浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310010

目的探索长爪沙鼠稳定、经济的肝星状细胞分离和培养方法,为深入探讨长爪沙鼠肝纤维化的细胞机制提供技术支撑。方法取成年雄性长爪沙鼠,用链蛋白酶、胶原酶及DNA酶体内门静脉灌注消化长爪沙鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心,分离肝... 详细信息

目的探索长爪沙鼠稳定、经济的肝星状细胞分离和培养方法,为深入探讨长爪沙鼠肝纤维化的细胞机制提供技术支撑。方法取成年雄性长爪沙鼠,用链蛋白酶、胶原酶及DNA酶体内门静脉灌注消化长爪沙鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,α-SMA,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞性质。结果肝星状细胞得率为0.5-1×10^7/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。原代培养3 dα-SMA阳性细胞达75%以上,传代培养后,α-SMA,Desmin阳性达100%。结论成功建立了稳定可靠的长爪沙鼠肝星状细胞分离培养方法,为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供了技术支持。

关键词：长爪沙鼠肝星状细胞细胞分离原代培养

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基于microRNAs的石荠苧总黄酮抗流感病毒性肺炎作用机制研究

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中草药 2016年第7期47卷 1149-1154页

作者：吴方余陈欢俞文英胡毅翔王丹仙俞冰浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的从微小核糖核酸(micro RNAs,mi RNAs)角度研究石荠苧总黄酮抗流感病毒性肺炎作用机制。方法设立对照组、模型组和石荠苧总黄酮组,将甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34经鼻滴入模型组和石荠苧总黄酮组小鼠,建立小鼠流感病毒感染性... 详细信息

目的从微小核糖核酸(micro RNAs,mi RNAs)角度研究石荠苧总黄酮抗流感病毒性肺炎作用机制。方法设立对照组、模型组和石荠苧总黄酮组,将甲型流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34经鼻滴入模型组和石荠苧总黄酮组小鼠,建立小鼠流感病毒感染性肺炎模型,观察比较石荠苧总黄酮对流感病毒感染小鼠肺指数和血清白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)水平的影响;采用高通量测序法和荧光定量PCR法,检测各组小鼠肺组织中mi RNAs的表达丰度差异;采用miranda、mirbase、targetscan 3个数据库预测差异mi RNAs的靶基因,并通过KEGG分析靶基因的相关功能;采用蛋白印迹法验证相关蛋白的表达。结果与模型组相比,石荠苧总黄酮可显著抑制流感病毒感染引起的小鼠肺指数和血清中细胞因子增加,调节异常表达的mi RNAs水平趋于正常;KEGG分析这些mi RNAs所调控的靶基因主要富集于JAK-STAT、TLR3等信号通路;Western blotting证实石荠苧总黄酮可调整感染小鼠异常表达的靶蛋白水平。结论石荠苧总黄酮可通过调控小鼠体内mi RNAs的表达发挥抗流感病毒性肺炎作用。

关键词：石荠苧总黄酮流感病毒靶基因 TLR3 高通量测序

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