检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2016年第10期26卷 72-78页

作者：胡毅翔张欢欢余陈欢金晓音应华忠浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013

目的建立基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法,应用于实验动物沙门氏菌的检测。方法提取小鼠粪便DNA样本,分别针对16S r DNA区域、23S r DNA区域、16S^23S r DNA IS、23S^5S r DNA IS、gyr B优选区域设计通用引物,对各个引物... 详细信息

目的建立基于高通量测序技术的实验动物沙门氏菌检测方法,应用于实验动物沙门氏菌的检测。方法提取小鼠粪便DNA样本,分别针对16S r DNA区域、23S r DNA区域、16S^23S r DNA IS、23S^5S r DNA IS、gyr B优选区域设计通用引物,对各个引物进行测试分析,优化扩增条件并建库,利用Illumina高通量测序技术检测区分42个样本中的沙门氏菌,评价该方法的特异性和稳定性。结果筛选发现沙门氏菌的菌种分类优选区域为gyr B基因,gyr B基因引物序列为FP5’-AACCACCGCAATCAGACCTT3’,FP5’-AGCCACGAAACCTTCACYA-3’。对引物进行优化,确定最佳扩增条件及样品上样量并正式建库,通过高通量测序和序列分析能检测出42个样品中极微量的沙门氏菌,检测方法稳定,灵敏度高,检测限可达0~102的cfu。结论本实验利用高通量测序技术,建立了一套完整检测实验动物沙门氏菌的生物体系,能检测出实验动物体内极微量的沙门氏菌,检测方法稳定性好,灵敏度高,可沿用至其他种类病原微生物的检测。

关键词：沙门氏菌实验动物高通量测序

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槲皮素对大鼠非酒精性脂肪肝炎的治疗作用及其机制

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实验动物与比较医学 2017年第2期37卷 83-88页

作者：李剑波余陈欢王志远方杰应华忠浙江中医药大学药学院杭州310053 杭州市余杭区第一人民医院药剂科杭州311000 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013

目的观察槲皮素对大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)的治疗作用,以及槲皮素对NASH大鼠肝组织核因子-κB(NF-κB)及其下游转录因子表达水平的影响。方法采用高脂饲料喂食6周,建立NASH大鼠模型。灌胃给予40~160 mg/kg槲皮素治疗4周。采用生化检... 详细信息

目的观察槲皮素对大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)的治疗作用,以及槲皮素对NASH大鼠肝组织核因子-κB(NF-κB)及其下游转录因子表达水平的影响。方法采用高脂饲料喂食6周,建立NASH大鼠模型。灌胃给予40~160 mg/kg槲皮素治疗4周。采用生化检测仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平。采用Western blotting法检测各组肝脏中NF-κB蛋白表达情况。采用RT-PCR技术检测各组肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达情况。结果与高脂模型组相比,槲皮素各剂量组大鼠血清LDL-C、TC、AST水平显著降低。病理组织学检查结果表明,给予槲皮素治疗后,可明显减轻NASH大鼠肝脏脂肪变性和炎性细胞浸润;同时,还可明显降低TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA以及NF-κB p65蛋白的表达,并呈一定的量效关系。结论槲皮素对高脂饮食诱导大鼠NASH有明显治疗作用,作用机制可能与其抑制肝细胞脂质沉积和调控NF-κB通路有关。

关键词：槲皮素非酒精性脂肪肝炎 (NASH)NF-κB 炎症反应高血脂

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长爪沙鼠原位肝移植模型的建立

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中国比较医学杂志 2016年第5期26卷 53-57页

作者：楼琦卢领群周冰珞郭红刚李巍石巧娟杜江涛萨晓婴浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310010 浙江大学医学院杭州310053

目的建立长爪沙鼠原位肝移植模型的方法与技术。方法用改良的双套管法行100对长爪沙鼠原位肝移植手术,门静脉、肝下下腔静脉行套管吻合,而肝上上腔静脉采用缝合法,胆管内支架法完成胆道重建。结果在手术成熟后,供体手术时间为34.56±... 详细信息

目的建立长爪沙鼠原位肝移植模型的方法与技术。方法用改良的双套管法行100对长爪沙鼠原位肝移植手术,门静脉、肝下下腔静脉行套管吻合,而肝上上腔静脉采用缝合法,胆管内支架法完成胆道重建。结果在手术成熟后,供体手术时间为34.56±5.12 min,修肝及安置套管时间为15.43±2.75 min,受体手术时间为58.37±8.54 min,其中无肝期为23.66±4.47 min。手术成功率为86.67%(术后存活6 h以上)。结论改良的双套管法成功建立了长爪沙鼠肝移植模型,通过手术技巧训练可提高手术成功率,延长爪沙鼠存活时间。

关键词：长爪沙鼠肝移植模型,动物

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橙黄胡椒酰胺酯对脂多糖诱导人肺泡上皮细胞A549凋亡的抑制作用

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国际流行病学传染病学杂志 2017年第4期44卷 217-221页

作者：张宽宽张欢欢俞文英方杰余陈欢宁波市镇海区招宝山街道社区卫生服务中心浙江宁波315000 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013

目的探讨橙黄胡椒酰胺酯（AA）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮细胞A549凋亡的抑制作用及其转录组学调控机制。方法采用MTT法检测经LPS及AA处理后A549细胞的增殖情况。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率。采用RNA-seq技术筛选AA处理前后A54... 详细信息

目的探讨橙黄胡椒酰胺酯（AA）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮细胞A549凋亡的抑制作用及其转录组学调控机制。方法采用MTT法检测经LPS及AA处理后A549细胞的增殖情况。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率。采用RNA-seq技术筛选AA处理前后A549细胞的差异表达基因，并将得到的差异表达基因进行GO功能富集以及KEGG通路分析。结果10μg／mLLPS可诱导A549细胞发生明显凋亡，凋亡率为（51．7±3．2）％，与正常组凋亡率[（4．8±0．2）％]相比差异有统计学意义（t=0．000，P〈0．05）；给予15-60μg／mLAA干预后，可明显抑制LPS诱导的细胞凋亡，并呈一定的浓度依赖性。通过比较分析，共筛选出差异表达基因76个，其中显著下调的基因为9个，显著上调的基因为67个；依据作用通路分类，显著通路（P〈10^-3）的有2个，分别是细胞外基质受体互作通路和肿瘤坏死因子（TNF）信号通路。结论AA可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡，其作用机制可能与细胞炎症及黏附等的调控有关。

关键词：二酮哌嗪类急性肺损伤细胞凋亡转录组测序炎症反应

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基于肺部苦味受体抗哮喘天然活性成分筛选模型的建立与应用

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中草药 2016年第5期47卷 775-780页

作者：胡毅翔蔡伟张欢欢余陈欢俞文英金晓音应华忠浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013 浙江医药高等专科学校中药学院浙江宁波315100

目的构建以肺部苦味受体TAS2R14为靶点的高通量筛选细胞模型,为寻找高效、低毒的新型抗哮喘天然药物奠定基础。方法利用同源重组技术将TAS2R14受体基因插入p LVX-basic质粒,构建p LVX-Ac GFP1-N1-TAS2R14重组载体,并将其转染入HEK293T细... 详细信息

目的构建以肺部苦味受体TAS2R14为靶点的高通量筛选细胞模型,为寻找高效、低毒的新型抗哮喘天然药物奠定基础。方法利用同源重组技术将TAS2R14受体基因插入p LVX-basic质粒,构建p LVX-Ac GFP1-N1-TAS2R14重组载体,并将其转染入HEK293T细胞,建立特异性高表达TAS2R14受体基因的细胞株。利用该细胞模型对120种苦味中药提取物和单体化合物进行高通量筛选。结果建立的模型Z′因子为0.69和0.66,筛选发现陈皮提取物及其药效物质柠檬苦素,白果提取物及其药效物质芦丁、奎宁对TAS2R14受体具有显著的激动作用。结论建立的TAS2R14受体激动剂高通量筛选模型稳定性好、灵敏度高,筛选得到的3种中药单体具有潜在的TAS2R14受体激动活性。

关键词：哮喘苦味受体柠檬苦素芦丁奎宁

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苍术酮对急性肺损伤小鼠血清细胞因子和TLR7信号通路的影响

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中国中医急症 2017年第6期26卷 952-955页

作者：陈天阳薛建华侯天禄平键胡毅翔成扬陈建杰上海市浦东新区传染病医院上海201299 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的观察苍术酮对急性肺损伤(ALI)小鼠血清细胞因子和TRL7信号通路的影响。方法通过呼吸道感染甲型流感病毒,诱导小鼠ALI模型。将144只雄性SPF级ICR小鼠,随机分为正常组24只,模型组120只。模型组在乙醚麻醉下通过鼻内接种IAV诱导感染,... 详细信息

目的观察苍术酮对急性肺损伤(ALI)小鼠血清细胞因子和TRL7信号通路的影响。方法通过呼吸道感染甲型流感病毒,诱导小鼠ALI模型。将144只雄性SPF级ICR小鼠,随机分为正常组24只,模型组120只。模型组在乙醚麻醉下通过鼻内接种IAV诱导感染,这种病毒在小鼠中引起肺炎,然后随机平均分为5组,每组24只,分别为模型对照组,利巴韦林治疗组,苍术酮低剂量、中剂量和高剂量治疗组。在造模2 h后,阳性药物组给予利巴韦林50 mg/kg灌胃给药,苍术酮高、中、低剂量治疗组分别给予苍术酮40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg灌胃给药,每日1次,连续5 d。5 d后处死动物,采集血清以及肺组织样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IFN-β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;PCR法测定小鼠肺组织中TLR-7、My D88、TRAF6、IFN-βm RNA表达水平;Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血清中IFN-β、IL-6、TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,利巴韦林组和苍术酮组IL-6、TNF-α、IL-1β炎症因子水平均显著下降,而IFN-β水平显著升高(P<0.01),苍术酮高、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组相比,苍术酮治疗组TLR7及其下游基因My D88,TRAF6和IFN-β的m RNA表达显著上调(P<0.01)。此外,Western印迹分析结果显示,模型对照组的核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达水平与正常组相比显著增加(P<0.01);与模型组相比,利巴韦林及苍术酮各剂量组的蛋白表达显着减少(P<0.01)。结论苍术酮能够明显减轻ALI小鼠的肺部炎症,其作用机制依赖于TLR7信号通路的激活,诱导I型干扰素的产生和对NF-κB p65表达的抑制。

关键词：苍术酮急性肺损伤细胞因子 TRL7

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线粒体-细胞色素C途径在兔非酒精性脂肪肝肝细胞凋亡中的作用

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中国比较医学杂志 2016年第4期26卷 7-13,23页

作者：吴方余陈欢张欢欢马月俞冰应华忠浙江中医药大学药学院杭州浙江310053 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州浙江310013

目的探讨线粒体-细胞色素C途径在兔非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝细胞凋亡中的作用。方法雄性日本大耳兔40只,随机分为正常对照组(8周)和NAFLD模型组(4、6、8周组),每组各10只。模型组按1.2 m L/kg皮下注... 详细信息

目的探讨线粒体-细胞色素C途径在兔非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝细胞凋亡中的作用。方法雄性日本大耳兔40只,随机分为正常对照组(8周)和NAFLD模型组(4、6、8周组),每组各10只。模型组按1.2 m L/kg皮下注射花生油,2次/周,建立日本大耳兔NAFLD模型。按各组时间点处死兔子,测定兔血清中生化指标水平;HE染色观察肝组织病理形态改变,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率;提取肝脏线粒体,分光光度法检测线粒体通透转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的状态变化;免疫组织化学法检查Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3在肝组织中的表达情况;Western blot检测细胞色素C以及caspase-3含量变化。结果与正常对照组相比,模型组肝脏脂质代谢指标和相关炎症因子表达水平升高,模型组肝细胞凋亡率与对照组比较显著增加(P<0.01)。造模4周时出现肝功能损伤,脂质代谢紊乱,随着NAFLD病程的发展,Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3表达量逐渐增加,线粒体通透转换孔开放率随高脂饮食饲养时间延长明显增加(P<0.01)。结论线粒体-细胞色素C途径在NAFLD引起的肝细胞凋亡中起到了一定的调控作用。

关键词：非酒精性脂肪肝凋亡细胞色素C 胱冬肽酶-3 线粒体通透转换孔

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地黄药效microRNAs的鉴定及其靶基因功能分析

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中国中医药科技 2016年第4期23卷 416-420页

作者：马月胡毅翔张欢欢俞文英余陈欢应华忠浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的:筛选地黄microRNAs(miRNAs)类药效物质及其靶基因功能分析。方法:采用高通量测序法,测定地黄、空白小鼠和喂食地黄匀浆液小鼠肝组织及血浆中miRNAs的表达丰度,并与Gene Bank上的植物microRNA数据库比对,结合荧光定量PCR验证,鉴定... 详细信息

目的:筛选地黄microRNAs(miRNAs)类药效物质及其靶基因功能分析。方法:采用高通量测序法,测定地黄、空白小鼠和喂食地黄匀浆液小鼠肝组织及血浆中miRNAs的表达丰度,并与Gene Bank上的植物microRNA数据库比对,结合荧光定量PCR验证,鉴定吸收进入体内的地黄miRNAs,以人类mRNA为靶标,采用Target Scan与MiRanda预测地黄miRNAs的靶基因,并通过GO与KEGG分析靶基因的相关功能。结果:共鉴定出2个地黄miRNAs可吸收进入体内,其主要在生化过程、细胞成分和分子功能3大区域发挥作用,并影响肿瘤、代谢、炎症等相关信号通路。结论:miRNAs可能是一类新型的中药药效物质。

关键词：地黄 miRNAs @靶基因功能中药鉴定

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甲型流感病毒感染小鼠肺组织中环状RNA的表达变化及其靶基因功能分析

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国际流行病学传染病学杂志 2016年第6期43卷 382-387页

作者：谢珲张欢欢马月俞文英余陈欢浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013 浙江省医学科学院药物所杭州310013

目的明确参与甲型流感病毒（IAV）感染小鼠肺组织中环状RNA（circRNA）的表达变化，并分析其靶基因生物学功能。方法采用高通量测序的方法，测定并鉴定了IAV感染组和正常对照组小鼠肺组织中circRNA的表达差异及其靶基因。利用GeneOntol... 详细信息

目的明确参与甲型流感病毒（IAV）感染小鼠肺组织中环状RNA（circRNA）的表达变化，并分析其靶基因生物学功能。方法采用高通量测序的方法，测定并鉴定了IAV感染组和正常对照组小鼠肺组织中circRNA的表达差异及其靶基因。利用GeneOntology（GO）和KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes（KEGG）软件分析差异表达的circRNA靶基因生物学功能。结果共获得12个显著差异表达的circRNAs（差异倍数〉2），其中circRNA5828表达量显著下调，circRNAl3602和circRNAl3853表达量显著上调。生物信息学软件分析表明，12个circRNA靶基因在生物过程、细胞组成和分子功能三方面均发挥作用，并影响抗原加工提呈、T011样受体、维甲酸诱导基因-I样受体和心肌功能等相关信号通路。结论circRNA可能通过宿主免疫调控参与IAV的感染过程。

关键词：流感病毒A型环状RNA Toll样受体维甲酸诱导基因-I样受体宿主免疫

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车前草醇提物治疗肾草酸钙结石的作用及其机制

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中国临床药理学与治疗学 2016年第11期21卷 1239-1245页

作者：吕昂范新苏倩余陈欢钟宇森张欢欢杭州市第一人民医院药学部杭州市妇产科医院药学部浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室

目的:观察车前草醇提物对大鼠肾草酸钙结石形成的影响,并探讨其初步作用机制。方法:采用1%乙二醇联合2%氯化铵诱导大鼠肾草酸钙结石模型。收集各组大鼠尿量;采用化学比色法,检测各组大鼠尿中尿草酸(Ox)、镁离子(Mg^(2+))、肌酐(Cr)含量... 详细信息

目的:观察车前草醇提物对大鼠肾草酸钙结石形成的影响,并探讨其初步作用机制。方法:采用1%乙二醇联合2%氯化铵诱导大鼠肾草酸钙结石模型。收集各组大鼠尿量;采用化学比色法,检测各组大鼠尿中尿草酸(Ox)、镁离子(Mg^(2+))、肌酐(Cr)含量,血清及肾组织中钙离子(Ca^(2+))、BUN、Mg^(2+)、Cr含量;采用荧光实时定量PCR和蛋白印迹法,分别检测各组大鼠肾组织NOX4、bikunin、Nrf2、HO-1、NQO1和γ-GCS mRNA和蛋白表达水平。结果:与模型组相比,车前草醇提物能显著提高大鼠尿量,提高尿液Ox、Mg^(2+)、Ca^(2+)排泄量,降低血清和肾组织中Ca^(2+)、BUN、Mg^(2+)和Cr含量;此外还能降低肾组织NOX4蛋白表达,提高肾组织bikunin、Nrf2、HO-1、NQO1及γ-GCS mRNA和蛋白表达水平。结论:车前草醇提物可通过促进尿液排泄和上调bikunin、Nrf2/ARE通路相关因子表达,抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。

关键词：车前草大车前苷肾结石 bikunin 氧化应激

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