检索结果-内蒙古大学图书馆

A型塞内卡病毒、口蹄疫病毒和猪捷申病毒3重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

中国兽医学报 2025年第1期45卷 22-29页

作者：甘诗琪魏千禾倪语晨倪健波赵秀玲董婉玉周莹珊王晓杜浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室宁波海关技术中心浙江宁波315100

针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)核酸的保守区域,设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重... 详细信息

针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)核酸的保守区域,设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重组阳性质粒标准品为模板,建立了3重TaqMan荧光定量PCR方法,并对该体系进行了优化,确定了该方法的特异性、重复性、灵敏性及标准曲线,同时建立了混合感染模型。此外,利用所构建的3重TaqMan荧光定量PCR方法对临床样品进行了检测。结果显示,该方法能够特异性检测SVA、FMDV和PTV 3种病毒,与其他病原体无交叉反应;检测SVA、FMDV和PTV的最低浓度均可达到1×10~1拷贝/μL;组间和组内变异系数均小于5%;在126份样品中未检出这3种病毒。上述结果表明,该方法具有较强的特异性、高灵敏性和良好的稳定性,可用于临床检测。

关键词： A型塞内卡病毒口蹄疫病毒猪捷申病毒荧光定量RT-PCR

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产黄曲霉毒素真菌双重荧光定量PCR检测技术的建立与应用

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中国粮油学报 2024年第2期39卷 188-195页

作者：陈冠果李可陆金虎金晨晨王龑帅江冰鲍维琪程昌勇宋厚辉张晓峰浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 浙江省检验检疫科学技术研究院杭州310016 浙江工业大学食品科学与工程学院杭州310014

为实现产黄曲霉毒素真菌的快速检测,本研究建立了检测产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因的双重荧光定量PCR方法。分别针对aflR基因和nor-l基因保守序列,各设计2对特异性引物和探针,通过引物对间的有效性实验各筛选出1对最优的aflR... 详细信息

为实现产黄曲霉毒素真菌的快速检测,本研究建立了检测产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因的双重荧光定量PCR方法。分别针对aflR基因和nor-l基因保守序列,各设计2对特异性引物和探针,通过引物对间的有效性实验各筛选出1对最优的aflR引物探针和nor-1引物探针,随后建立并优化双重荧光定量PCR的反应条件,构建标准曲线,测定该方法的重复性、灵敏度和特异性。结果显示,成功筛选出aflR-2和nor1-2 2组引物/探针组合,并优化和确定了引物/探针的最佳反应终浓度。特异性实验结果显示,本研究建立的检测方法仅对产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因呈现特异性扩增,对黑曲霉、碳黑曲霉、赭曲霉和镰刀菌等常见产毒真菌的核酸样品均无扩增曲线。建立的方法重复性好,批内和批间变异系数均<3%,双重反应体系的检测灵敏度均低至1×10^(2)copies/μL。利用本研究所建立的方法与ELISA试剂盒分别对80份食品样品进行检测,结果显示,双重荧光定量PCR共检测出9份阳性样品,而ELISA试剂盒只检测出了7份阳性,表明本研究建立的方法具有更高的灵敏度和准确性。

关键词：产黄曲霉毒素真菌双重荧光定量PCR 快速检测

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单增李斯特菌毒力因子溶血素关键氨基酸位点在感染过程中的作用研究

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微生物学报 2024年第4期64卷 1219-1232页

作者：冯昱超徐加利朱斌杰吴泽斌王雯静丁桉蔡孜萌陈绵绵孙静江铃丽宋厚辉夏菁程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I25... 详细信息

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I254A)突变蛋白的原核表达菌株,以及利用同源重组方法构建hly_(Q253A)和hly_(I254A)突变株;通过表达纯化突变蛋白,测定溶血活性;比较LLO第253位Q和第254位I均突变成丙氨酸(A)后,对细菌体外生长能力、黏附侵袭、胞内迁移和增殖能力的影响。【结果】相应位点突变后,LLO蛋白均能够正常表达。在pH 6.5条件下,所有突变蛋白和突变株的溶血活性丧失。然而,在pH 5.5条件下,LLO_(I254A)和hly_(I254A)恢复了溶血活性。与野生株相比,突变株的体外生长、黏附能力和胞内增殖能力均无明显差异;突变株的侵袭能力和胞间迁移能力显著低于野生株。【结论】本研究证实第253位Q和第254位I均突变成A后,单增李斯特菌在pH 6.5条件下丧失溶血活性,并降低了感染宿主细胞的能力,但具体机制还有待进一步探索。本研究为深入探究LLO结构对单增李斯特菌生物学功能的影响奠定基础,对单增李斯特菌点突变株的构建具有一定参考意义。

关键词：单增李斯特菌溶血素O 感染点突变缺失株

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实验动物质量控制中泰泽病原体的研究进展

实验动物质量控制中泰泽病原体的研究进展

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第十六届中国实验动物科学年会

作者：陶俊豪鄢慧琼谢珲应华忠戴方伟杭州医学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室

泰泽病原体(Tyzzer's organism)是一种能引起实验动物肝肠坏死和腹泻的毛发状芽孢杆菌(Clostridium piliforme,旧称Bacillus piliforme)。该病原体引起的泰泽病是一种急性疾病,其发病迅速、致死率高、临床症状不明显,往往难以进行... 详细信息

泰泽病原体(Tyzzer's organism)是一种能引起实验动物肝肠坏死和腹泻的毛发状芽孢杆菌(Clostridium piliforme,旧称Bacillus piliforme)。该病原体引起的泰泽病是一种急性疾病,其发病迅速、致死率高、临床症状不明显,往往难以进行早期诊断和治疗,一旦爆发,将会造成严重的经济损失和实验室安全问题。本文从泰泽病原体的生物学特性、流行病学与疾病特征、检测方法、研究进展及防治多个方面进行综述。

关键词：泰泽病原体泰泽氏病研究进展防治

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异荭草素的生物学功能研究进展

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中国畜牧兽医 2025年第4期52卷 1579-1589页

作者：罗通旺金研盛燚凡王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多... 详细信息

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多种功效,而其作用机制主要是通过抗氧化应激、抗炎和调控细胞凋亡来实现,作用过程中所涉及的关键蛋白包括核因子E2相关因子2(Nrf2)、核因子激活的B细胞κ-轻链增强复合物(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血红素氧合酶-1(HO-1)等。此外,异荭草素的研究目前主要以实验鼠和相关细胞系为对象进行急性毒性和亚急性毒性试验,缺乏畜禽等其他动物或细胞的基础试验,这在一定程度上影响了异荭草素的产品开发和临床应用。作者综述了异荭草素生物学功能的研究进展,并对其在临床上的应用提出展望,以期为异荭草素生物学活性的进一步研究以及拓展其在临床上的应用提供新思路和理论支撑。

关键词：异荭草素抗氧化抗炎细胞凋亡调控

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化妆品眼刺激性评价中角膜损伤生物标志物研究

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日用化学工业（中英文） 2024年第2期54卷 161-167页

作者：谢珍黄微张劲松陈舒怀瞿霖吉匡荣浙江省食品药品检验研究院国家药品监督管理局化妆品动物替代试验技术重点实验室浙江杭州310052 杭州医学院药学院浙江杭州311399

针对离体兔眼(IRE)试验只适用于筛选严重眼刺激性(UN GHS第1类)的缺陷,建立IRE试验结合基于细胞活性生物标记物的荧光染色方法用于评价化妆品眼刺激性。通过IRE试验条件的探索,包括测试浓度和后暴露时间,对市售化妆品进行眼刺激性检测,... 详细信息

针对离体兔眼(IRE)试验只适用于筛选严重眼刺激性(UN GHS第1类)的缺陷,建立IRE试验结合基于细胞活性生物标记物的荧光染色方法用于评价化妆品眼刺激性。通过IRE试验条件的探索,包括测试浓度和后暴露时间,对市售化妆品进行眼刺激性检测,同时对角膜进行冰冻切片并染色,鬼笔环肽对丝状肌动蛋白进行染色,DAPI染色胞核后,测量损伤深度(depth of injury,DOI),并比较体外DOI、体内DOI及Draize试验结果,建立预测模型。结果显示通过DOI检测,可对化妆品无刺激性至中刺激性进行检测,表明在离体兔眼中,基于细胞活力的DOI测量可作为角膜损伤的生物标志物,适用于化妆品眼刺激性的评价。

关键词：离体兔眼化妆品眼刺激性鬼比环肽损伤深度

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微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定酒石酸托特罗定片中1类和2A类元素杂质的含量

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理化检验-化学分册 2025年第5期 603-606页

作者：丁芳芳何燕华顾霄郑金琪浙江省食品药品检验研究院国家药品监督管理局仿制药评价关键技术重点实验室浙江省原料药安全研究中心浙江省生物医药接触材料重点实验室杭州医学院

酒石酸托特罗定，化学名（R）-N,N-二异丙基-3-(2-羟基-5-甲基苯基)-3-苯丙胺，L（+）-酒石酸盐，是一种新型竞争性毒蕈碱受体拮抗剂，临床上主要用于因膀胱过度兴奋引起的尿频、尿急和/或急迫性尿失禁症状的治疗。酒石酸托特罗定片与...

酒石酸托特罗定，化学名（R）-N,N-二异丙基-3-(2-羟基-5-甲基苯基)-3-苯丙胺，L（+）-酒石酸盐，是一种新型竞争性毒蕈碱受体拮抗剂，临床上主要用于因膀胱过度兴奋引起的尿频、尿急和/或急迫性尿失禁症状的治疗。酒石酸托特罗定片与硝苯地平片或琥珀酸索利那新片联用，可用于治疗膀胱过度活动症[1]，是常用的临床一线药物。

关键词：

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糖基水解酶参与猪链球菌2型的致病作用

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微生物学通报 2025年第2期52卷 643-653页

作者：范靖妍张锦鹏曹江东姜合祥邓思敏杨杨宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地“一带一路”同一健康和食品安全国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

【背景】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病原菌,可引起猪和人的严重感染,导致肺炎和感染性休克,甚至死亡。【目的】尽管多数毒力因子被相继发现,但其致病机制仍不清晰,寻找新的毒力因子或毒力相... 详细信息

【背景】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病原菌,可引起猪和人的严重感染,导致肺炎和感染性休克,甚至死亡。【目的】尽管多数毒力因子被相继发现,但其致病机制仍不清晰,寻找新的毒力因子或毒力相关基因进一步解析其致病机理依旧迫在眉睫。【方法】基于前期SS2的Tn917转座子插入突变体库的大蜡螟幼虫筛选结果,选取了一株致病性显著下降的插入突变体,其突变基因鉴定为B9H01_RS10315,编码糖基水解酶(glycosyl hydrolase,GhA)。通过构建ghA基因的缺失株(△ghA)及回补株(C△ghA),进行生长观察和体内体外致病力试验,探究ghA参与的致病作用。【结果】相较于野生株,缺失株△ghA表现出一定的生长缺陷,大蜡螟幼虫24 h致死率下降25%,对上皮细胞的黏附能力下降约50%,在全血中存活能力下降约35%,以及在细菌对细胞10倍和50倍的感染比下被吞噬细胞的吞噬增加约100%和200%。【结论】猪链球菌2型糖基水解酶GhA有助于细菌的生长,并通过促进细菌黏附、血液存活、抗吞噬能力等参与其致病过程。

关键词：猪链球菌致病作用毒力基因糖基水解酶

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单核增生李斯特氏菌LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175介导的抗氧化应激和感染生物学研究

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微生物学报 2025年

作者：葛泓睿李豪杰高宇杰徐加利张蕊宋厚辉程昌勇邓思敏浙江农林大学动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地同一健康和食品安全“一带一路”国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室中国农业大学动物医学院

【目的】通过比较单核增生李斯特氏菌参考菌株EGD-e、lmo0175基因缺失株Δlmo0175和回补株CΔlmo0175在细菌生长、抗氧化应激、细胞和宿主感染等方面的差异，明确LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175在单核增生李斯特氏菌抗氧化应激和感染致病中... 详细信息

【目的】通过比较单核增生李斯特氏菌参考菌株EGD-e、lmo0175基因缺失株Δlmo0175和回补株CΔlmo0175在细菌生长、抗氧化应激、细胞和宿主感染等方面的差异，明确LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175在单核增生李斯特氏菌抗氧化应激和感染致病中的作用。【方法】通过构建lmo0175的基因缺失株和回补株，探究Lmo0175对单核增生李斯特氏菌生长、抗氧化应激、细胞黏附、细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖能力及小鼠致病力等方面的影响，从而明确Lmo0175在该菌抗氧化应激和感染宿主中的作用。【结果】lmo0175基因缺失后，单核增生李斯特氏菌在抗氧化应激、胞内增殖和小鼠脏器定殖等方面的能力显著降低，但在生长能力、细胞黏附和侵袭能力方面无显著差异。【结论】本研究阐明了LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175参与单核增生李斯特氏菌抗氧化应激、胞内增殖和组织定殖等过程，且有助于该菌对小鼠的致病力。

关键词：单核增生李斯特氏菌氧化应激宿主感染 LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175

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CRISPR/Cas9介导的HO-1基因敲除细胞系的建立及其应用

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中国兽医学报 2024年第11期44卷 2463-2469页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染至人胚胎肾细胞(HEK293FT),获得重组慢病毒并感染PK-15细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得HO-1敲除的单克隆细胞系,测序及Western blot验证HO-1基因的敲除情况。用10μmol/L氯化镉(CdCl_(2))处理构建好的HO-1基因敲除的细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,利用相差显微镜观察细胞形态,采用荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))的含量。结果显示,sgRNA2编辑效率最高,获得的5株敲除细胞HO-1基因均发生了碱基插入或缺失且引起了目的基因的移码,Western blot结果显示未检测到HO-1蛋白表达,表明成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系(PK-15^(HO-1 KO))。CdCl_(2)处理后,与对照细胞相比,PK-15^(HO-1KO)细胞活力显著升高,Fe^(2+)含量显著下降,表明HO-1基因敲除后可以显著缓解镉处理引起的铁代谢异常。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系,并证实HO-1在镉处理诱导PK-15细胞铁代谢异常中发挥着重要作用,为后续进一步研究HO-1在镉暴露致PK-15细胞铁死亡的调控机制奠定了基础。

关键词： HO-1 PK-15 基因敲除 CRISPR/Cas9 镉

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