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分子植物育种 2024年

作者：王旭王怡晨徐志标徐林桥康真李淑娴南京林业大学林木遗传育种全国重点实验室南方现代林业协同创新中心林木遗传与生物技术教育部重点实验室江苏省林木遗传和高效培育重点实验室盐城林场襄阳市林业科学技术推广站

油用牡丹是近年的新兴产业，然而牡丹繁育周期长，杂交育种在短期内很难满足产业发展的需求。探究‘凤丹’单株间结实性状的差异，进而通过实生选种，能尽快获得优良株系，加快油用牡丹新品种的选育进程，为今后有计划、有针对性地选择... 详细信息

油用牡丹是近年的新兴产业，然而牡丹繁育周期长，杂交育种在短期内很难满足产业发展的需求。探究‘凤丹’单株间结实性状的差异，进而通过实生选种，能尽快获得优良株系，加快油用牡丹新品种的选育进程，为今后有计划、有针对性地选择合适的亲本进行定向杂交育种工作打下基础。该研究以南京绿宙油用牡丹研究所栽植的六年生‘凤丹’实生苗为材料，连续两年测定其单株产量及其与产量有关的10个性状，并对测定性状进行相关性分析和主成分分析。结果表明：各指标变异系数存在较大差异，其中单株产量鲜质量、干质量的变异系数较大，分别是51.91%、48.62%；相关性分析表明，单株产量干质量、鲜质量与籽粒数、果实质量存在极显著正相关；籽粒数与单株产量干质量、单株产量鲜质量、果实质量、果荚数量都存在显著正相关；结果枝数、总枝条数与果荚数量极显著正相关；通过主成分分析和聚类分析，初步筛选出37株高产植株，136株中产植株以及129株低产植株。综上所述，在今后选育过程中，可将单株果实鲜质量和单株籽粒数作为首要指标，通过单株枝条总数、结果枝条数和果荚数这3个显著性状进行早期选择，并且在栽培管理过程中，可通过适当修剪以提高植株的结果枝数、果荚数量等性状，最终达到提高籽粒数以及单株产量的目的。

关键词： ‘凤丹’ 单株产量数据统计法单株选优

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杉木生长性状的空间与竞争效应及其对遗传参数估计的影响

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林业科学 2022年第5期58卷 75-84页

作者：史月冬郑宏叶代全施季森边黎明南京林业大学林木遗传与生物技术教育部重点实验室南京210037 南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037 福建省洋口国有林场南平353000

【目的】探讨整合空间与竞争效应的模型对不同林龄阶段杉木生长性状遗传参数评估的影响,为提高育种值预测和优良单株选择的准确性提供理论依据。【方法】以40年生杉木自由授粉子代测定林为研究对象,以幼林龄阶段、中林龄阶段和过成熟林... 详细信息

【目的】探讨整合空间与竞争效应的模型对不同林龄阶段杉木生长性状遗传参数评估的影响,为提高育种值预测和优良单株选择的准确性提供理论依据。【方法】以40年生杉木自由授粉子代测定林为研究对象,以幼林龄阶段、中林龄阶段和过成熟林阶段的胸径和树高为目标性状,基于最佳线性无偏估计的混合线性模型方法,分别拟合试验设计效应、空间效应、竞争效应、空间-竞争效应,利用赤池信息准则评价模型,对比不同模型估计的遗传参数和育种值。【结果】1)拟合空间-竞争效应平均提高生长性状狭义遗传力估计值的39.72%。针对不同林龄阶段胸径性状的遗传参数,拟合空间-竞争混合模型的加性遗传方差相比标准混合线性模型、空间模型和竞争模型分别提高4.46%、26.95%和35.87%,残差分别降低21.95%、26.81%和20.19%;树高性状空间-竞争模型的加性遗传方差1991和2020年相比基本模型提高10.73%和1.22%,残差降低12.75%和33.83%。2)竞争强度与林分个体间的距离有关,杉木生长性状受到相同行列个体的竞争效应要显著高于对角线方向个体。3)生长性状存在竞争效应,且径生长大于高生长。同一性状的加性-竞争效应相关表明,杉木生长性状在不同林龄均表现出竞争效应,幼林龄阶段径生长受到的竞争效应大于高生长;中林龄阶段生长性状表现出强烈的竞争相关,结合残差相关结果发现,杉木在中林龄表现出强烈的竞争效应。个体间胸径的竞争影响大于树高间的竞争影响,胸径比树高更能感受到竞争的敏感程度。4)在5%入选率下,育种值平均预测准确性为0.559。4种模型分别选出23个个体,其中78.3%的入选单株重复。基本模型、空间模型、竞争模型和空间-竞争模型的入选单株胸径均值分别为37.3、37.2、37.3和37.3 cm,遗传增益分别为12.73%、13.86%和13.32%、14.37%。【结论】采用竞争-空间模型拟合参数可增加加性遗传方差并降低残差方差的估计值;林分内目标单株受对角线方向的竞争性弱于行、列方向单株的竞争。中林龄阶段生长性状所受竞争效应最大,径生长对竞争的敏感性大于高生长。

关键词：竞争效应空间效应混合线性模型遗传参数杉木

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银腺杨生长素受体基因PagFBL3对茎生长发育的影响

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林业科学 2023年第11期59卷 59-67页

作者：左雯腾孟佳慧卢孟柱王留强林木遗传育种全国重点实验室国家林业和草原局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所北京100091 南方现代林业协同创新中心南京林业大学南京210037 省部共建亚热带森林培育国家重点实验室浙江农林大学林业与生物技术学院杭州311300

【目的】本研究分析了银腺杨生长素受体基因PagFBL3的序列结构、组织表达特异性和亚细胞定位,并创制了过表达PagFBL3转基因杨树,探讨其对茎次生生长的影响,为进一步阐明生长素受体在茎次生生长中的作用机制提供帮助。【方法】利用生物... 详细信息

【目的】本研究分析了银腺杨生长素受体基因PagFBL3的序列结构、组织表达特异性和亚细胞定位,并创制了过表达PagFBL3转基因杨树,探讨其对茎次生生长的影响,为进一步阐明生长素受体在茎次生生长中的作用机制提供帮助。【方法】利用生物信息学方法及相关软件分析系统进化关系、序列相似性及生化特征;克隆并鉴定了银腺杨PagFBL3基因,利用实时荧光定量PCR技术,分析该基因在根、幼叶、成熟叶、幼茎、维管形成层、木质部和韧皮部中的表达;利用Gateway技术,构建融合表达载体35S::PagFBL3-GFP,通过瞬时转化烟草叶片表皮分析PagFBL3的亚细胞定位;同时,将PagFBL3编码区序列重组进入pMDC32载体,构建植物过表达载体35S::PagFBL3,利用农杆菌介导法创制转基因银腺杨,通过表型观察和组织切片分析过表达PagFBL3基因对转基因杨树茎部生长发育的影响。【结果】PagFBL3基因可编码571个氨基酸残基,其编码蛋白定位于细胞核。PagFBL3基因在根、茎和叶中均有表达,并在成熟叶和次生茎中表达量较高。基于抗性筛选和分子水平鉴定,创制了11个过表达PagFBL3转基因杨树株系,选择两个表达量较高的转基因株系进行功能分析。与非转基因植株相比,过量表达PagFBL3基因促进转基因杨树木质部发育,显著增加了转基因杨树的木质部宽度,提高了转基因杨树的径向生长,地径分别增加6.7%和8.5%,第15节间木质部宽度分别增加17.3%和19.9%。此外,过量表达PagFBL3基因也增强了植株的高生长,株高分别增加6.3%和6.9%。【结论】PagFBL3基因主要在成熟叶和次生茎中表达并发挥作用,通过影响木质部发育,提高木质部宽度,进而参与调控杨树的径向生长,该研究为进一步揭示PagFBL3基因参与杨树茎部生长发育的分子机制提供了参考。

关键词：银腺杨生长素受体 PagFBL3 过量表达木质部发育

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杨树农杆菌遗传转化研究30年

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林业科学 2022年第12期58卷 114-129页

作者：陈赢男胡传景诸葛强胡建军尹佟明南京林业大学、林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室、南方现代林业协同创新中心南京210037 中国林业科学研究院林业研究所北京100091

杨树是我国最为重要的国土绿化和工业用材树种之一,精准高效培育速生、优质和高抗的杨树新品系是今后杨树育种理论和技术发展的重要方向。以农杆菌介导的遗传转化体系为基础的基因工程育种已成为缩短林木育种周期、提升育种效率的核心... 详细信息

杨树是我国最为重要的国土绿化和工业用材树种之一,精准高效培育速生、优质和高抗的杨树新品系是今后杨树育种理论和技术发展的重要方向。以农杆菌介导的遗传转化体系为基础的基因工程育种已成为缩短林木育种周期、提升育种效率的核心技术。自20世纪80年代证实杨树是农杆菌的天然寄主以来,国内外开展了大量构建农杆菌介导杨树稳定遗传转化体系的研究。本文综合分析了已有研究报道,详细回顾了不同派系杨树树种遗传转化体系的构建历程,系统整理了影响杨树遗传转化体系的主要因素,并对杨树基因工程育种的研究前景进行了展望,以期为进一步提升杨树遗传转化效率提供信息依据,为开发顽拗性木本植物和生产推广良种的遗传转化体系提供参考方案。

关键词：杨树遗传转化根癌农杆菌发根农杆菌组培再生

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马尾松NAC转录因子基因PmNAC8的克隆及表达分析

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生物技术通报 2022年第4期38卷 202-216页

作者：镐青青姚圣刘佳禾陈佩珍张梦洋季孔庶南京林业大学南方现代林业协同创新中心林木遗传与生物技术教育部重点实验室南京210037

NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)家族基因参与调控植物生长发育、响应非生物胁迫及激素信号转导。研究马尾松中NAC转录因子在非生物胁迫中的应答,为阐明基因功能提供理论依据。以马尾松(Pinus massoniana)为试验材料,通过RTPCR及RACE技术克隆一个... 详细信息

NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)家族基因参与调控植物生长发育、响应非生物胁迫及激素信号转导。研究马尾松中NAC转录因子在非生物胁迫中的应答,为阐明基因功能提供理论依据。以马尾松(Pinus massoniana)为试验材料,通过RTPCR及RACE技术克隆一个NAC家族基因,并对其进行生物信息学分析。运用qRT-PCR检测其组织表达特性及对逆境胁迫的响应情况;以基因组DNA为模板,运用染色体步移(genome walking)技术克隆该基因上游启动子序列;通过农杆菌注射本氏烟草(Nicotiana benthamiana),观察其亚细胞定位。该基因全长1726 bp,开放阅读框为1209 bp,编码402个氨基酸,将其命名为PmNAC8,GenBank登录号为MZ291447;亚细胞定位结果显示,该基因定位于细胞核;其密码子使用偏性较弱,偏好使用A/T结尾的密码子,且烟草与酵母更适合作为PmNAC8的异源表达受体;qRT-PCR显示PmNAC8在根部表达量最高,且受机械损伤及植物激素GA、ABA的诱导;克隆获得PmNAC8上游1492 bp的启动子区域,含有多个胁迫诱导元件、赤霉素调控元件和光响应元件。PmNAC8参与多种逆境胁迫,可能在赤霉素信号途径中发挥重要作用。

关键词：马尾松 NAC 密码子偏性亚细胞定位非生物胁迫启动子

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柳杉半同胞子代遗传变异分析与早期选择

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南京林业大学学报(自然科学版) 2024年

作者：林强徐进李上前林云斌章允清欧阳磊福建省林业科学研究院福建省森林培育与林产品加工利用重点实验室南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室福建省福鼎后坪国有林场福建省顺昌埔上国有林场

【目的】通过柳杉种子园半同胞子代测定，阐明家系生长性状的遗传变异、性状相关规律，评价参试家系在试验地点的生长表现和育种价值，选择速生优良家系和单株进行推广应用。【方法】2014年在福建省福鼎后坪国有林场营建柳杉种子园半同... 详细信息

【目的】通过柳杉种子园半同胞子代测定，阐明家系生长性状的遗传变异、性状相关规律，评价参试家系在试验地点的生长表现和育种价值，选择速生优良家系和单株进行推广应用。【方法】2014年在福建省福鼎后坪国有林场营建柳杉种子园半同胞子代试验林，于试验林1～7年生时每木调查树高、胸径和冠幅等生长量指标，建立数据库，分析家系生长性状的遗传变异和相关规律，估算家系及单株遗传力，并对参试家系和单株进行评价和选择。【结果】试验林7年生时，树高、胸径、冠幅和材积的平均值分别为4.51 m、6.68 cm、2.09 m和0.0111 0 m3，变异系数为16.75%～101.60%，参试家系的适应性较好且生长性状存在丰富的变异。1～7年生试验林的树高、胸径和材积等生长性状在重复和家系间的差异均达极显著水平，生长环境和家系本身的基因型对柳杉早期生长均有显著影响。试验林1～7年生的家系遗传力为0.465～0.649，单株遗传力为0.223～0.507，在家系层次上，生长表现受中等程度之上的遗传控制；在个体层次上，生长表现受较弱程度的遗传控制。生长性状间的相关系数值为0.35～0.95，生长性状的表型相关均达极显著水平。经综合评价和估算遗传增益，选出速生家系8个，树高、胸径和材积等遗传增益的平均值分别为5.53%、7.89%和22.95%；选出速生个体35个，其树高、胸径和材积的平均遗传增益分别为23.11%、27.84%和96.77%。【结论】参试柳杉家系生长表现较好，生长性状遗传变异丰富，选择的速生优良家系和个体将为试验地区柳杉人工造林提供良种材料，为构建柳杉第2代育种群体和提升柳杉遗传改良水平提供育种材料。

关键词：柳杉种子园半同胞子代生长性状遗传变异早期选择

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38年生马尾松种源生长及材性联合分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2022年第3期46卷 203-212页

作者：胡兴峰吴帆孙晓波陈厚平殷安政季孔庶南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南方现代林业协同创新中心安徽省六安市裕安区国有林木良种场

【目的】通过分析已达成熟期的马尾松种源生长与材性变异,揭示不同性状在地理种源上的变异规律,并筛选适合在安徽省六安市及类似立地区域推广的速生且材质优良的纸浆材种源。【方法】以安徽省六安市裕安区国有林木良种场的38年生(成熟林... 详细信息

【目的】通过分析已达成熟期的马尾松种源生长与材性变异,揭示不同性状在地理种源上的变异规律,并筛选适合在安徽省六安市及类似立地区域推广的速生且材质优良的纸浆材种源。【方法】以安徽省六安市裕安区国有林木良种场的38年生(成熟林)马尾松55个种源为试材,测定其胸径、树高、管胞长度及宽度、基本密度和微纤丝角,进行生长与材性联合分析。【结果】胸径、树高、材积、管胞长度、管胞宽度、微纤丝角和基本密度在种源水平上均差异极显著(P<0.01)。各性状表型变异系数、遗传变异系数分别为3.02%～58.61%、5.56%～28. 16%;胸径、树高、材积、管胞长度、管胞宽度、基本密度和微纤丝角种源遗传力分别为0.665 7、0.558 9、0.616 9、0.996 3、0.965 6、0.739 3和0.823 3。相关性研究表明:生长性状与纬度呈显著负相关,与经度相关不显著;材性与经纬度均相关不显著,但表现出局部的变异规律;生长性状间相关性高于生长与材性间相关性;微纤丝角从髓心至树皮总体随着龄级的增大而减小,木材基本密度、管胞长和宽从髓心至树皮总体随着龄级的逐渐增大而增大,变化幅度随着龄级的增大而减小。通过综合指数选择出5个综合性状优良种源,其胸径、树高、材积、管胞长度与宽度、基本密度和微纤丝角平均遗传增益分别为3.69%、5.72%、15.12%、7.05%、-1.12%、0.17%和-6.46%。【结论】成熟林马尾松种源间差异显著,并且生长性状存在从南向北逐渐减小的变异规律,材性与经纬度不相关,对其进行纸浆材生长与材性联合选择具一定潜力,可为纸浆材马尾松良种选择提供可靠依据。

关键词：马尾松种源基本密度管胞微纤丝角材性

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根癌农杆菌介导的柳树痂囊腔菌遗传转化探究

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分子植物育种 2022年第18期20卷 6049-6056页

作者：程强赵丽娟南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南方现代林业协同创新中心南京210037

柳树痂囊腔菌是柳属植物重要的真菌病原,为了建立该真菌的遗传转化体系,本研究测试了柳树痂囊腔菌对潮霉素B、卡那霉素和草铵膦的敏感性,确定80μg/mL潮霉素B用于转化子筛选;构建了双元载体,使用构巢曲霉色氨酸合成基因启动子和柳树痂... 详细信息

柳树痂囊腔菌是柳属植物重要的真菌病原,为了建立该真菌的遗传转化体系,本研究测试了柳树痂囊腔菌对潮霉素B、卡那霉素和草铵膦的敏感性,确定80μg/mL潮霉素B用于转化子筛选;构建了双元载体,使用构巢曲霉色氨酸合成基因启动子和柳树痂囊腔菌翻译延伸因子基因启动子分别驱动潮霉素抗性基因和GFP基因;在农杆菌介导的遗传转化中发现使用生长6 d菌落的分生孢子作为受体材料,农杆菌诱导培养基为pH=5.2,并添加乙酰丁香酮200μg/mL的条件下,柳树痂囊腔菌转化效率为0.62个转化子/10000个孢子;抗性菌落的PCR检测产生特异性条带,定量PCR结果显示外源基因高水平表达,并且在蓝色激发光下释放绿色荧光。使用反向PCR鉴定T-DNA插入位点,在2个转化子中发现插入突变的目标基因,进一步分析未在这两个突变体中发现生长发育和致病性的改变。本研究在柳树痂囊腔菌中建立了高效的根癌农杆菌介导遗传转化方法,有利于该菌的基因功能研究,并且促进痂囊腔属真菌共有致病机制的探索。

关键词：柳树痂囊腔菌遗传转化农杆菌介导绿色荧光蛋白潮霉素B

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北美鹅掌楸LtAGO1基因的克隆、表达及其启动子分析

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广西植物 2022年第8期42卷 1402-1416页

作者：魏灵敏温少莹马际凯夏辉李嘉昱吴栩佳李火根南京林业大学林木遗传与生物技术教育部重点实验室南京林业大学南方现代林业创新中心南京210037

为深入探究叶原基分化成叶器官的形态建成机制,该研究以北美鹅掌楸为材料,采用RT-PCR和RACE克隆技术获得LtAGO1的cDNA全长和启动子序列并预测其功能,通过RT-qPCR分析LtAGO1在鹅掌楸属中的组织表达模式。同时,经抗性筛选和DNA鉴定获得Pro... 详细信息

为深入探究叶原基分化成叶器官的形态建成机制,该研究以北美鹅掌楸为材料,采用RT-PCR和RACE克隆技术获得LtAGO1的cDNA全长和启动子序列并预测其功能,通过RT-qPCR分析LtAGO1在鹅掌楸属中的组织表达模式。同时,经抗性筛选和DNA鉴定获得ProAGO1∷GUS的转基因拟南芥株系,并进一步对T2代阳性植株进行表型和GUS组织化学染色分析。结果表明:(1)LtAGO1基因包含3300 bp的开放阅读框,编码1100个氨基酸,分子量为122.14 kD,理论等电点(pI)为9.36。(2)氨基酸序列分析显示LtAGO1含Gly-rich-AGO1和Piwi两个典型的AGO基因结构域,同源性分析显示LtAGO1蛋白与沉水樟AGO1蛋白(RWR84608.1)亲缘关系最近。(3)组织表达特异性分析显示LtAGO1在北美鹅掌楸不同组织间的相对表达量为雄蕊>花芽>花瓣>花萼>叶片>雌蕊>叶芽>茎,LtAGO1在北美鹅掌楸叶片不同发育阶段的相对表达量为叶芽萌动期>幼叶期>衰老期>成熟期,AGO1在鹅掌楸属叶缘的表达量高于叶片的其他部位且北美鹅掌楸叶凹陷部位的表达量高于叶尖部位。(4)获得叶中-侧轴向和基-顶轴向的极性缺失、叶缘锯齿、重瓣花型的转化株系,GUS组织染色显示ProAGO1启动GUS基因在叶芽顶端稳定表达且在新分化的叶柄上表达较强,在成熟期的茎、叶、花和果的维管束中均特异表达。LtAGO1启动子的GUS活性强度为叶顶芽>花>维管束,这与实时定量PCR结果相一致。综上认为,LtAGO1基因在顶端分生组织特异表达且受到多种途径的调控而参与到叶和花器官的发育进程中。该研究结果为进一步了解北美鹅掌楸LtAGO1基因的基本功能及其调控叶形发育机制提供了理论基础。

关键词：北美鹅掌楸 AGO1 叶极性 GUS 组织表达

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遗传改良对杉木针叶和种实性状的影响

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广西植物 2023年第7期43卷 1296-1307页

作者：张学峰杨双云蔡红黄豆叶代全边黎明南京林业大学林木遗传与生物技术教育部重点实验室南京210037 南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037 福建省洋口国有林场福建顺昌353211

为揭示遗传改良对主要造林用材树种叶和种实性状的影响,阐明性状的变异趋势,该研究以杉木第4轮育种的精选树(改良群体)、四省五地的表型优树与古树(未改良群体)为对象,调查了218个无性系的针叶和种实性状指标,采用方差分析和多重对比方... 详细信息

为揭示遗传改良对主要造林用材树种叶和种实性状的影响,阐明性状的变异趋势,该研究以杉木第4轮育种的精选树(改良群体)、四省五地的表型优树与古树(未改良群体)为对象,调查了218个无性系的针叶和种实性状指标,采用方差分析和多重对比方法研究遗传改良对杉木及不同类型杉木的表型差异,并通过相关性分析探究遗传改良对杉木针叶和球果部分表型性状的影响,以及利用主成分分析和聚类分析进行了分类。结果表明:(1)未改良群体的针叶长、针叶宽和出籽率分别比改良群体小13.28%、10.81%和33.90%,其他性状表现为未改良群体大于改良群体,差异在10.90%~27.03%之间。未改良群体球果长、球果宽和出籽率的变异系数,分别比改良群体大9.14%、12.73%和15.38%。(2)球果长、球果宽、苞鳞长和苞鳞宽4个性状,在未改良群体中仅有球果长和球果宽(0.931)、苞鳞长和苞鳞宽(0.622)之间呈极显著正相关,经遗传改良后,这4个性状两两之间均呈显著或极显著正相关。(3)四川雅安(SCYA)的球果长和球果宽的性状比改良群体大48.83%和53.26%,安徽黄山(AHHS)的百粒重比改良群体大16.92%。(4)遗传改良导致松张型球果的杉木比例降低,紧包型和反翘型球果的杉木比例增加。综上认为,杉木的遗传改良导致球果大小下降,改变了不同针叶和球果类型的比例,同时会改变针叶性状和种实性状的相关性,将为杉木种质资源评价和未来多目标育种提供依据。

关键词：杉木遗传改良育种群体针叶种实

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