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江苏省遗传学会2014年学术研讨会

作者：朱沛煌郭天玮季孔庶周坤杰储春荣南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室苏州市果树科学研究所

柑橘属芸香科(Rutaceae),是世界第一、我国第二大果树,有统计数据显示中国柑橘面积和产量世界第一。南方地区作为中国柑橘重要的种植中心,拥有丰富的柑橘资源。红橘作为南方地区传统的柑橘资源,主产四川、福建,其他产柑橘省区均有种植... 详细信息

柑橘属芸香科(Rutaceae),是世界第一、我国第二大果树,有统计数据显示中国柑橘面积和产量世界第一。南方地区作为中国柑橘重要的种植中心,拥有丰富的柑橘资源。红橘作为南方地区传统的柑橘资源,主产四川、福建,其他产柑橘省区均有种植。我国传统红橘资源和其他宽皮柑橘相比具有易生长,抗逆强等优点,可做优良的砧木品种,尤其果色红亮艳丽更是红橘较其他柑橘品种的优势,常作为节日喜庆用果。然而由于传统红橘存在果实种子较多,成熟期较集中,不耐储藏等缺点,种植面积呈逐年下降趋势。苏州地区是我国著名的红橘产地之一,东山、金庭地区都有大量种植,并且红橘种植历史悠久,据《唐书地理志》记载,洞庭红橘早在唐朝就被列为贡品。为了准确了解苏州地区红橘资源现状、类型、分类地位以及亲缘关系,从而更好地利用开发红橘资源,本研究对26份柑橘资源进行ISSR-PCR分析。开发了适用于红橘叶片的基因组DNA提取方法,克服了红橘叶片中多酚等易氧化物质容易在空气中褐化影响基因组DNA质量的问题,经Thermo nanodrop 2000超微量分光光度计检测,OD260/280值在1.80-1.90,OD260/230值在1.99-2.05,纯度高。并从中外大量柑橘属果树ISSR分子标记相关文献中挑选了10条高频引物,选取西山大桔、扁红柠檬、寿星金柑、HB柚4个形态差异较大的品种,分别用10条ISSR引物对其基因组进行ISSR-PCR扩增,最终挑选出8条条带较清晰,多态性好的引物,并找出了这8条引物最佳的退火温度,808、809、810、811、812、825、861、873号引物最佳退火温度依次为:55.5℃、53.0℃、53.5℃、55.0℃、54.5℃、54.0℃、54.0℃、54.5℃。同时优化了ISSR-PCR体系,最终确定20μL PCR反应体系为:DNA(50ng/μL)1.0μL、10×buffer(不含Mg2+)2.0μL、(Mg2+25 mmol/L)2.4μL、dNTPs(4.0mmol/L)0.8μL、DNA聚合酶(5U/μL)0.2μL,引物(10μmol/L)3μL,ddH2O 10.6μL。以这8条引物对所有供试的26份柑橘资源基因组进行ISSR-PCR扩增,统计与分析了扩增条带。结果表明:8条ISSR引物共扩增出10条DNA条带,其中具有多态性的有88条,多态比率为83.8%,810号引物多态性达100%,811、825和809号引物也高于90%。平均每条引物可扩增出13.1条DNA条带,平均多态谱带为11条。运用NTSys 2.10e软件对多态条带构建的(0,1)矩阵进行遗传相似性系数运算并UPGMA聚类,结果显示26份柑橘资源遗传系数在0.62至0.86之间,0.73处所有资源分成4类,其中所有红橘资源聚在一类,表明红橘类资源的分类地位属于宽皮柑橘类,但各红橘资源内相似系数相差较大,亲缘关系复杂。

关键词：宽皮柑橘柑橘属亲缘关系种质资源

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杨树生物钟节律基因PtCCA1的克隆及表达模式研究

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林业科学研究 2013年第5期26卷 649-654页

作者：刘无双杜明会陶维康杨贞诸葛强林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京林业大学江苏南京210037

生物钟节律基因CCA1在植物的光周期反应中起着重要的调控作用。利用RT-PCR方法克隆获得了一条包含1 902 bp开放阅读框的杨树CCA1基因cDNA序列,其编码633个氨基酸残基,蛋白的分子量约为68.90 kDa,等电点为6.33。分析显示含有1个Myb-like ... 详细信息

生物钟节律基因CCA1在植物的光周期反应中起着重要的调控作用。利用RT-PCR方法克隆获得了一条包含1 902 bp开放阅读框的杨树CCA1基因cDNA序列,其编码633个氨基酸残基,蛋白的分子量约为68.90 kDa,等电点为6.33。分析显示含有1个Myb-like DNA结合域及2个蛋白跨膜结合域。实时荧光定量PCR分析发现,PtCCA1基因主要在杨树叶组织中表达;随着光照时间的变化,该基因在杨树中的表达量呈现白昼不断降低而夜晚逐渐升高的昼夜变化趋势。研究结果为进一步探索PtCCA1基因在调控杨树光周期响应途径中的功能以及杨树光周期敏感机制提供了科学基础。

关键词：杨树 PtCCA1 生物节律钟基因表达

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东方百合SRAP体系优化及引物筛选

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第3期37卷 6-10页

作者：邱帅丁信誉席梦利施季森林木遗传和生物技术省部共建教育部重点实验室南京林业大学

以东方百合商品种‘索蚌’(‘Sorbonne’)和‘康斯坦撒’(‘Constantsa’)及其F1代杂交群体为实验材料,从100对SRAP引物中筛选出59对扩增产物丰富、具有较高多态性的引物,同时对PCR反应体系进行了优化。采用正交设计,对Mg2+、dNTPs、Ta... 详细信息

以东方百合商品种‘索蚌’(‘Sorbonne’)和‘康斯坦撒’(‘Constantsa’)及其F1代杂交群体为实验材料,从100对SRAP引物中筛选出59对扩增产物丰富、具有较高多态性的引物,同时对PCR反应体系进行了优化。采用正交设计,对Mg2+、dNTPs、Taq聚合酶及引物浓度进行4因素4水平优化,并在此基础上对Mg2+、引物浓度和退火温度进行了单因素优化。结果表明,东方百合SRAP的最佳体系为:1×Buffer,Mg2+浓度2.7 mmol/L,dNTPs浓度0.25 mmol/L,引物浓度0.8μmol/L,Taq聚合酶1.5μmol/min,模板DNA 60～100 ng。SRAP两步反应最佳退火温度为第1步35℃,第2步退火59.3℃。最后用‘索蚌’、‘康斯坦撒’和部分F1植株对优化体系进行稳定性检测,发现所筛选出的59对引物在优化的体系下均有稳定的扩增产物。

关键词：东方百合序列相关扩增多态性分子标记体系优化引物筛选

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植物体细胞胚发生胚性潜势恢复的研究进展

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第6期37卷 147-152页

作者：甄艳陈金慧施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室

植物体细胞胚胎发生(简称体胚发生)是细胞全能性的体现。在适宜的培养体系下,植物的体细胞理论上均存在脱分化启动胚发育进程的可能。尽管体胚发生这一生物学发育进程的报道已有50多年的历史,但仍有一些重要的科学问题还未得到完全阐明... 详细信息

植物体细胞胚胎发生(简称体胚发生)是细胞全能性的体现。在适宜的培养体系下,植物的体细胞理论上均存在脱分化启动胚发育进程的可能。尽管体胚发生这一生物学发育进程的报道已有50多年的历史,但仍有一些重要的科学问题还未得到完全阐明,例如成熟外植体胚性能力恢复的机理、外源/内源因子如何调控胚性能力获得、胚性获得的关键分子途径、胚性获得调控的信号网络等。笔者综述了体胚能力恢复的诱导因子、生理生化标记、调控基因、miRNA调控和蛋白质组特征等方面的研究进展。

关键词：愈伤组织胚性能力植物体胚发生

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柳杉SSR引物的筛选及反应体系的优化

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第6期37卷 17-21页

作者：徐进刘子梁南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室

利用正交设计方法对柳杉SSR反应体系中的Mg2+、DNA模板、聚合酶、dNTP、引物等5个反应因子进行了优化,同时对反应程序中的退火温度进行筛选。结果表明:(1)柳杉10μL的SSR反应体系的最优条件为Mg2+浓度2.0 mmol/L、4种dNTP浓度均为0.15 m... 详细信息

利用正交设计方法对柳杉SSR反应体系中的Mg2+、DNA模板、聚合酶、dNTP、引物等5个反应因子进行了优化,同时对反应程序中的退火温度进行筛选。结果表明:(1)柳杉10μL的SSR反应体系的最优条件为Mg2+浓度2.0 mmol/L、4种dNTP浓度均为0.15 mmol/L、正反引物均为0.3μmol/L、Taq聚合酶为0.5μmol/min、DNA模板为20 ng;(2)从柳杉属植物的106对SSR引物中筛选出了多态性高,稳定性好的26对引物;(3)优化了筛选出的26对引物的退火温度。

关键词：柳杉 SSR引物引物筛选体系优化

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植物的胚形态建成及其基因调控机制研究进展

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第5期37卷 134-138页

作者：王鹏凯施季森张艳娟吴霜陈金慧南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室

胚形态建成是植物生长发育的基础,是单细胞发育成功能性多细胞有机体的过程。高等植物在胚形态建成过程中首先确立极性随后形成轴性结构,为后续的胚形态建成和生长发育建立了空间坐标体系。笔者以模式植物拟南芥为例介绍了植物胚形态建... 详细信息

胚形态建成是植物生长发育的基础,是单细胞发育成功能性多细胞有机体的过程。高等植物在胚形态建成过程中首先确立极性随后形成轴性结构,为后续的胚形态建成和生长发育建立了空间坐标体系。笔者以模式植物拟南芥为例介绍了植物胚形态建成过程和基因调控机制,其中包括:MPK/GRD信号途径控制的合子伸长和极性化;WOX8、WOX9、WOX2指导合子不均等分裂和基顶轴方向确定;生长素信号、WOX5调控网络指导的根端分生组织确立、WUS/CLV3、STM调控网络指导顶端分生组织确立;以子叶形成为代表的侧生器官发生和近远轴发育模式的确立需要生长素信号控制和TCP/CUC基因的表达拮抗;SCR/SHR调控途径参与胚基部径向发育过程机理等。认为对胚形态建成过程中基因调控机理的研究有助于从一个全新的角度认识植物生长发育过程。

关键词：胚形态建成生长素信号基因调控顶端分生组织

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野百合与金佛山百合的核型分析及45S rDNA在其染色体上的物理定位

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第6期37卷 153-156页

作者：席梦利房磊张晓玲辛昊阳高婷婷施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室

采用涂片法和45S rDNA荧光原位杂交技术,对野百合(Lilium brownii)和金佛山百合(***)进行了核型分析和45S rDNA在其染色体上的物理定位。核型分析结果表明:野百合的核型为3B,金佛山百合核型为3A;野百合的核型公式为2n=2x=24=4m+8st(4SAT... 详细信息

采用涂片法和45S rDNA荧光原位杂交技术,对野百合(Lilium brownii)和金佛山百合(***)进行了核型分析和45S rDNA在其染色体上的物理定位。核型分析结果表明:野百合的核型为3B,金佛山百合核型为3A;野百合的核型公式为2n=2x=24=4m+8st(4SAT)+12t,金佛山百合的核型公式为2n=2x=24=4m+8st+12t;野百合和金佛山百合的核不对称系数分别为82.12%和82.65%。荧光原位杂交结果表明:野百合有6个45S rDNA位点,它们分别位于3、6、9号染色体上;金佛山百合有8个45S rDNA位点,它们分别位于1、3、6、8号染色体上。

关键词：野百合金佛山百合核型分析荧光原位杂交

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北美鹅掌楸原生质体的分离与培养

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西北植物学报 2013年第2期33卷 254-260页

作者：王鹏凯吕伟光胡雪怡陈金慧施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

以鹅掌楸属植物北美鹅掌楸的悬浮细胞和组培苗叶片为材料,对北美鹅掌楸原生质体分离、纯化与培养条件进行研究。结果表明:叶片和悬浮细胞用含有0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)和0.6mol/L甘露醇的Cell ProtoplastWash(60M-CPW)溶液25℃预处理1h... 详细信息

以鹅掌楸属植物北美鹅掌楸的悬浮细胞和组培苗叶片为材料,对北美鹅掌楸原生质体分离、纯化与培养条件进行研究。结果表明:叶片和悬浮细胞用含有0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)和0.6mol/L甘露醇的Cell ProtoplastWash(60M-CPW)溶液25℃预处理1h效果最好;悬浮细胞最佳酶解液为60M-CPW+1%纤维素酶+1%半纤维素酶+0.2%果胶酶Y-23+0.1%MES,每克材料25℃酶解6h有效原生质体产量可以达到3×106个;叶片最佳酶解液为60M-CPW+2%纤维素酶+1%半纤维素酶+0.2%果胶酶Y-23+0.1%MES,每克材料25℃酶解10h有效原生质体产量可以达到11×106个;悬浮细胞原生质体易于培养,在KM8p+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA培养基中培养25d可形成肉眼可见的愈伤组织。

关键词：北美鹅掌楸原生质体酶解条件愈伤组织

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麝香百合及东方百合品种核型分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2013年第1期37卷 67-70页

作者：房磊姜珊席梦利施季森傅伟杨斌南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室

以麝香百合‘白狐狸’(‘White Fox’)和‘雷山’(‘Lei Shan’)、东方百合‘水晶布兰卡’(‘Crystal Blanca’)和‘康斯坦撒’(‘Constansa’)的试管苗根尖为研究材料,用环己酰亚胺预处理,然后卡诺氏固定液固定,纤维素酶和果胶酶解离... 详细信息

以麝香百合‘白狐狸’(‘White Fox’)和‘雷山’(‘Lei Shan’)、东方百合‘水晶布兰卡’(‘Crystal Blanca’)和‘康斯坦撒’(‘Constansa’)的试管苗根尖为研究材料,用环己酰亚胺预处理,然后卡诺氏固定液固定,纤维素酶和果胶酶解离后采用涂片法制片,对4种观赏百合进行核型分析。结果表明,‘白狐狸’核型为3A,‘雷山’、‘水晶布兰卡’和‘康斯坦撒’的核型均为3B。核型公式分别为:‘白狐狸’2n=2x=24=4m+4st(2SAT)+16t,‘雷山’2n=2x=24=2m+2sm+10st(2SAT)+10t,‘水晶布兰卡’2n=2x=24=4m+10st+10t,‘康斯坦撒’2n=2x=24=4m(1SAT)+10st+10t。‘白狐狸’、‘雷山’、‘水晶布兰卡’及‘康斯坦撒’的核不对称系数分别为83.11%、82.78%、79.75%、81.22%。

关键词：麝香百合东方百合核型分析

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南林895杨离体培养及耐盐基因GmNHX1的转化

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南方农业学报 2013年第8期44卷 1237-1242页

作者：孙伟博杨立恒诸葛强南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

摘要：【目的】建立南林895杨杂交无性系最适遗传转化体系，为创新耐盐南林895杨种质资源奠定基础。【方法】以南林895杨叶片和茎段为外植体，对其再生体系和耐盐基因GmNHX1遗传转化的部分影响因子进行分析。【结果】使用NaClO消毒处理1... 详细信息

摘要：【目的】建立南林895杨杂交无性系最适遗传转化体系，为创新耐盐南林895杨种质资源奠定基础。【方法】以南林895杨叶片和茎段为外植体，对其再生体系和耐盐基因GmNHX1遗传转化的部分影响因子进行分析。【结果】使用NaClO消毒处理10～15min的外植体褐化率和污染率均较低；以叶片为外植体产生的不定芽状态良好，而茎段分化的不定芽容易白化死亡。PCR检测结果表明，转GmNHX1基因植株可扩增获得符合大小的特异性条带（1641bp）；通过荧光显微镜能够观察到转基因植株中的SGFP激发出的绿色荧光，证明GmNHX1基因已经高效整合到南林895杨的基因组中。【结论】叶片是南林895杨离体培养再生体系的最佳外植体来源，其离体培养所得的植株完全可以满足根癌农杆菌介导基因转化对受体的要求，可用于耐盐基因GmNHX1的遗传转化。

关键词：南林895杨离体培养再生体系耐盐基因GmNHX1 转化

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