检索结果-内蒙古大学图书馆

林业科学 2020年第3期56卷 184-192页

作者：武星胡兴峰陈佩珍孙晓波吴帆季孔庶南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南方现代林业协同创新中心南京210037

【目的】PIN1基因通过调控生长素极性运输的方式在植物根系生长发育中发挥作用。对马尾松PmPIN1基因进行全长克隆和功能分析,有助于在分子水平揭示马尾松的生根机制。【方法】运用PCR和RACE技术成功克隆马尾松PmPIN1基因cDNA序列;利用... 详细信息

【目的】PIN1基因通过调控生长素极性运输的方式在植物根系生长发育中发挥作用。对马尾松PmPIN1基因进行全长克隆和功能分析,有助于在分子水平揭示马尾松的生根机制。【方法】运用PCR和RACE技术成功克隆马尾松PmPIN1基因cDNA序列;利用生物信息学软件分析PmPIN1基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列,并构建系统进化树;通过实时荧光定量分析PmPIN1基因在10年生马尾松幼根、1年生枝条、新叶、花中的表达量差异;利用农杆菌侵染法将PmPIN1基因转入烟草获得转基因植株,比较转基因烟草与转pCAMBIA-1302空白载体烟草之间的表型差异;用激光共聚焦显微镜观察PmPIN1-GFP荧光蛋白在转基因烟草根中的表达模式;酶联免疫法测定野生型和转基因烟草的根、根茎结合处及叶中的生长素含量;用不同浓度的生长素极性运输抑制剂1-N-萘基邻氨甲酰苯甲酸(NPA)处理野生型与转基因烟草,分析烟草根、根茎结合处、叶中的生长素含量变化;利用PEG介导法将16318-hGFP-PmPIN1重组载体转化至拟南芥原生质体中进行亚细胞定位分析。【结果】PmPIN1基因全长2914 bp,包含2085 bp的ORF,编码的蛋白由695个氨基酸组成,N端与C端均有膜运输蛋白。系统进化树显示马尾松与油松在发育树同一支上。通过实时荧光定量发现PmPIN1在不同组织中的表达量差异达到极显著,1年生枝条与幼根中表达量较高,花中最低。农杆菌介导法转化烟草获得的转基因烟草,较转空载烟草株高增长,生根量增加且根系变长。激光共聚焦显微镜观察得出转基因烟草根部中间有明显绿色荧光富集现象。酶联免疫法测定结果表明转基因烟草根、根茎结合处生长素含量高于野生型,且叶较根和根茎结合处减少。不同浓度NPA处理后,野生型烟草根中生长素含量变化达极显著,且生长素含量随NPA处理浓度的增加而减少;处理浓度为10 nmol·L^-1时,叶中生长素含量最高;处理浓度为2 nmol·L^-1时,根茎结合处生长素含量增加较多。不同浓度NPA处理后,转基因烟草不同部位生长素含量变化均未达到极显著。亚细胞定位分析表明PmPIN1蛋白主要分布于细胞膜上。【结论】马尾松PmPIN1与油松PIN1亲缘关系最近。PmPIN1属于膜蛋白。PmPIN1转基因烟草可能提高生长素由地上部位向地下部位的运输能力,减少NPA对生长素含量变化的影响,表明PmPIN1可能调控生长素的极性运输;PmPIN1-GFP绿色荧光富集在根部中间部位,PmPIN1在幼根中表达量较高,转基因烟草较转空载植株发根量多,根长长。研究结果表明PmPIN1基因可能在根系发育中发挥重要作用。

关键词：马尾松 PmPIN1基因转基因功能分析

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马尾松转录组密码子使用偏好性及其影响因素

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林业科学 2020年第4期56卷 74-81页

作者：朱沛煌陈妤朱灵芝李荣季孔庶南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南方现代林业协同创新中心南京210037

【目的】异源表达是植物蛋白功能验证和分子育种的重要手段,而密码子是异源基因高效表达的重要因素,对马尾松转录组基因编码区密码子偏好性分析可以为马尾松分子育种提供一定的理论支持。【方法】利用CodonW、EMBOSS密码子分析软件对马... 详细信息

【目的】异源表达是植物蛋白功能验证和分子育种的重要手段,而密码子是异源基因高效表达的重要因素,对马尾松转录组基因编码区密码子偏好性分析可以为马尾松分子育种提供一定的理论支持。【方法】利用CodonW、EMBOSS密码子分析软件对马尾松转录组进行密码子参数分析和密码子偏好性分析,根据中性绘图、ENc-GC3s、偏倚性分析推测马尾松密码子偏好性的主要形成原因。通过比较高低表达基因样本同义密码子相对使用度(RSCU)筛选马尾松最优密码子,通过密码子使用频率比值分析马尾松与拟南芥、烟草、欧洲山杨、大肠杆菌、酿酒酵母的密码子偏好性差异。【结果】马尾松转录组编码序列(CDS)密码子平均GC含量为44.95%,密码子第3位GC含量为38.95%,尤为偏好A/T。高、低表达基因样本统计分析表明,马尾松转录组RSCU差异较小,筛选出TTA、CAA、TGT、GGT等27个密码子可作为马尾松的最优密码子。中性绘图、ENc-GC3s关联分析以及偏倚分析表明,马尾松密码子偏好性的形成可能主要受突变影响,其次受自然选择等多重因素共同影响。密码子使用频率分析表明马尾松密码子偏好性与烟草、拟南芥和欧洲山杨相比差异较小,与大肠杆菌差异最大,与酿酒酵母差异小于大肠杆菌。【结论】马尾松偏好第3位为A/T的密码子,筛选出27个最优密码子,其中25个密码子第3位为A/T。马尾松密码子使用偏好性形成主要受突变影响,其次受自然选择等多重因素共同影响。烟草可以作为马尾松基因异源表达的优选植物生物体,而微生物中酿酒酵母可能优于大肠杆菌。

关键词：马尾松转录组密码子使用偏好性

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马尾松RCA基因的克隆和序列分析

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分子植物育种 2015年第2期13卷 391-400页

作者：潘婷张逢凯王晓锋阮倩倩刘靖盛璐季孔庶林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京林业大学南京210037

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubis CO)活化酶(RCA)是体内活化光合作用限速酶—Rubis CO的重要酶。本研究通过反转录PCR和c DNA末端快速扩增技术,从马尾松中分离得到了Pmrca1(登录号KF420118)和Pmrca2(登录号KF420119)两条RCA基因c DN... 详细信息

1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubis CO)活化酶(RCA)是体内活化光合作用限速酶—Rubis CO的重要酶。本研究通过反转录PCR和c DNA末端快速扩增技术,从马尾松中分离得到了Pmrca1(登录号KF420118)和Pmrca2(登录号KF420119)两条RCA基因c DNA序列。两条序列均包含完整的编码区与5'端和3'非翻译区,长度分别为1 816 bp和1 953 bp,编码Pm RCA1和Pm RCA2两个蛋白,长度分别为480和440个氨基酸。序列分析发现两个蛋白质都具有RCA和AAA+蛋白家族(ATPase associated with various cellular activities)特异性结构域和定位于叶绿体的转运肽,Pm RCA1还具有RCA大同工型特有的由两个半胱氨酸(Cys)残基组成的保守结构。多重序列比对显示,这两个蛋白质序列分别与红花槭的RCA大同工型和小同工型的相似性达到78%。将Pm RCA1和Pm RCA2与20种不同物种RCA构建进化树,发现其与地中海松属于同一分支。研究结果为进一步分析马尾松RCA的功能和光合作用机制奠定了基础。

关键词：马尾松 RCA RACE c DNA克隆序列分析

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反相高效液相色谱法定量分析木质素的主要降解产物

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色谱 2011年第1期29卷 59-62页

作者：江智婧朱均均李鑫连之娜余世袁勇强南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室江苏南京210037

建立了反相高效液相色谱定量分析玉米秸秆蒸汽爆破预处理过程中产生的主要木质素降解产物的方法。采用C18色谱柱,柱温30℃,乙腈-水（含1.5%的醋酸）为流动相,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,254nm和280nm波长下紫外检测,可实现4-羟基苯甲酸... 详细信息

建立了反相高效液相色谱定量分析玉米秸秆蒸汽爆破预处理过程中产生的主要木质素降解产物的方法。采用C18色谱柱,柱温30℃,乙腈-水（含1.5%的醋酸）为流动相,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,254nm和280nm波长下紫外检测,可实现4-羟基苯甲酸、香草酸、紫丁香酸、4-羟基苯甲醛、香草醛和紫丁香醛的有效分离。6种主要木质素降解产物线性回归方程相关系数为0.999 9-1.000 0,加标回收率均在96%以上,相对标准偏差低于2.5%（n=6）,满足定量分析要求。

关键词：反相高效液相色谱酚类化合物降解产物木质素玉米秸秆

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不同浓度外源IAA处理对杉木茎部基因表达的影响

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遗传 2012年第4期34卷 472-484页

作者：杨立伟施季森南京林业大学森林资源与环境学院林木遗传与生物技术省部共建-教育部重点实验室南京210037

为了揭示吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)参与杉木木材发育调控的遗传机制,文章分别以0、***/***处理不同阶段的杉木截顶茎秆作为驱动方(Driver)和测试方(Tester),利用抑制消减杂交技术(Suppression substractive hybridization,SSH),对其中差异表达的目的基因进行了分离和克隆。共获得332个Unigenes,其潜在的功能分别涉及到细胞组织和生物合成、发育进程调控、电子传递、逆境应答以及信号传导等方面;进一步地表达鉴定发现ClHIRA、ClPGY1和ClARF4等集中于茎部近轴区域表达的基因,能够积极地响应外源IAA刺激的维管形成层分裂和管胞分化活动;而ClSMP1、ClTCTP1和ClTRN2等集中于茎部远轴区域表达的基因,则在转录水平上对外源IAA的处理水平及近轴次生维管的发育变化表现出负相关的关系。这一结果表明特异性定位的发育基因对木材形成组织中内源IAA水平变化的差异性识别和响应很可能是生长素参与林木维管形成层次生发育调节的重要分子机制。

关键词：外源IAA 杉木茎部差异表达基因的克隆表达分析

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林木半同胞子代测定遗传模型分析

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林业科学 2010年第1期46卷 29-35页

作者：童春发卫巍尹辉施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

针对林木单地点半同胞子代测定试验,给出遗传模型不同形式的表达式,采用方差分析法推导平衡数据和不平衡数据条件下方差分量估计式,并给出方差分量估计的抽样方差以及方差分量假设检验统计量的计算方法。在此基础上,给出不平衡数据条件... 详细信息

针对林木单地点半同胞子代测定试验,给出遗传模型不同形式的表达式,采用方差分析法推导平衡数据和不平衡数据条件下方差分量估计式,并给出方差分量估计的抽样方差以及方差分量假设检验统计量的计算方法。在此基础上,给出不平衡数据条件下家系遗传力的计算公式以及家系遗传力和单株遗传力抽样方差近似计算方法。对于2个数量性状,给出不平衡数据条件下遗传相关系数估计式,而且还给出遗传相关系数估计的方差近似计算方法。用VC++6.0编写计算单地点半同胞子代测定模型中各种遗传参数的Windows应用软件。

关键词：子代测定方差分量遗传力遗传相关不平衡数据

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北美鹅掌楸原生质体的分离与培养

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西北植物学报 2013年第2期33卷 254-260页

作者：王鹏凯吕伟光胡雪怡陈金慧施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

以鹅掌楸属植物北美鹅掌楸的悬浮细胞和组培苗叶片为材料,对北美鹅掌楸原生质体分离、纯化与培养条件进行研究。结果表明:叶片和悬浮细胞用含有0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)和0.6mol/L甘露醇的Cell ProtoplastWash(60M-CPW)溶液25℃预处理1h... 详细信息

以鹅掌楸属植物北美鹅掌楸的悬浮细胞和组培苗叶片为材料,对北美鹅掌楸原生质体分离、纯化与培养条件进行研究。结果表明:叶片和悬浮细胞用含有0.1%2-吗啉乙磺酸(MES)和0.6mol/L甘露醇的Cell ProtoplastWash(60M-CPW)溶液25℃预处理1h效果最好;悬浮细胞最佳酶解液为60M-CPW+1%纤维素酶+1%半纤维素酶+0.2%果胶酶Y-23+0.1%MES,每克材料25℃酶解6h有效原生质体产量可以达到3×106个;叶片最佳酶解液为60M-CPW+2%纤维素酶+1%半纤维素酶+0.2%果胶酶Y-23+0.1%MES,每克材料25℃酶解10h有效原生质体产量可以达到11×106个;悬浮细胞原生质体易于培养,在KM8p+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA培养基中培养25d可形成肉眼可见的愈伤组织。

关键词：北美鹅掌楸原生质体酶解条件愈伤组织

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鹅掌楸配子选择与雄性繁殖适合度

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植物学报 2010年第1期45卷 52-58页

作者：冯源恒李火根张红莲南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

在多父本等量花粉混合授粉的交配实验设计基础上,利用SSR分子标记对其子代进行父本分析,研究鹅掌楸的配子选择与雄性繁殖适合度。参试亲本为鹅掌楸2个种的5个单株(鹅掌楸(Liriodendron chinense)2株,即FY和LS;北美鹅掌楸(***)3株,即LYS... 详细信息

在多父本等量花粉混合授粉的交配实验设计基础上,利用SSR分子标记对其子代进行父本分析,研究鹅掌楸的配子选择与雄性繁殖适合度。参试亲本为鹅掌楸2个种的5个单株(鹅掌楸(Liriodendron chinense)2株,即FY和LS;北美鹅掌楸(***)3株,即LYS、MSL和NK)。结果表明:鹅掌楸的配子选择个体间差异较大。作为母本,NK和LYS倾向于选择异种雄配子,而MSL和LS则倾向于选择同种雄配子;在同种雄配子的选择中,NK、LYS和LS倾向于自交,而MSL则倾向于异交。以北美鹅掌楸为母本时,北美鹅掌楸与鹅掌楸的雄性繁殖贡献率分别为45.5%和54.5%,北美鹅掌楸的雄性繁殖适合度为鹅掌楸的0.556倍。以鹅掌楸为母本时,二者的繁殖贡献率分别为15.6%和84.4%,北美鹅掌楸的雄性繁殖适合度为鹅掌楸的0.123倍。总体上看,鹅掌楸的雄性繁殖适合度高于北美鹅掌楸,鹅掌楸与北美鹅掌楸均表现为自交亲和。

关键词：配子选择鹅掌楸雄性繁殖适合度父本分析 SSR

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植物干细胞中WUS/CLV反馈调控机制的研究进展

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林业科学 2011年第4期47卷 159-165页

作者：王占军陈金慧施季森南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

回顾植物顶端、根端和侧生分生组织的模式结构,以及干细胞区的WUSCHEL/CLAVATA(WUS/CLV)反馈调控机制研究进展发现,3种分生组织不仅都具有长期潜在的维持原始细胞启动状态的功能,而且可能都存在调控相邻干细胞分裂、分化的干细胞区。茎... 详细信息

回顾植物顶端、根端和侧生分生组织的模式结构,以及干细胞区的WUSCHEL/CLAVATA(WUS/CLV)反馈调控机制研究进展发现,3种分生组织不仅都具有长期潜在的维持原始细胞启动状态的功能,而且可能都存在调控相邻干细胞分裂、分化的干细胞区。茎端分生组织中和根端分生组织中分别存在WUS/CLV和WOX5/CLE40反馈调控机制,2种反馈调控机制都具有维持干细胞区的分裂及其与其他组织形成之间的动态平衡功能。而有关植物尤其是木本植物的维管形成层组织中WUS/CLV反馈调控机制的报道不多,文中就这方面的研究进行综述和展望。

关键词：植物干细胞茎端分生组织根端分生组织维管形成层分生组织 WUS基因 CLV基因反馈调控机制

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一个与亚洲百合无花粉性状紧密连锁的SRAP标记

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分子植物育种 2015年第10期13卷 2299-2304页

作者：王帅辛昊阳甄艳刘光欣施季森匡华琳席梦利南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室南京210037

为了探讨亚洲百合无花粉性状的分子遗传机制,筛选与该性状紧密连锁的分子标记,实现分子辅助选择。本研究以无花粉与有花粉亚洲百合杂交创制的F1单株为试验材料,采用BSA法,对亚洲百合无花粉性状进行SRAP标记分析。在无花粉基因池和有花... 详细信息

为了探讨亚洲百合无花粉性状的分子遗传机制,筛选与该性状紧密连锁的分子标记,实现分子辅助选择。本研究以无花粉与有花粉亚洲百合杂交创制的F1单株为试验材料,采用BSA法,对亚洲百合无花粉性状进行SRAP标记分析。在无花粉基因池和有花粉基因池之间共筛选了108对SRAP引物组合,获得了1对在两基因池间扩增存在显著差异的引物组合EM2/ME3,并成功对两基因池间扩增出的差异片段进行回收、克隆和测序,得到了该片段375 bp的碱基序列,并将该特异标记命名为E2M3-375。

关键词：亚洲百合无花粉 SRAP

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