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IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究

中国免疫学杂志 2023年第9期39卷 1814-1821页

作者：高云星付裕陈晓李泽朋何晓伟李先伟(指导) 皖南医学院药学院药理学教研室芜湖241002 皖南医学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室芜湖241002 皖南医学院临床医学院临床医学系芜湖241002

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗... 详细信息

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。

关键词：白细胞介素-33 核转录因子-κB Twist 上皮-间质转分化肺纤维化

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金黄色葡萄球菌色素改变对杀菌脂质敏感性的影响

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湖南医科大学学报 1989年第4期14卷 322-324页

作者：熊茁 FrankA.Kapral 湖南医科大学微生物学教研室美国俄亥俄州立大学医学院医学微生物学及免疫学系

经人工处理的方法获得一些金黄色葡萄球菌色素突变株后,分别用油酸和单油酸酯检测对它们的敏感性,同时与其亲代菌株的敏感性进行比较。实验发现色素突变株对这两种脂质的敏感性是不同的。

关键词：金葡萄色素油酸类突变

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白芍总苷对EAT小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

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基础医学与临床 2019年第8期39卷 1157-1162页

作者：童芳刘辉董群王萍皖南医学院医学微生物学与免疫学教研室

目的建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)小鼠模型,观察不同剂量白芍总苷(TGP)治疗组小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)和Th17细胞比例及其功能的变化。方法将EAT模型小鼠随机共分为模型(model)组、高剂量TGP(THD)组、中剂量TGP(TMD)组、低... 详细信息

目的建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)小鼠模型,观察不同剂量白芍总苷(TGP)治疗组小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)和Th17细胞比例及其功能的变化。方法将EAT模型小鼠随机共分为模型(model)组、高剂量TGP(THD)组、中剂量TGP(TMD)组、低剂量TGP(TLD)组和雷公藤多苷(TII)组共5组;real-time PCR检测脾细胞中Foxp3 mRNA和RORγt mRNA的表达;流式细胞计量术检测脾细胞中Treg和Th17细胞的比例;ELISA检测血清中TGF-β1和IL-17的水平;化学发光法检测血清中抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)的水平。结果TGP处理组(包括低、中和高剂量组)Th17细胞比例较模型组明显降低(P<0.001);中和高剂量TGP组Foxp3 mRNA表达量较模型组明显增高(P<0.05);Treg细胞比例较模型组明显增高(P<0.01,P<0.05);IL-17浓度较模型组明显降低(P<0.01,P<0.05);TGAb浓度较模型组明显降低(P<0.05);中剂量TGP组TGF-β1浓度较模型组显著增高(P<0.01)。结论TGP能调节Treg/Th17免疫平衡,有利于EAT疾病的转归,其中以中和高剂量TGP组疗效显著。

关键词：实验性自身免疫性甲状腺炎抗甲状腺球蛋白抗体白芍总苷 Treg/Th17免疫平衡雷公藤多苷

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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 523-532页

作者：杨雨婷李玉洁余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 详细信息

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 PE22/PPE36融合蛋白巨噬细胞

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结核分枝杆菌ESX-1分泌系统与宿主巨噬细胞相互作用的研究进展

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中国人兽共患病学报 2023年第12期39卷 1218-1225页

作者：余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能... 详细信息

结核分枝杆菌(Mtb)侵入宿主细胞并在宿主细胞中持续存在是Mtb感染引起致病的重要原因。当Mtb感染宿主时,可与宿主巨噬细胞(M?)相互作用并调节M?的功能,影响机体的固有免疫和适应性免疫应答反应。ESX-1分泌系统作为Mtb的主要分泌系统,能将Mtb分泌的蛋白质转运到宿主细胞中,发挥毒力及免疫调节作用;某些分泌蛋白具有高度免疫原性,并是强有效的T细胞抗原,可作为结核疫苗设计及结核病诊断的重要抗原。对ESX-1分泌系统与M?相互作用过程的机制研究是分析Mtb毒力因子的致病机理及疫苗研发的途径之一。因此,本文对Mtb的ESX-1分泌系统组成以及分泌蛋白对M?调控作用进行综述,分析ESX-1分泌系统因子在Mtb与宿主相互作用中发挥的作用,对于开发新的结核疫苗和药物控制结核病至关重要。

关键词： ESX-1分泌系统巨噬细胞结核分枝杆菌

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PcDNA3.1-rhGM-CSF表达质粒的构建及其对K562细胞生长与分化的影响作用

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中国免疫学杂志 2010年第6期26卷 494-497,502页

作者：朱红杨晓红王亚平唐恩洁重庆医科大学基础医学院重庆400042 川北医学院南充637000 川北医学院医学微生物学与免疫学教研室南充637000

目的:观察GM-CSF对髓系白血病细胞(K562)生长、分化的影响作用。方法:采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体中,构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核表达载体。经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定确认,转染人K... 详细信息

目的:观察GM-CSF对髓系白血病细胞(K562)生长、分化的影响作用。方法:采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体中,构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核表达载体。经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定确认,转染人K562髓系白血病细胞、72小时后采用细胞形态学检测、MTT试验、免疫组化技术观察和分析PcD-NA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其影响该细胞生长与分化的作用。结果:①成功构建PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;②重组质粒PcDNA3.1-rhGM-CSF能在K562细胞中表达,并诱导K562细胞向单核细胞系、巨噬细胞系分化;③K562细胞增殖受到明显抑制。结论:成功构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;转染K562细胞能向单核细胞系、巨噬细胞系分化。

关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子重组表达载体细胞分化 K562

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生物技术专业免疫学教学的改革与实践

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2011年第5期13卷 404-406页

作者：袁桂峰刘菁梁爽骆耐香黄大林陈森洲桂林医学院微生物学与免疫学教研室桂林541004

通过对生物技术专业免疫学教学改革的探索,包括讲好绪论,引导学生通览免疫学全貌;调整教学内容,与生物技术专业紧密相连;利用多媒体手段,开展直观教学;加强讨论式、启发式教学,提高学生学习兴趣;改革实验教学内容,适应专业发展等,提高... 详细信息

通过对生物技术专业免疫学教学改革的探索,包括讲好绪论,引导学生通览免疫学全貌;调整教学内容,与生物技术专业紧密相连;利用多媒体手段,开展直观教学;加强讨论式、启发式教学,提高学生学习兴趣;改革实验教学内容,适应专业发展等,提高了生物技术专业免疫学的教学质量和教学效果。

关键词：免疫学教学改革生物技术

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应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变

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广西医科大学学报 2008年第6期25卷 857-859页

作者：王险峰陈森洲刘福英桂林医学院微生物学与免疫学教研室桂林541000 河北医科大学实验动物中心石家庄050017

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4，用47条随机引物经PCR扩增，对扩增产物进行电泳，凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均... 详细信息

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4，用47条随机引物经PCR扩增，对扩增产物进行电泳，凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均能扩增出明显的条带，条带数多为4-10条，片段大小在200-2000bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性，表现为带的有无、移动和强弱差异。结论：RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测。

关键词：小鼠肝癌H22细胞克隆株随机扩增多态性DNA(RAPD) 遗传检测

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大学生口腔念珠菌分离株药物敏感性分析

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中国公共卫生 2010年第2期26卷 137-138页

作者：武有聪陈兆芳郭利军王涛白丽大理学院基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000 云南大理卫生学校病药微教研室

目的探讨在校大学生口腔念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性。方法选取云南省某高校在校学生1 179名,采集其口腔咽拭子,分离疑似念株菌84株。采用微量液基稀释法,测定念珠菌对氟康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和两性霉素B等4种常用抗真菌药物的敏... 详细信息

目的探讨在校大学生口腔念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性。方法选取云南省某高校在校学生1 179名,采集其口腔咽拭子,分离疑似念株菌84株。采用微量液基稀释法,测定念珠菌对氟康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和两性霉素B等4种常用抗真菌药物的敏感性,以最低抑菌浓度(M IC值)进行判定。结果84株念珠菌对上述4种药物敏感性的几何均数分别为3.175,0.070,0.272和0.43 mg/L;耐药率分别为8.3%,9.5%,7.1%和8.3%;非白色念珠菌对酮康唑和两性霉素B的耐药率均高于白色念珠菌(P<0.05);有3株念株菌对2种或2种以上药物同时耐药。结论在校大学生口腔念珠菌中存在一定程度的耐药株和交叉耐药现象,尤其是非白色念珠菌。

关键词：药物敏感性念珠菌属口腔大学生

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微生物学与免疫学互动式实验教学的探索

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医学教育 2002年第5期22卷 35-36页

作者：刘菁桂林医学院微生物学与免疫学教研室广西桂林541001

微生物学与免疫学实验教学改革的方向是互动式教学 ,它不仅表现为教学模式的改变 ,还体现在实验内容的革新上 ,有利于充分发挥学生学习的积极性和主动性 ,培养学生基本实验操作技能、独立思考和综合分析能力、独立工作和创新能力 ,能够... 详细信息

微生物学与免疫学实验教学改革的方向是互动式教学 ,它不仅表现为教学模式的改变 ,还体现在实验内容的革新上 ,有利于充分发挥学生学习的积极性和主动性 ,培养学生基本实验操作技能、独立思考和综合分析能力、独立工作和创新能力 ,能够适应 2

关键词：微生物学与免疫学实验教学改革互动式教学

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