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中国毒理学会第六届全国毒理学大会

作者：肖芸张爱华贵阳医学院卫生毒理学教研室

目的了解亚砷酸钠（NaAsO）染毒人皮肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）对其着色性干皮病基因D（XPD）启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响。方法 NaAsO 3.13,6.25,12.5和25μmol·L重复间隔处理HaCaT细胞72 h（NaAsO处理HaCaT细... 详细信息

目的了解亚砷酸钠（NaAsO）染毒人皮肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）对其着色性干皮病基因D（XPD）启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响。方法 NaAsO 3.13,6.25,12.5和25μmol·L重复间隔处理HaCaT细胞72 h（NaAsO处理HaCaT细胞24 h,隔天再次用NaAsO进行相同处理,重复3次）;同时以不染毒HaCaT细胞为空白对照(0μmol·L);各剂量组及空白对照均设三个平行样本。重亚硫酸盐测序-定量甲基化特异性PCR法检测XPD基因启动子区CpG岛甲基化状态,实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA表达,Western blot法检测XPD蛋白表达。结果 NaAsO 3.13,6.25,12.5和25μmol·L处理细胞后,XPD基因甲基化参照百分比（PMR）分别为（1.55 -0.76）%,（4.84±1.98）%,（22.99±5.1）%和（33.69±7.57）%,空白对照未检出甲基化,差异有统计学意义（X=13.13,P<0.05）。对PCR产物进行电泳,NaAsO 6.25,12.5和25μmol·L剂量组出现阳性条带,进行凝胶DNA回收并克隆测序,测序结果显示NaAsO 6.25,12.5和25μmol·L组XPD基因启动子区13个CpG位点甲基化率分别为11.1%,42.7%和64.1%,NaAsO 12.5和25μmol·L组分别与NaAsO 6.25μmol·L组比较差异有统计学意义（P<0.05）。随NaAsO剂量增加XPD mRNA转录表达明显降低（F=31.93,P<0.05）,NaAsO 6.25,12.5和25μmOl·L组中XPDμmol·L表达明显低于空白对照,差异有统计学意义（P<0.05）。与空白对照比较,XPD蛋白表达在低剂量组(3.13μmol·L)略有升高,后随NaAsO浓度的增加而逐渐降低（F=110.77,P<0.05）,NaAsO 6.25,12.5和25μmol·L组中XPD蛋白表达明显低于空白对照,差异有统计学意义（P<0.05）。结论砷可导致XPD基因高甲基化改变,继而引起XPD基因mRNA及蛋白表达受抑,其可能通过影响XPD蛋白对受损DNA的解旋,继发性抑制DNA修复,促进砷中毒乃至皮肤癌的发生发展。

关键词：亚砷酸钠着色性干皮病基因D 甲基化 mRNA HaCaT细胞

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普鲁卡因拮抗氰化物中毒的作用及其对小鼠脑神经元的影响

普鲁卡因拮抗氰化物中毒的作用及其对小鼠脑神经元的影响

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中国科协首届学术年会

作者：姜声扬刘祖舜庄勋南通医学院卫生毒理学教研室

本文主要对盐酸普鲁卡因单独、和/或结合亚硝酸钠、硫代硫酸钠应用后,对其拮抗氰化物中毒的作用进行了研究。通过对小鼠预腹腔注射亚硝酸钠(43.9mg/kg)、硫代

关键词：普鲁卡因氰化物中毒硫代硫酸钠

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葡多酚对小鼠乙醇性损伤肝细胞Caspase-3和PCNA表达的影响

葡多酚对小鼠乙醇性损伤肝细胞Caspase-3和PCNA表达的影响

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：綦晓房蕾葛均辉钟进义潍坊医学院卫生毒理学教研室

【目的】观察葡多酚(GPC)对小鼠乙醇性损伤肝细胞PCNA和Caspase-3表达的影响。【方法】1)将小鼠随机分为正常对照组,乙醇对照组和GPC低、中、高剂量组5组,除正常对照组外,其余四组小鼠均每天经口灌胃给予4g/kg bw乙醇,同时分别给予不同... 详细信息

【目的】观察葡多酚(GPC)对小鼠乙醇性损伤肝细胞PCNA和Caspase-3表达的影响。【方法】1)将小鼠随机分为正常对照组,乙醇对照组和GPC低、中、高剂量组5组,除正常对照组外,其余四组小鼠均每天经口灌胃给予4g/kg bw乙醇,同时分别给予不同剂量的GPC,正常对照组只给蒸馏水。小鼠每日灌胃1次,30d后处死,测定肝重、体重和肝脏指数,取肝组织用免疫组化法检测Caspase-3和PCNA表达水平。2)将正常小鼠肝脏匀浆制成肝细胞悬液,加入RPMI1640培养基,调细胞密度至1×10～6/ml,接种于96孔培养板(0.1m1/孔),乙醇对照组和GPC各剂量组加入乙醇10ml/L,同时GPC各剂量组分别加入不同浓度的GPC0.1 ml置于37℃,5%C02培养箱中培养,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肝细胞增殖活性。【结果】1)Caspase-3阳性表达细胞的胞浆中出现棕黄色或褐色颗粒。本实验GPC高剂量组Caspase-3蛋白阳性细胞数少,染色浅,呈弱表达,其阳性表达率为11.48%。乙醇对照组的阳性细胞数多,染色深,呈强表达,阳性表达率为34.30%。两组差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA为胞核表达,呈棕黄色或褐色颗粒。本实验GPC高剂量组PCNA.阳性表达的细胞多,染色深。乙醇对照组则阳性表达细胞数少,染色浅。两组阳性细胞表达率分别为39.26%和9.5%,差异具有统计学意义(p<0.05)。2)GPC高剂量组和乙醇对照组的肝细胞增殖活性分别为0.423±0.125和0.306±0.063。两组间差别具有统计学意义(p<0.05)。【结论】GPC可抑制乙醇诱发的小鼠肝细胞增殖损伤,降低肝细胞中Caspase-3的表达,从而抑制乙醇损伤肝细胞的凋亡,对小鼠乙醇性肝损伤有一定的防护作用。

关键词：葡多酚乙醇性肝损伤 Caspase-3 PCNA

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三硝基甲苯亚急性中毒动物实验观察

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河北医科大学学报 1988年第5期 271-272页

作者：禚玉珍高优真河北医学院卫生系毒理学教研室

本实验观察到动物TNT中毒后,骨髓细胞粒系统有受抑制现象,淋巴母细胞转化显著降低。表明TNT有影响骨髓细胞粒系统的造血机能和抑制细胞免疫功能的毒作用。

关键词：三硝基甲苯中毒骨髓细胞细胞免疫

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氯化甲基汞对不同发育阶段小鼠脑组织神经元c-fos基因表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2002年第5期28卷 467-470页

作者：李永进郭杰毕晓颖贾镭宋春梅石玮李志超第四军医大学吉林军医学院吉林吉林132013 吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室

目的 :探讨氯化甲基汞 ( Methylmercury chloride,MMC)对不同发育阶段小鼠大、小脑组织神经元 c- fos表达的影响。方法 :选用 1、4、8、1 6、2 8天龄和成年 ( P1、P4、P8、P1 6、P2 8、AD)雄性昆明系小鼠 ,实验组腹腔注射 1 0 mg· ... 详细信息

目的 :探讨氯化甲基汞 ( Methylmercury chloride,MMC)对不同发育阶段小鼠大、小脑组织神经元 c- fos表达的影响。方法 :选用 1、4、8、1 6、2 8天龄和成年 ( P1、P4、P8、P1 6、P2 8、AD)雄性昆明系小鼠 ,实验组腹腔注射 1 0 mg· kg-1MMC,对照组腹腔注射同体积的生理盐水 ,染毒后各天龄组小鼠按下述时间点在麻醉状态下取脑组织 ,P8组小鼠在 30、45、60、1 2 0和 1 80 min时间点及其余各组在 45 min时间点迅速取脑组织 ,常规石蜡包埋 ,采用原位杂交法观察 MMC对大、小脑神经元 c- fos基因表达的影响。结果 :P8小鼠大脑和小脑 c- fos m RNA阳性细胞率在第 30分钟时开始增加 ,45 min时间点最高 ,随着时间的延长逐渐减少 ;P8实验组 45 min阳性表达率小脑高于大脑( P<0 .0 5 ) ;45 min时间点实验组大脑和小脑 c- fos m RNA阳性细胞率随小鼠天龄的增加而减少 ;P1、P4、P8天龄组大脑阳性细胞率高于对照组高 ( P<0 .0 5 ) ;P1、P4、P8、P1 6、P2 8天龄组小脑阳性细胞率高于对照组 ( P<0 .0 5 )。结论 :MMC可诱导小鼠大、小脑神经元 c- fos基因表达 ,这可能是MMC神经损伤的机理之一。

关键词：氯化甲基汞 c-fos 基因表达原位杂交脑组织神经元

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骨髓间充质干细胞治疗皮肤深Ⅱ度烧伤的实验研究

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吉林大学学报（医学版） 2005年第3期31卷 334-336页

作者：呼和塔娜郭丽陈强王建辉尹飞李鹏范洪学吉林大学公共卫生学院毒理学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院医学遗传学教研室吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院骨科吉林长春130031

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对皮肤深度烧伤的疗效。方法:体外培养扩增雄性豚鼠骨髓MSCs,以2×10 6 ·m L- 1 、2×10 7·m L- 1 细胞密度,移植给皮肤深度烧伤的雌性受体鼠创面,对创面的愈合面积进行计算,用HE、... 详细信息

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对皮肤深度烧伤的疗效。方法:体外培养扩增雄性豚鼠骨髓MSCs,以2×10 6 ·m L- 1 、2×10 7·m L- 1 细胞密度,移植给皮肤深度烧伤的雌性受体鼠创面,对创面的愈合面积进行计算,用HE、Masson染色进行组织形态学观察。结果:治疗组的皮肤创面修复较好,HE染色结果显示治疗组的真皮与表皮结构清晰,表皮各层清楚,而对照组的皮肤创面细胞各层次不清楚。Masson染色结果显示治疗组皮肤创面新生被覆上皮内,胶原纤维排列较整齐;对照组胶原增粗、排列不规则。2×10 6 ·m L- 1 、2×10 7·m L- 1 不同细胞密度的治疗侧之间比较差异无显著性。结论:骨髓MSCs可促进皮肤深度烧伤的愈合,对皮肤深度烧伤具有明显的疗效。

关键词：骨髓祖代细胞/移植烧伤细胞移植

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细胞色素P4501A1基因多态性与肺癌遗传易感性的研究

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中华医学遗传学杂志 1999年第1期16卷 26-28页

作者：胡毅玲张桥中山医科大学公共卫生学院分子毒理学研究室暨南大学医学院流行病学教研室

目的探讨细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（ＣＹＰ１Ａ１）ＭｓｐⅠ基因型和异亮氨酸（Ｉｌｅ）－缬氨酸（Ｖａｌ）基因型与肺癌易感性的关系。方法以病例－对照的研究方法，采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＡＳＡ技术检测５９例原发性肺癌、５９名住院... 详细信息

目的探讨细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（ＣＹＰ１Ａ１）ＭｓｐⅠ基因型和异亮氨酸（Ｉｌｅ）－缬氨酸（Ｖａｌ）基因型与肺癌易感性的关系。方法以病例－对照的研究方法，采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＡＳＡ技术检测５９例原发性肺癌、５９名住院对照和７３名健康对照ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐⅠ和Ｉｌｅ－Ｖａｌ基因型。结果ＭｓｐⅠ纯合突变型Ｃ和缬氨酸纯合型（Ｖａｌ／Ｖａｌ）在病例组各占２５．４％和１１．９％，对照组中平均各占１６．５％和７．０％，相比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。未发现吸烟与ＭｓｐⅠＣ型和Ｖａｌ／Ｖａｌ型有关。在非吸烟组ＭｓｐⅠＣ型者患肺癌的危险性（ＯＲ）是其他基因型的２．４３～２．９１倍（９５％可信限：１．１２～５．２５和１．１３～７．５２），ＭｓｐⅠ杂合型Ｂ在健康对照和病例组分别占６１．６％和３７．３％（Ｐ＜０．０１），ＯＲ为０．３７（９５％可信限：０．１７～０．８０）。Ｉｌｅ／Ｖａｌ杂合型在医院对照组占８１．４％，病例组为５５．９％，差异极显著（Ｐ＜０．０１），ＯＲ为０．２９（９５％可信限：０．１２～０．７２）。有家族肿瘤史的肺癌Ｖａｌ／Ｖａｌ型占５０％（３／６），显著高于对照组（０／１８），Ｐ＜０．０１。结论ＭｓｐⅠＣ型?

关键词：肺癌 CYP1A1基因易感性基因多态性

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大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1基因RNA干扰表达质粒构建与鉴定

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中国职业医学 2012年第1期39卷 1-4页

作者：高羽亭黄明元刘林华梁海荣唐焕文吉林大学公共卫生学院毒理学教研室吉林长春130021 广东医学院公共卫生学院东莞523808

目的构建并筛选大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因的RNA干扰(RNAi)表达质粒,为职业性疾患的基因治疗探索新途径。方法根据基因序列数据库中报道的PARP-1基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷... 详细信息

目的构建并筛选大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因的RNA干扰(RNAi)表达质粒,为职业性疾患的基因治疗探索新途径。方法根据基因序列数据库中报道的PARP-1基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体Li-pofectamineTM2000介导转染大鼠骨髓间充质干细胞。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染细胞中PARP-1 mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1 RNAi质粒。结果 4种重组PARP-1 RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确。转染后48 h,转染质粒shRNA-PARP-1-532的细胞PARP-1基因抑制效果最明显,mRNA的转录水平下降了78%,可作为后续实验的有效质粒。结论成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为探索PARP-1基因在疾病中的作用奠定了基础。

关键词：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 短发夹RNA 骨髓间充质干细胞转染大鼠

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血小板上清液对家兔生长板软骨细胞增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 194-198页

作者：汪卓赟宇丽李秀东李发涛吴凤麟暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 吉林大学公共卫生学院毒理学教研室吉林长春130021

目的:观察人血小板上清液(hum an p latelet supernatant,hPS)对体外培养幼兔生长板软骨细胞增殖与分化的影响。方法:原代分离培养兔生长板软骨细胞并稳定传代,同时添加不同体积分数的hPS,采用W ST-8染色法检测细胞增殖倍数;A lc ian B ... 详细信息

目的:观察人血小板上清液(hum an p latelet supernatant,hPS)对体外培养幼兔生长板软骨细胞增殖与分化的影响。方法:原代分离培养兔生长板软骨细胞并稳定传代,同时添加不同体积分数的hPS,采用W ST-8染色法检测细胞增殖倍数;A lc ian B lue法测基质蛋白多糖含量;羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量,酶动力学方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:体积分数5%hPS组显著促进软骨细胞的增殖以及基质蛋白多糖的合成,但形态上失去其软骨表型。各体积分数组hPS对总胶原的合成与对照组相比差异没有显著性意义,hPS抑制了ALP的活性。结论:hPS可以有效地促进生长板软骨细胞的增殖,抑制其肥大化。

关键词：血小板上清液生长板软骨细胞细胞增殖组织工程

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孕烷X受体及其SNP检测方法

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国外医学（卫生学分册） 2004年第5期31卷 272-277页

作者：刘冬英朱心强浙江大学医学院卫生毒理学教研室浙江杭州310031

细胞色素P4 5 0 3A(CYP3A)是生物体内重要的代谢酶 ,是临床上许多药物相互作用和药物反应产生个体差异的基础。孕烷X受体 (PXR)是CYP3A基因表达的转录活化因子 ,PXR的基因多态性可能是CYP3A表达和活性存在个体差异的直接原因。基因多态... 详细信息

细胞色素P4 5 0 3A(CYP3A)是生物体内重要的代谢酶 ,是临床上许多药物相互作用和药物反应产生个体差异的基础。孕烷X受体 (PXR)是CYP3A基因表达的转录活化因子 ,PXR的基因多态性可能是CYP3A表达和活性存在个体差异的直接原因。基因多态性最常见的是单核苷酸多态性 (SNP) ,其检测方法较多 ,荧光偏振检测技术是其中一种较有发展前景的新方法。明确人群PXR基因的SNP将对药物的安全、有效性预测。

关键词：细胞色素P4503A孕烷X受体单核苷酸多态性检测方法

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