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亚砷酸钠对HaCaT细胞MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2、DNA甲基转移酶1、组蛋白去乙酰化酶-1结合的影响

中华地方病学杂志 2013年第1期32卷 16-20页

作者：张博潘雪莉张爱华贵阳医学院公共卫生学院毒理学教研室 550004

目的观察亚砷酸钠（NaAsO：）对人肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2（MeCP2）、DNA甲基转移酶1（DNMTl）及组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）结合情况的影响，为深化阐释砷毒作用机制提供依据。方法分别以0... 详细信息

目的观察亚砷酸钠（NaAsO：）对人肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2（MeCP2）、DNA甲基转移酶1（DNMTl）及组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）结合情况的影响，为深化阐释砷毒作用机制提供依据。方法分别以0．00（空白对照）、3．13、6，25、12．50、25．00μmol／LNaAs02重复间隔处理HaCaT细胞72h（NaAs02处理24h，隔天再次相同处理，重复3次），以人表皮鳞癌细胞株（A431）作为阳性对照。定量染色质免疫共沉淀技术（Q—CHIP）检测MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域及MGMT基因编码区ChIP3区域MeCP2、DNMTl、HDACl结合情况。结果各组HaCaT细胞MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域MeCP2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平比较，差异有统计学意义（F值分别为7．387、84．634、78．442和19．263、69．649、26．546，P均〈0．05）；其中各N以s02处理组CHIPl、CHIP2区域MeCI〉2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平[3．13μmol／LNaAs02处理组：（136．00±16．97）％、（145．00±2．83）％、（88．50±19．09）％和（106．50±37．48）％、（112．34±8．73）％、（59．71±8．49）％；6．25μmol／LNaAs02处理组：（130．00±42．43）％、（154．50士4．95）％、（101．00±1．27）％和（88．50±3．54）％、（134．32±2．82）％、（102．75±19．91）％；12．50~mol／LNaAs02处理组：（141．50±23．33）％、（161．50±7．78）％、（125．00±U．31）％和（119．50±24．75）％、（171．59±3．54）％、（167．61±10．61）％；25，00μmol／LNaAs02处理组：（134．50±43．13）％、（472．50±50．20）％、（383．50±30．41）％和（180．09±12．73）％、（348．50±27．58）％、（158．45±12．02）％]均高于空白对照组[（51．50±9．19）％、（82．00±12．73）％、（25．03±2．91）％和（37．02±4．24）％、（91．56±26．16）％、（19．09±2．90）％，P均〈0．05]。各组HaCaT细胞MGMT基因编码区CHIP3区域MeCP2蛋白结合水平比较，差异无统计学意义（F=1．670，P〉0．05），而DNMTl、HDACl蛋白结合水平比较，差异有统计学意义（F值分别为4．404、9．863，P均〈0．05），其中25．00I,Lmol／LNaAs02处理组DNMTl、HDACl蛋白结合水平[（615．85±29．63）％、（306．09±59．40）％]与空白对照组[（99．70±12．02）％、（92．45，±48．79）％]比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论MeCP2可结合于砷所致高甲基化MGMT基因转录调控区。通过招募DNMTl及HDACl使组蛋白去乙酰化，同时DNMTl可结合于MGMT基因编码区，以非甲基化DNA结合蛋白（IVIBD）依赖的方式招募HDACl，通过染色质重塑方式导致MGMT基因沉默，可能是砷毒性表现的早期分子事件。

关键词：砷中毒基因 O(6)-甲基鸟嘌呤DNA转移酶甲基-CpG-结合蛋白2 DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶组蛋白脱乙酰基酶类

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以转化应用为导向加强砷毒作用机制研究

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中华预防医学杂志 2013年第9期47卷 774-776页

作者：张爱华贵阳医学院公共卫生学院卫生毒理学教研室 550004

砷是一种环境毒物,多以化合物的形式广泛存在于自然界中,地球化学元素分布不均和工农业用途均会造成环境污染,导致环境中居民发生急慢性砷中毒甚至癌症.地球化学性因素导致的地方性砷中毒（以下简称地砷病）是影响面广、后果严重的世界... 详细信息

砷是一种环境毒物,多以化合物的形式广泛存在于自然界中,地球化学元素分布不均和工农业用途均会造成环境污染,导致环境中居民发生急慢性砷中毒甚至癌症.地球化学性因素导致的地方性砷中毒（以下简称地砷病）是影响面广、后果严重的世界性公共卫生问题,包括因长期饮用高砷地下水导致的饮水型砷中毒和因燃用高砷煤导致空气和食物污染而引起的燃煤型砷中毒.目前地砷病至少威胁着22个国家和地区的5000多万人口;其中饮水型砷中毒在我国大陆地区9个省（自治区）存在,受威胁人口约185万,燃煤型砷中毒是全球惟一存在于我国贵州和陕西两省的病型,受威胁人口122万[1].

关键词：地砷病毒作用机制燃煤型砷中毒饮水型砷中毒导向转化地方性砷中毒公共卫生问题

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表观遗传学：揭示砷中毒机制及改进防治策略的新路径

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中华地方病学杂志 2013年第1期32卷 1-2页

作者：张爱华 550004 贵阳医学院公共卫生学院毒理学教研室

随着后基因组时代的到来。人们逐渐发现生物体除了存在以DNA序列为基础的遗传编码信息外。还存在决定遗传编码信息表达的调控机制，表观遗传学（epigenetics）是针对后者研究基因演绎为表型过程和机制的一门新兴遗传学分支学科。遗传学... 详细信息

随着后基因组时代的到来。人们逐渐发现生物体除了存在以DNA序列为基础的遗传编码信息外。还存在决定遗传编码信息表达的调控机制，表观遗传学（epigenetics）是针对后者研究基因演绎为表型过程和机制的一门新兴遗传学分支学科。遗传学信息提供了生命所必须蛋白质的模板，而表观遗传学信息则提供何时、何地以及如何应用上述遗传学信息的指令，在时间、空间顺序上调控基因的表达。表观遗传学主要研究内容有DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、遗传印记、X染色体失活、RNA调控等。

关键词：表观遗传学砷中毒基因表达

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Hsps基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达

Hsps基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达

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中国环境诱变剂学会致突变、致畸学术讨论会

作者：魏会妙阎政礼付虎朱勇飞张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海 200433 湖南师范大学医学院预防医学系湖南长沙 410013

背景与目的：研究热休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达情况.材料与方法：ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验、对照两组,实验组和对照组各56只.于孕11 d(gestational day 11,GD11),经... 详细信息

背景与目的：研究热休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达情况.材料与方法：ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验、对照两组,实验组和对照组各56只.于孕11 d(gestational day 11,GD11),经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸、对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD12～GD18取两组胎鼠的后肢,利用实时荧光定量PCR检测Hsps家族各基因的表达丰度(各基因引物序列此处不列出).PCR反应体系如下：SYBR buffer 6.5μl,eDNA 1.0μl,上下游引物各0.75μl,Mili Q水16.0μl.反应条件为：95℃ 10min,95℃ 15 s、60℃ 1min(40个循环).结果：6个家族的36种Hsps在实验组和对照组后肢中均有表达,除HspA2外,其它基因在实验组和对照组的表达有明显差异.实验组后肢的表达水平高于(P＜0.05)同一胚龄的对照肢的基因及时间有：Hsp 20(Hspb6)、Grp170、HspA 1A、Hspb3、HspA 14、HspA9、Hsp90AB1、Trap1、Hsp 105、Hsp25、HspA8在GD 12-GD 18,HspB5、HspB7、Hsp 90AA1、Hsp27、Hsp40、Hsp65在GD12-GD17,HO-1、HspA 1B在GD 12-GD 15,HspB2、HspB10、HspA 12A、HspB9、pg1、HspB4、Grp78、HspA 12B在GD 16-GD 18,HspA 1L、Hsp22、Hsp10、Hsp60在GD17-GD18.实验组后肢的表达水平低于(P＜0.05)同一胚龄的对照肢的基因及时间有：Hspa13、Grp94、Hsp110在GD12-18,HspA1L、HspB8、Hsp10、Hsp60在GD 12-GD 16,Hsp47、HspB2、HspB10、HspA 12A、Apg1、HspB4、Grp 78在GD12-GD15,HspB9在GD12-GD14,HspA12B在GD15,HspA 1B在GD16,Hsp27、Hsp40、Hsp65在GD 18.结论：HspA1L、HspB8 (Hsp22)、Hsp 10、Hsp60、Hsp47、HspB2、HspB10、 HspA12A、Apg1、HspB4、Grp78、HspB9在小鼠胚胎后肢的正常发育及异常发生时可能有重要作用,HspA 13、Grp94、Hsp110可能是小鼠后肢的发育相关基因.

关键词：胚胎后肢热休克蛋白发育

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穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖的影响

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遵义医学院学报 2014年第2期37卷 188-191页

作者：何亮康亚辉黄厚今王忠明遵义医学院公共卫生学院毒理学教研室贵州遵义563099 江苏省连云港市第二人民医院蚌埠医学院附属连云港医院江苏连云港222000

目的研究穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖的影响。方法在不同浓度的穿心莲内酯培养基中将人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)、HT-29(中分化)和Lovo(未分化)培养24、48、72 h,用MTT法检测穿心莲内酯对各种癌细胞的药物半数抑制浓度... 详细信息

目的研究穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖的影响。方法在不同浓度的穿心莲内酯培养基中将人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)、HT-29(中分化)和Lovo(未分化)培养24、48、72 h,用MTT法检测穿心莲内酯对各种癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50),比较穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株之间的增殖抑制的差异。结果穿心莲内酯对结肠癌细胞Caco-2、HT-29和Lovo有明显增殖抑制作用,且其抑制作用呈剂量效应和时间效应关系;低分化结肠癌细胞株对穿心莲内酯的敏感性高于分化程度较高的结肠癌细胞株。结论穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖抑制作用不同。

关键词：穿心莲内酯结肠癌细胞 MTT法

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燃煤型氟中毒病区人群血清中基质金属蛋白酶与氟斑牙关系

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环境与职业医学 2013年第9期30卷 658-661页

作者：黄华张爱华洪峰曾奇兵官志忠于燕妮贵阳医学院卫生毒理学教研室贵州550004 贵阳医学院病理学教研室贵州550004

[目的]探讨氟暴露人群血清中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9、MMP-13)活性变化与氟斑牙的关系。[方法]选择贵州省清镇市流长乡燃煤型氟中毒病区191例氟暴露者为调查对象,根据人群尿氟实际检测结果范围,将病区氟暴露者分为4组:<1.2mg/gC... 详细信息

[目的]探讨氟暴露人群血清中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9、MMP-13)活性变化与氟斑牙的关系。[方法]选择贵州省清镇市流长乡燃煤型氟中毒病区191例氟暴露者为调查对象,根据人群尿氟实际检测结果范围,将病区氟暴露者分为4组:<1.2mg/gC(r95例)、1.2mg/gCr～(43例)、1.8mg/gCr～(24例)和2.4mg/gCr～(29例);为了解其与氟斑牙程度的关系,根据氟斑牙临床分类诊断标准将氟暴露人群分为正常组(34例)、可疑+极轻组(37例)、轻度组(33例)、中度组(56例)、重度组(31例)。采用氟离子电极法测定氟暴露人群尿氟含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清样本中MMP-2、MMP-9、MMP-13的活性。[结果]①随着氟暴露人群尿氟水平增高,MMP-2、MMP-9、MMP-13的活性逐渐增高,其中尿氟1.2mg/gCr～、1.8mg/gCr～和2.4mg/gCr～组的MMP-2、MMP-9、MMP-13活性与<1.2mg/gCr组比较,差异有统计学意义(P<0.05);尿氟2.4mg/gCr～组与1.2mg/gCr～组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。尿氟2.4mg/gCr～组MMP-2和MMP-9的活性与1.8mg/gCr～组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②随着氟暴露人群氟斑牙程度的加重,MMP-2、MMP-9、MMP-13的活性逐渐增高,其中氟斑牙重度、中度组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05);重度组与可疑+极轻度组间差异有统计学意义(P<0.05)。③氟暴露人群尿氟与MMP-2、MMP-9、MMP-13活性呈正相关(r=0.808、r=0.795、r=0.790,P<0.05);氟斑牙程度与MMP-2、MMP-9、MMP-13活性呈正相关(r=0.332、r=0.358、r=0.316,P<0.05)。[结论]氟可能通过诱导MMP-2、MMP-9、MMP-13活性增高,影响骨代谢,进而导致氟斑牙的发生发展。

关键词：氟中毒煤基质金属蛋白酶氟斑牙

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谷胱甘肽硫转移酶P1基因DNA甲基化、mRNA和蛋白表达与燃煤污染型地方性砷中毒关系探讨

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中华地方病学杂志 2013年第1期32卷 7-12页

作者：杨婷婷张爱华黄晓欣董学新贵阳医学院公共卫生学院毒理学教研室 550004 解放军第四十四医院

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶P1（GSTPl）基因启动子区DNA甲基化、mRNA和蛋白表达与砷中毒的关系。方法123例砷中毒患者来自贵州省兴仁县交乐村燃煤污染型地方性砷中毒病区，按地方性砷中毒诊断标准（WS／T211-2001），其中轻度42例、中度4... 详细信息

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶P1（GSTPl）基因启动子区DNA甲基化、mRNA和蛋白表达与砷中毒的关系。方法123例砷中毒患者来自贵州省兴仁县交乐村燃煤污染型地方性砷中毒病区，按地方性砷中毒诊断标准（WS／T211-2001），其中轻度42例、中度41例，重度40例。在距病区约13km的非砷暴露村．选择47例正常健康人作为对照。根据知情同意的原则，采集被调查者的外周血，用PCR法检测外周血GSTPl基因启动子区DNA甲基化，用荧光实时定量PCR法检测GSTPlmRNA表达。取自愿手术治疗的53例砷中毒患者的皮肤病理标本，其中一般病变28例、癌前病变20例、癌变5例，以病理学诊断无异常的15例非肿瘤手术患者的皮肤组织为对照组。采用免疫组织化学（IHC）法检测皮肤组织中GSTPl蛋白的表达。结果在按病情分组中，外周血GSTPl基因DNA甲基化阳性率轻（28．57％，12／42）、中（57．10％，23／41）、重度（65．00％。26／40）砷中毒组与对照组（6．38％，3／47）比较差异有统计学意义（x。值分别为7．792、26．000、33．412，P均〈0．01）；在按皮肤病理诊断分组中，GSTPl基因DNA甲基化阳性率一般病变（21．43％，6／28）、癌前病变（50．00％，10／20）、癌变组（80．00％，4／5）与对照组（6．67％，1／15）比较差异有统计学意义（x。值分别为3．562、7．468、10．756，P均〈O．05）。GsTPl基因DNA甲基化阳性率随砷中毒患者病情及皮肤病理损害程度加重而升高（趋势x。=38．239、x。=13．659，P均〈0．01）。与对照组（0．18426）比较，中（0．08777）、重度（0．05693）砷中毒组外周血GSTPlmRNA表达显著降低（P均〈0．01），其中重度砷中毒组低于中度砷中毒组（P〈0．01）；与对照组（0．33845）、一般病变组（0．27674）比较，癌前病变组（0．10481）、癌变组（0．04370）GSTPlmRNA表达显著降低（P均〈0．01），其中癌变组显著低于癌前病变组（P〈0．01）。皮肤组织中GSTPl蛋白阳性表达率组间比较差异有统计学意义（x2=20．948，P〈0．05），其中癌前病变组（65．00％，13／20）、癌变组（40．00％，2／5）与对照组（100．00％，15／15）比较差异有统计学意义（x2=12．183、11．778，P均〈0．01）。皮肤病损程度与GSTPl蛋白表达强度经Spearman等级相关分析，呈负相关关系（r=-0．520，P〈0．05）。按GSTPl基因DNA甲基化分组，GSTPlmRNA和蛋白表达阳性率与非甲基化组（0．18707、95．74％）比较，甲基化组（0．03840、57．14％）显著降低（Z=9．032，P〈0．01；x2=23．134，P〈0．01）。结论砷中毒可通过导致人体GSTPl基因启动子区DNA甲基化，进而抑制其mRNA和蛋白表达，GSTPl基因在砷致病或致癌过程中起重要作用。

关键词：砷中毒煤谷胱甘肽硫转移酶P1 DNA甲基化转录基因表达

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猪带绦虫CDC37基因的克隆、表达与组织定位研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第1期31卷 23-26页

作者：黄江李波戴佳琳张爱华贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004 贵阳医学院公共卫生学院毒理学教研室贵阳550004

目的原核表达猪带绦虫(Taeniasolium)细胞分裂周期蛋白37(cell division cycle 37,TsCDC37),并对其进行组织定位和免疫原性研究。方法通过Blastx分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出TsCDC37基因,PCR扩增CDC37基因,以pET-28a(+)为载... 详细信息

目的原核表达猪带绦虫(Taeniasolium)细胞分裂周期蛋白37(cell division cycle 37,TsCDC37),并对其进行组织定位和免疫原性研究。方法通过Blastx分析从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出TsCDC37基因,PCR扩增CDC37基因,以pET-28a(+)为载体构建目的基因原核表达体系,在大肠埃希菌(***)BL-21/DE3中诱导表达,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清,Western blotting分析重组蛋白的免疫原性,免疫组织化学方法观察TsCDC37在猪带绦虫成虫中的组织定位。结果 PCR、双酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pET-28aTsCDC37构建成功。目的基因在BL-21/DE3菌株中得到稳定表达,重组蛋白的相对分子质量(M_r)为52 000。纯化的重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清和猪带绦虫病、亚洲带绦虫病或牛带绦虫病患者血清识别。免疫组化结果显示,TsCDC37分布于猪带绦虫成虫表膜和子宫中的虫卵。结论纯化后的猪带绦虫细胞周期分裂蛋白TsCDC37具有较强的免疫原性,主要定位于猪带绦虫成虫的表膜和子宫中的虫卵。

关键词：猪带绦虫细胞分裂周期蛋白37 抗原性组织定位

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容量激活性氯离子通道在大鼠低氧性PASMCs中的表达及与p38MAPK通路的关系

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医学研究杂志 2014年第8期43卷 83-86页

作者：黄林静黎关龙郑梦晓马迎春金可可王万铁温州医科大学基础医学院病理生理学教研室 325035 浙江省医学科学院卫生学研究所毒理学研究室杭州310013 温州医科大学缺血-再灌注损伤研究所 325035

目的探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系。方法取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞... 详细信息

目的探讨容量激活性氯离子通道(CLC3)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中mRNA和蛋白表达的变化以及其与p38MAPK信号通路的关系。方法取10只雄性SD大鼠,用酶消化法获得PASMCs并且进行原代培养,用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫荧光细胞化学的方法进行鉴定。经培养鉴定的PASMCs随机分为:常氧组(N组,n=6),低氧组(H组,n=6),DMSO对照组(D组,n=6),SB203580干预组(SB组,n=6),Anisomycin干预组(A组,n=6),用免疫印迹技术检测CLC3蛋白的表达,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果与N组比较,H组PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达量均显著上调(P均<0.01);与D组比较,SB组CLC3 mRNA和蛋白的表达均上调(P均<0.01),A组mRNA的表达明显下调(P<0.01),蛋白的表达轻微下调(P>0.05)。结论低氧可上调大鼠PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路抑制剂SB203580能上调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达;p38MAPK通路激活剂Anisomycin可下调PASMCs中CLC3 mRNA和蛋白的表达。

关键词：低氧容量激活性氯离子通道 p38MAPK 大鼠

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西部民族地区某高校大学生城居医保参保情况及影响因素分析

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郑州大学学报（医学版） 2013年第1期48卷 109-111页

作者：郭振友石武祥张丽华杨子靖孟繁文桂林医学院公共卫生学院卫生事业管理学教研室桂林541004

目的:分析西部民族地区高校大学生城镇居民医疗保险(城居医保)的参保情况及其影响因素。方法:采用分层随机整群抽样的方法抽取627名西部民族地区某高校在校大学生作为样本,采用问卷调查方法对城居医保的参保情况进行调查。结果:64.9%的... 详细信息

目的:分析西部民族地区高校大学生城镇居民医疗保险(城居医保)的参保情况及其影响因素。方法:采用分层随机整群抽样的方法抽取627名西部民族地区某高校在校大学生作为样本,采用问卷调查方法对城居医保的参保情况进行调查。结果:64.9%的学生不了解城居医保,74.8%的学生认为政府、学校、学生三方共同承担医保费用,大学生城居医保的参保率为38.4%,未参保的主要原因有觉得没有必要参加(28.3%)、参加了其他类型的医疗保险(23.3%)、家庭经济状况(21.4%)等,59.7%的参保大学生对城居医保的满意程度感觉一般,不满意的方面主要有报销比例低、报销程序复杂、卫生服务态度较差、医疗服务不能满足健康需求等。结论:西部民族地区大学生城居医保参保率及利用率偏低;应进一步完善筹资机制,改善医疗服务质量,建立以城居医保为主,其他医疗保险为补充的、全面可持续的大学生医疗保障体系。

关键词：民族地区大学生城镇居民医疗保险

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