检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报（医学版） 2008年第4期34卷 721-724页

作者：王华尹晓光王莉吴秀丽于永利王丽颖吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

目的:提高用线性载体进行的稳定转染哺乳动物细胞的脂质体转染方法的转染效率及转染稳定性。方法:将pcDNA3/GFP载体线性化,对复苏24h的P815细胞(10%铺满培养板板底)在96孔板上进行转染,优化DNA、脂质体的用量以及G418筛选浓度,设立复苏... 详细信息

目的:提高用线性载体进行的稳定转染哺乳动物细胞的脂质体转染方法的转染效率及转染稳定性。方法:将pcDNA3/GFP载体线性化,对复苏24h的P815细胞(10%铺满培养板板底)在96孔板上进行转染,优化DNA、脂质体的用量以及G418筛选浓度,设立复苏后培养1周的P815细胞(80%铺满培养板板底)在6孔板上进行常规转染条件的对照。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检测阳性克隆。结果:采用优化的方法可将用线性化的pcDNA3/GFP质粒稳定转染P815细胞的实验周期由2个月缩短为2周,转染细胞株中GFP+细胞的比例、GFP的荧光强度、转染细胞的稳定性均显著高于常规方法所获得的转染细胞。结论:改进的脂质体转染方法能显著提高用线性载体进行的细胞转染的效率和稳定性,并能显著缩短实验周期。

关键词：脂质体稳定转染绿色荧光蛋白线性化载体

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人外周血卡介苗(BCG)特异性中央型和效应型记忆CD4^+ T细胞的特征

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中国免疫学杂志 2006年第5期22卷 403-406页

作者：范艳莹杨利桃李丽吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

目的:探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征。方法:分离PPD-和PPD+正常人PBMCs,与BCG进行培养,采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数,利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及... 详细信息

目的:探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征。方法:分离PPD-和PPD+正常人PBMCs,与BCG进行培养,采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数,利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及细胞内因子IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果:当BCG刺激后,PPD-正常人PBMCs不产生或只产生少量的IFN-γ,而PPD+者IFN-γ产生的量和细胞数均明显增加(P<0·05)。流式细胞检测分析的结果表明,当BCG刺激后,主要是CD4+而非CD8+T细胞表达IFN-γ和IL-2,两者相比具有显著差异。在CD4+T细胞中单独产生IFN-γ的细胞占大多数,其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞,只产生IL-2的细胞占少数。此外,85%~95%以上的CD4+IFN-γ+T细胞为CD45RO+,其中60%以上的细胞为CCR7+,其余的为CCR7-。同样地,80%~95%左右的细胞为CD62L-。结论:BCG可以诱导抗原特异性记忆CD4+T细胞的产生,其中大多数为中央型记忆CD4+T细胞,少数为效应记忆CD4+T细胞,提示其在预防和控制结核分枝杆菌感染中发挥重要作用。

关键词： BCG 记忆T细胞 γ-干扰素 CCR7 CD62L

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Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制由IL-23诱导PBMCIFN-γ的产生

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中国免疫学杂志 2006年第3期22卷 195-199页

作者：范艳莹吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

目的:探讨重组人白介素23(IL-23)诱导正常人PBMC IFN-γ的产生,细胞亚群和调节因素。方法:正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪,分析IL-23诱导PBMC I... 详细信息

目的:探讨重组人白介素23(IL-23)诱导正常人PBMC IFN-γ的产生,细胞亚群和调节因素。方法:正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪,分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的细胞亚群。结果:IL-23呈剂量依赖性诱导PBMC IFN-γ产生,并可与IL-2协同诱导IFN-γ的产生。细胞亚群分析的结果表明,IL-23诱导高表达CD56+NK细胞产生IFN-γ,对CD4+和CD8+T细胞无明显作用。Th2细胞因子和抗IL-12受体β1mAb(IL-12Rβ1)抑制IL-23诱导IFN-γ产生。结论:IL-23可直接作用于CD3-CD56+NK细胞,诱导产生IFN-γ。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制IL-23诱导IFN-γ产生,提示可以用于由IL-23引起自身免疫病的治疗。

关键词： IL-23 IFN-γ Th2细胞因子抗IL-12Rβ1 mAb NK细胞

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人细胞色素P450 2A13与GFP融合基因共表达慢病毒载体的构建与表达

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重庆医科大学学报 2011年第10期36卷 1228-1232页

作者：范晓丽谭宁孙莉桂林医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室桂林541004

目的:构建人细胞色素P450 2A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法:采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染... 详细信息

目的:构建人细胞色素P450 2A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法:采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染293T细胞,包装后产生病毒液,测定其滴度。包装后的病毒感染A549细胞。激光共聚焦显微镜检测GFP-CYP2A13融合蛋白在A549细胞中的定位;Real-time PCR和Western blot检测A549细胞中CYP2A13表达情况。结果:成功构建人细胞色素CYP2A13基因与GFP共表达的慢病毒载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见有大量的绿色荧光。激光共聚焦显微镜观察,感染后的A549细胞的胞核和胞浆中有绿色荧光,Real-time PCR和Western blot检测到A549细胞中CYP2A13的高表达。结论:成功构建了CYP2A13与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为研究CYP2A13基因与呼吸系统肿瘤的关系,提供了稳定的感染细胞的载体。

关键词： CYP2A13 绿色荧光蛋白慢病毒载体转染

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HIV-1Tat基因的融合构建及在大肠杆菌中的高效表达

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第1期21卷 33-36页

作者：林剑萍王华王玲卫红飞胡晓平王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的: 在***21(DE3)中高效表达Tat蛋白。方法: 用PCR方法构建HIV- 1Tat基因全序列, 同时将Tat基因进行定点突变(AAG28替换为CAG, AAG50替换为CAG),以消除天然Tat蛋白的转录活性。将突变的Tat基因与伴侣10(chap10)基因连接后, 共同亚克... 详细信息

目的: 在***21(DE3)中高效表达Tat蛋白。方法: 用PCR方法构建HIV- 1Tat基因全序列, 同时将Tat基因进行定点突变(AAG28替换为CAG, AAG50替换为CAG),以消除天然Tat蛋白的转录活性。将突变的Tat基因与伴侣10(chap10)基因连接后, 共同亚克隆入表达载体pET28a中,并在***中表达, 表达产物用Westernblot进行鉴定。结果: 分别通过 3轮PCR, 成功地构建了Tat基因全序列。构建的重组质粒pET28a- chap10 Tat在***21(DE3)中得到高效表达。Westernblot分析表明, 在相对分子质量 (Mr)为24 000处有 1条特异性的带。结论: chap10基因与HIV- 1Tat全基因的融合构建, 使Tat蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为其在爱滋病发病中作用研究奠定了基础。

关键词： HIV-1 Tat 伴侣10 表达

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分子生物学技术在念珠菌分类鉴定中的应用

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中华检验医学杂志 2008年第2期31卷 220-222页

作者：袁有华白丽大理学院基础医学院医学微生物与免疫学教研室 671000

念珠菌其生物学分类属于真菌界、真菌门、半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、隐球菌科、假丝酵母菌属。本菌属有81个种，其中常引起人类疾病的有11个种，如白色念珠菌（Candida albieans）、热带念珠菌（Candida tropiealis）、克柔念珠... 详细信息

念珠菌其生物学分类属于真菌界、真菌门、半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、隐球菌科、假丝酵母菌属。本菌属有81个种，其中常引起人类疾病的有11个种，如白色念珠菌（Candida albieans）、热带念珠菌（Candida tropiealis）、克柔念珠菌（Candida krusei）、光滑念珠菌（Candida glabrata）等，其中以白色念珠菌为最常见的致病菌。此外，热带念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌也较多引起疾病。

关键词：白色念珠菌分子生物学技术分类鉴定热带念珠菌克柔念珠菌光滑念珠菌酵母菌属人类疾病

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IL-12和CpG疫苗佐剂体内对特异性CD4^+T细胞免疫应答的影响

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中国免疫学杂志 2005年第11期21卷 803-807页

作者：杨滨燕吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

目的:观察IL-12和CpG作为疫苗佐剂在体内促进抗原特异性CD4+T细胞的分化和IFN-γ的产生异同。方法:自CD4+T细胞受体转基因(TCR-Tg)小鼠脾和淋巴结分离CD4+T细胞,体外利用CFSE进行标记,然后被动输给相同基因的正常小鼠。经OVA、OVA+IL-12... 详细信息

目的:观察IL-12和CpG作为疫苗佐剂在体内促进抗原特异性CD4+T细胞的分化和IFN-γ的产生异同。方法:自CD4+T细胞受体转基因(TCR-Tg)小鼠脾和淋巴结分离CD4+T细胞,体外利用CFSE进行标记,然后被动输给相同基因的正常小鼠。经OVA、OVA+IL-12或OVA+CpG免疫后,观察抗原特异性CD4+T细胞的组织分布,IFN-γ的表达以及与细胞分裂之间的关系。结果:未经OVA抗原免疫的小鼠,抗原特异性CD4+T细胞未见有增殖反应。当经OVA抗原免疫后,可见脾和肺组织中细胞增殖;IFN-γ+细胞在脾脏、淋巴结和肺组织表达的阳性率很低,其范围为0.93%~2.17%。当经OVA+IL-12免疫后,IL-12促进IFN-γ的表达,阳性率为4.53%~26.79%;而经OVA+CpG免疫后,CpG只促进淋巴结中IFN-γ的表达(3.84%)。IFN-γ表达的细胞主要为分裂3~5次的细胞。结论:IL-12和CpG作为疫苗佐剂均可促进IFN-γ产生,促进细胞免疫应答。

关键词： IL-12 CpG 疫苗佐剂 IFN-γ

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CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 235-238页

作者：马瑞黄俊吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510089

目的探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c小鼠后，从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞，体外经HBsAg抗原刺激后，利用EL... 详细信息

目的探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c小鼠后，从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞，体外经HBsAg抗原刺激后，利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平，再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^＋细胞的频率，分析IFN-7^＋细胞亚群。结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低，当HBsAg加强免疫1～2次后，IFN-γ表达仍然没有明显升高；而CpG ODN＋HBsAg免疫1次或加强免疫后，CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的表达。结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答，提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。

关键词： CpG 0DN HBsAg 疫苗佐剂

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初始CD4^+T和记忆性Th1细胞在淋巴器官的分布和IFN-γ的表达

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免疫学杂志 2005年第4期21卷 273-276页

作者：杨滨燕吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

目的比较观察抗原特异性初始CD4+T细胞和效应性/记忆性Th1细胞在体内外IFN-γ的产生和在淋巴组织的分布。方法将标记相同数量的OVA-抗原受体转基因小鼠(OVA-TCR-Tg)的初始CD4+T细胞和Th1细胞被动输给正常小鼠后,利用流式细胞仪在单个细... 详细信息

目的比较观察抗原特异性初始CD4+T细胞和效应性/记忆性Th1细胞在体内外IFN-γ的产生和在淋巴组织的分布。方法将标记相同数量的OVA-抗原受体转基因小鼠(OVA-TCR-Tg)的初始CD4+T细胞和Th1细胞被动输给正常小鼠后,利用流式细胞仪在单个细胞水平上观察初始CD4+T细胞和Th1细胞在体内淋巴组织器官的分布和IFN-γ的产生。结果体外经抗原刺激后,大于98%的Th1细胞和4.1%的初始CD4+T细胞表达IFN-γ。当被动输入机体后,初始CD4+T细胞主要分布于淋巴结,而Th1细胞主要分布于脾脏。当再次受到抗原的刺激后,记忆性Th1细胞能迅速产生IFN-γ。初始CD4+T细胞与效应/记忆Th1细胞在淋巴结和脾脏不同的分布,可能与CD62L的表达有关。结论本研究在我们以前研究的基础上进一步探讨了CD4+T细胞和记忆性Th1细胞的差异。此结果为进一步揭示初始CD4+T细胞与Th1细胞的差异提供了实验和理论依据。

关键词： CD4^+T细胞 Th1细胞效应/记忆T细胞细胞因子

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SARS病人的免疫应答

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第11期25卷 953-956页

作者：吴长有杨利桃中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

机体抵御SARS-CoV的免疫应答包括非特异性和特异性两类.非特异性免疫应答主要包括细胞因子和NK细胞对病毒的抑制和杀伤作用等.特异性免疫反应包括体液免疫和细胞免疫.体液免疫反应是指当SARS-CoV感染机体后,引起B淋巴细胞的活化,其中一... 详细信息

机体抵御SARS-CoV的免疫应答包括非特异性和特异性两类.非特异性免疫应答主要包括细胞因子和NK细胞对病毒的抑制和杀伤作用等.特异性免疫反应包括体液免疫和细胞免疫.体液免疫反应是指当SARS-CoV感染机体后,引起B淋巴细胞的活化,其中一些细胞迅速分化为浆细胞,分泌IgM;而另一些细胞在T细胞和细胞因子的辅助下,发生类型转换,分泌IgG和IgA,并形成记忆性B细胞.记忆性B细胞和浆细胞维持着长期的免疫记忆。

关键词：非特异性免疫应答 SARS病人 SARS-CoV感染体液免疫反应特异性免疫反应 NK细胞细胞因子 B淋巴细胞杀伤作用细胞免疫

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