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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第4期30卷 258-261,267页

作者：罗雪平陈殿慧谢红艳高志岩方会龙黄俊广州医学院基础医学院病原学与免疫学教研室广州510182 广州医学院机能学实验中心广州510182 湘南学院寄生虫学教研室郴州423000

目的观察C57BL／6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法20只C57BU6小鼠随机分为感染组和对照组．每组10只，感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴，每鼠（40＋5）条。感染后5-6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细... 详细信息

目的观察C57BL／6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法20只C57BU6小鼠随机分为感染组和对照组．每组10只，感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴，每鼠（40＋5）条。感染后5-6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞，分别用抗小鼠CD3单克隆抗体（anti-CD3，1μg／m1）和抗小鼠CD28单克隆抗体（anti-CD28，1μg/ml）刺激，培养4h后收集细胞，RT-PCR检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞中自细胞介素17（IL-17）和维甲酸相关孤独受体（ROR-γt）mRNA的转录水平；培养72h后，ELISA检测细胞培养上清液IL-17和1干扰素（IFN-1）的含量。同时用佛波酯（PMA，10ng／m1）和离子霉素（1μg／ml）刺激淋巴细胞5h后，胞内细胞因子染色，流式细胞术检测Th17细胞的含量和其他细胞因子的产生。结果ELISA检测结果显示，感染小鼠肠系膜淋巴结培养物上清液中IFN-γ[（214．3±62．6）pg／ml]和IL-17[（176．8±62．1）pg／ml]的含量明显高于健康小鼠[（46．7±13．9）和0pg／ml]（P〈0．05）。RT-PCR检测结果显示，IL-17和ROR-γt mRNA转录水平也明显高于健康小鼠。感染小鼠肠系膜淋巴细胞CD4＋T细胞中，Th17细胞的比例为（0．55±0．03）％，明显高于健康小鼠[（0．16±0．01）％]（只以05）。在CD4＋T细胞中，IL-17＋ IL4＋细胞占0．06％，IL-17＋IFNγt和IL-17＋IL5＋细胞各占0．02％，IL-17＋ IL-9＋细胞占0.01％，未检测到Tl-17＋IL-10＋和IL-17＋Foxp3＋细胞。结论日本血吸虫感染C57BIJ6小鼠的肠系膜淋巴结能诱导Th17细胞产生。Th17细胞能分泌IL-4，及少量的IFN-γ、IL5和IL-9，不分泌IL-10，也不表达Foxp3。

关键词：日本血吸虫 C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结 Th17 细胞因子

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鼠Mincle蛋白B细胞抗原表位预测及多克隆抗体制备

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免疫学杂志 2011年第8期27卷 683-687页

作者：郑小莉张艺谢晓东罗波刘佳佳泸州医学院基础医学院生物化学教研室 646000 泸州医学院基础医学院医学机能实验室 646000 泸州医学院基础医学院教务处实习科 646000 泸州医学院基础医学院基础医学院免疫学教研室 646000

目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能... 详细信息

目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能性及表面抗原性指数;融合表达PET30a(+)/Mincle蛋白并通过镍层析柱纯化后,免疫兔获得Mincle多克隆抗体。结果 Mincel蛋白是一种跨膜蛋白质,N末端第1-22号氨基酸可能位于蛋白的表面并可能为抗原表位;成功构建了重组载体PET30a(+)/Mincle,转化大肠杆菌BL21后表达包涵体融合蛋白,利用镍亲和层析得到了无生物活性的高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫兔,制备了滴度达1:128 000的多克隆抗体;Western-blot检测显示抗体特异性高。结论 Mincle蛋白N端即胞外区的第1-22氨基酸可作为Mincle蛋白的主要抗原表位区以制备Mincle多克隆抗体。

关键词：鼠Mincle蛋白 B细胞抗原表位多克隆抗体

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不同刚度Ⅰ型胶原凝胶三维环境调控NK细胞免疫功能

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 81-86页

作者：龙世棋吴翠芳曾柱贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院免疫学教研室贵阳550029

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,... 详细信息

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,通过激光共聚焦显微镜观察其微结构,流变仪测量平台期的储能模量表征其刚度。将NK-92MI细胞培养于不同刚度Ⅰ型胶原凝胶中,倒置显微镜观察NK-92MI细胞的形态,高内涵成像系统记录NK-92MI细胞的自由迁移过程,分析迁移速度和距离。不同刚度的Ⅰ型胶原凝胶培养NK-92MI细胞24、48 h,再与人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)共培养后,用CCK8法检测DLD-1细胞增殖率,分析NK-92MI细胞的细胞杀伤能力。结果成功制备出刚度为(10.97±2.10)Pa的低刚度Ⅰ型胶原凝胶和刚度为(114.50±3.40)Pa的高刚度Ⅰ型胶原凝胶。与在低刚度Ⅰ型胶原凝胶中相比,在高刚度Ⅰ型胶原凝胶中,NK-92MI细胞呈现更细长的形态(P<0.05),细胞平均面积减少〔(69.88±26.97)μm^(2)vs.(46.59±21.62)μm^(2),P<0.05〕,细胞圆度减小(0.82±0.12 vs.0.78±0.18,P<0.05),细胞迁移速度降低〔(2.50±0.91)μm/min vs.(1.70±0.72)μm/min,P<0.001〕,迁移距离缩短〔(147.10±53.74)μm vs.(98.03±40.95)μm,P<0.0001〕,差异均有统计学意义。与低刚度Ⅰ型胶原凝胶相比,高刚度Ⅰ型胶原凝胶培养24 h的NK-92MI细胞可促进DLD-1细胞增殖〔增殖率(46.39±12.79)%vs.(65.87±4.45)%,P<0.05〕,降低细胞杀伤能力,48 h的比较结果类似〔增殖率(31.36±2.88)%vs.(74.57±2.16)%,P<0.05〕,差异均有统计学意义。结论不同刚度Ⅰ型胶原凝胶3D培养环境可改变NK-92MI细胞的形态、迁移能力以及杀伤功能。该研究为探索和理解生物力学微环境影响NK细胞免疫应答机制提供了研究基础,为优化免疫治疗方案提供理论依据。

关键词： Ⅰ型胶原细胞外基质力学杀伤细胞免疫应答

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依普利酮基于阻断Kv1.3通道对抗Treg细胞体外促成纤维细胞增殖作用

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中国药理学通报 2017年第11期33卷 1558-1563页

作者：邵培培徐琦李少华程路峰新疆医科大学基础医学院药理学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的 SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)和成年SD大鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)体外共培养,探讨二者相互作用,并观察依普利酮(EPL)对其的影响。方法免疫磁珠法分选大鼠Tregs,差速贴壁法分选大鼠CFs,分为CFs、CFs+Tregs、CFs+Tregs+EPL(30μmol... 详细信息

目的 SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)和成年SD大鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)体外共培养,探讨二者相互作用,并观察依普利酮(EPL)对其的影响。方法免疫磁珠法分选大鼠Tregs,差速贴壁法分选大鼠CFs,分为CFs、CFs+Tregs、CFs+Tregs+EPL(30μmol·L^(-1))、Tregs组。孵育后,CCK-8法检测CFs的增殖情况;ELISA法检测CFs分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白相对表达水平;RT-q PCR检测Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平;In-Cell Western blot法检测Tregs的Kv1.3通道蛋白质的表达水平。结果共培养48 h后,CFs增殖趋稳,共培养组CFs增殖明显(P<0.01),EPL可明显抑制其增殖(P<0.01);CFs分泌的Ⅰ型、Ⅲ型胶原和MMP-2的相对表达水平均明显增加(P<0.01),EPL可明显抑制其增加(P<0.01);Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平分别增加6.95、1.99、1.53倍(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL明显抑制Kv1.3、KCa3.1 mRNA的表达(CFs+Tregs+EPL vs CFs+Tregs,P<0.01),其中Kv1.3通道的抑制最为明显;Tregs的Kv1.3通道蛋白增加了67.9%(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL可明显抑制其表达(P<0.01)。结论体外Treg与CFs共培养48h后,Tregs能明显促进CFs的增殖,EPL可以通过下调Tregs细胞膜上Kv1.3通道的表达,抑制Tregs的活化/增殖,间接抑制心肌纤维化。

关键词：心肌纤维化 CFs 共培养 CD4+CD25+Tregs 依普利酮 Kv1.3通道增殖

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核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定

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南方医科大学学报 2008年第3期28卷 392-395,398页

作者：张功员赵国强尹磊张钦宪郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法根据GenBank提供的NS基因AY825265mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144nt,199-217nt和487-505nt3个19bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况。结果PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Westernblot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NSmRNA和蛋白水平的表达。结论成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础。

关键词：核干细胞因子 RNA干扰基因克隆 EC9706

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瘦素作用于人乳腺癌SK-BR-3细胞的可能机制

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中国老年学杂志 2013年第8期33卷 1845-1847页

作者：曾繁余刘菁黄颖骆耐香桂林医学院附属医院普外二科广西桂林541001 桂林医学院微生物与免疫学教研室

目的观察瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对VEGF表达的影响,探讨其可能机制。方法不同浓度瘦素与人乳腺癌SK-BR-3细胞共同培养后,CCK-8法检测其对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测VEGF mRNA及蛋白... 详细信息

目的观察瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对VEGF表达的影响,探讨其可能机制。方法不同浓度瘦素与人乳腺癌SK-BR-3细胞共同培养后,CCK-8法检测其对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测VEGF mRNA及蛋白表达情况。结果在一定范围内,瘦素呈时间、剂量依赖性促进SK-BR-3细胞的生长(P<0.05);细胞受不同浓度瘦素作用后VEGF mRNA及蛋白表达量明显增加并具有剂量依赖性(P<0.05)。结论在体外瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞有明显增殖作用,通过促进VEGF的表达,在促进血管的生成及肿瘤转移机制中可能发挥一定作用。

关键词：瘦素人乳腺癌细胞株增殖血管内皮生长因子

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水凝胶对细胞行为的动态调控

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解剖学杂志 2015年第1期38卷 92-96页

作者：葛丽宋文刚刘立伟马秋霞刘颜芬泰山医学院基础医学院.组织学与胚胎学教研室泰安271000 泰山医学院基础医学院医学免疫学教研室泰安271000

在生物体内，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）可为细胞生长提供机械支持，其物理和化学性质的动态变化贯穿于组织发育的不同阶段，并会显著影响细胞行为。因此，设计能够模拟ECM时空复杂性的生物材料对于理解细胞一材料之间的... 详细信息

在生物体内，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）可为细胞生长提供机械支持，其物理和化学性质的动态变化贯穿于组织发育的不同阶段，并会显著影响细胞行为。因此，设计能够模拟ECM时空复杂性的生物材料对于理解细胞一材料之间的相互作用、完善体外细胞培养系统、推动组织工程和再生医学的发展具有重要意义[1]。近年来，水凝胶作为一种可模拟ECM的新型生物材料已受到广泛关注。

关键词：细胞行为水凝胶调控 matrix 生物材料细胞培养系统细胞外基质生物体内

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胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第3期37卷 199-204页

作者：翟丽倩陈晓芬卢思彤杨丹李皖晴李飞迪吴凤娇孙美群蚌埠医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。

关键词：胰岛素样生长因子1(IGF-1) BV-2小胶质细胞吞噬功能炎症

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一氧化氮对红内期约氏疟原虫感染的影响

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中国医科大学学报 2001年第3期30卷 171-173页

作者：曹雅明王继春刘英杰阎建中那立新中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001 基础医学院病原生物学教研室

目的 :探讨约氏疟原虫感染早期一氧化氮 (nitricoxide ,NO)对红内期疟原虫的影响。方法 :通过ELISA和Griess反应 ,观察疟原虫感染早期宿主体内细胞因子和NO对红内期虫体血症的影响及其效应。结果 :疟原虫感染早期随着以IFN γ分泌增加... 详细信息

目的 :探讨约氏疟原虫感染早期一氧化氮 (nitricoxide ,NO)对红内期疟原虫的影响。方法 :通过ELISA和Griess反应 ,观察疟原虫感染早期宿主体内细胞因子和NO对红内期虫体血症的影响及其效应。结果 :疟原虫感染早期随着以IFN γ分泌增加为主的Th1细胞免疫应答产生的过程 ,NO合成逐渐增加 ,红内期原虫血症受到抑制。一旦解除高水平NO的作用 ,虫体的增殖能力即可迅速得以恢复。结论 :NO通过抑制裂殖子的侵袭力发挥抗红内期原虫感染的保护性免疫效应。

关键词：约氏疟原虫虫体血症一氧化氮疟原虫感染

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免疫调节性寡聚脱氧核苷酸筛选方法的建立、优化和应用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1017-1020页

作者：胡大利张雪松王华颖孙然任继玲王丽颖于永利吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林省血液中心吉林长春130021 吉林大学基础医学院分子生物学教研室

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺... 详细信息

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺激上清的抗病毒活性作为检测指标,优化各项实验条件,综合评定寡聚脱氧核苷酸的免疫调节活性。结果:成功建立了由阳性免疫调节性ODNA151抑制CpG ODN诱导的人PBMC增殖及抗病毒活性的筛选方法。结论:免疫调节性ODN筛选方法的成功建立,为下一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。

关键词：免疫调节寡聚脱氧核苷酸 CpG ODN 人外周血单个核细胞

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