检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体

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用杆状病毒-昆虫细胞构建新型冠状病毒S突变的病毒样颗粒

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兰州大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 14-21页

作者：徐昆米友军孔维泽王文婷徐晓楠谭继英兰州大学基础医学院免疫学教研室甘肃兰州730000 兰州大学基础医学院病理生理学教研室甘肃兰州730000

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron和Delta刺突蛋白(S)突变的病毒样颗粒(VLP)。方法以Omicron为例,在兰州大学基础医学院病原生物研究所前期构建表达质粒pFastBac-EM基础上,将Omicron的S基因克... 详细信息

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron和Delta刺突蛋白(S)突变的病毒样颗粒(VLP)。方法以Omicron为例,在兰州大学基础医学院病原生物研究所前期构建表达质粒pFastBac-EM基础上,将Omicron的S基因克隆到pFastBac-EM,构建重组质粒pFastBac-EMS(ο),测序鉴定;pFastBac-EMS(ο)转化DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,获得重组杆粒Bacmid-EMS(ο),转染ExpiSf9TM昆虫细胞,获得重组杆状病毒;重组杆状病毒感染昆虫细胞表达组装VLP-EMS(ο);蔗糖密度梯度超速离心纯化、收集VLP-EMS(ο);免疫电镜鉴定纯化VLP-EMS(ο)形态及S蛋白的展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白表达。以相同方法构建Delta的VLP,命名为VLP-EMS(δ)。结果测序结果显示成功构建重组质粒pFastBac-EMS(ο)和pFastBac-EMS(δ);聚合酶链式反应验证重组杆粒Bacmid-EMS(ο)和Bacmid-EMS(δ)构建成功;重组杆粒转染ExpiSf9TM昆虫细胞获得VLP-EMS;免疫电镜显示VLP-EMS(ο)和VLP-EMS(δ)成功组装,S蛋白成功展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白成功表达。结论利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统成功构建SARS-CoV-2的VLP-EMS(ο)、VLP-EMS(δ),突变的S蛋白成功在VLP上组装并稳定表达,可以用于SARS-CoV-2抗原、疫苗和中和性抗体等的进一步研究。

关键词：新型冠状病毒病毒样颗粒刺突蛋白昆虫细胞杆状病毒

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中性粒细胞胞外诱捕网对糖尿病小鼠肾脏的损伤作用及其机制

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中国药理学通报 2024年第12期40卷 2262-2269页

作者：陈伟豪任小军常欣悦李关蕊王艳红山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室山西太原030001 山西白求恩医院肾内科山西太原030032 教育部慢性肾脏病医药基础研究创新中心山西医科大学山西太原030001

目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)引起的肾脏组织损伤和肠道菌群紊乱的促进作用和潜在机制。方法 C57BL/6小鼠分为:对照组(NC),DNase I对照组(DNase I),... 详细信息

目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)引起的肾脏组织损伤和肠道菌群紊乱的促进作用和潜在机制。方法 C57BL/6小鼠分为:对照组(NC),DNase I对照组(DNase I),糖尿病肾病组(DKD),DNase I处理组(DKD+DNase I),通过PAS、MASSON和HE染色观察小鼠肾脏病理变化,免疫组织化学法观察各组小鼠肾脏组织中NETs的相关蛋白及焦亡相关蛋白的表达和分布情况。免疫印迹法检测各组小鼠肾脏组织NETs的相关指标、焦亡相关指标和NF-κB信号通路相关指标的蛋白表达情况。结果DKD组中的NETs的相关指标表达升高,在DNase I对NETs降解后其表达下降(P <0.01),病理染色结果显示,DKD小鼠肾脏结构异常,在DNase I对NETs降解后结构有所好转,免疫组织化学染色和免疫印迹法结果显示,DKD组小鼠肾脏组织的焦亡相关蛋白表达相较于对照组表达上升(P<0.01),在DNase I对NETs进行降解后其表达下降。NF-κB信号通路相关蛋白表达情况表达上升,在DNase I对NETs进行降解后其表达下降(P<0.01)。结论NETs在糖尿病肾病中生成,并促进肾脏焦亡的发生,激活NF-κB信号通路,从而加剧糖尿病导致的肾脏损伤。

关键词：中性粒细胞胞外诱捕网糖尿病肾病焦亡 NF-κB NLRP3炎症小体肾脏损伤

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GATA3通过调控LIFR抑制人乳腺癌细胞的迁移能力

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医学分子生物学杂志 2024年第4期21卷 293-299页

作者：张璐张瑞刘俊杨安钢新乡医学院医学技术学院河南省新乡市453003 空军军医大学基础医学院免疫学教研室西安市710032

目的探究GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法在MCF7细胞中利用慢病毒载体介导的基因干涉技术敲低GATA3基因,使用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测GATA3和LIFR的mRNA和蛋白表达水平,... 详细信息

目的探究GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法在MCF7细胞中利用慢病毒载体介导的基因干涉技术敲低GATA3基因,使用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测GATA3和LIFR的mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。在MCF7和T47D细胞中用染色质免疫沉淀(ChIP-qPCR)实验检测GATA3在LIFR的启动子区的结合位点。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中回补LIFR,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。结果与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的迁移能力增强(P_(均)<0.05)。与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的LIFR表达水平降低(P_(均)<0.05)。乳腺癌细胞MCF7与T47D中GATA3在LIFR的启动子区有结合(P_(均)<0.05)。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中稳定过表达LIFR可以部分挽救GATA3基因敲低引起的细胞迁移能力的增强(P_(均)<0.05)。结论GATA3通过转录激活LIFR抑制乳腺癌细胞MCF7的迁移。

关键词：乳腺癌 GATA结合蛋白3 白血病抑制因子受体LIFR 细胞迁移

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Fgl2对小鼠急性肾损伤中巨噬细胞极化的作用

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陆军军医大学学报 2024年第13期46卷 1467-1476页

作者：朱琳许桂莲谢攀彭侃夫陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院肾内科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院免疫学教研室重庆400038

目的探讨纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein2,Fgl2)对顺铂诱导的急性肾损伤(cisplatin-induced acute kidney injury,Cis-AKI)中巨噬细胞极化的作用。方法选取24只8~10周龄(体质量20~25 g)的雄性野生型(Fgl2^(+/+))小鼠和Fgl2基因敲除(Fgl2^(-/-))小鼠各12只。单次腹腔注射生理盐水(saline)或顺铂(cisplatin,Cis)处理3 d,按随机数字表法分成4组(n=6):Fgl2^(+/+)Saline组、Fgl2^(+/+)Cis组、Fgl2^(-/-)Saline组和Fgl2^(-/-)Cis组。3 d后,检测肾功能相关指标血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的水平,HE染色评估肾损伤程度;Western blot检测肾组织中Fgl2和肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)的表达;RT-qPCR检测Fgl2、Kim-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、IL-6、IL-12p40、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、TNF-α的表达;免疫组化检测肾脏Fgl2和巨噬细胞(F4/80^(+))的表达;免疫荧光检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))和M1型巨噬细胞(F4/80^(+)CD86^(+))的表达;流式细胞术检测肾组织中巨噬细胞(F4/80^(+))及M1型巨噬细胞(F4/80^(+)MHCⅡ+)、M2型巨噬细胞(F4/80^(+)CD206^(+))的表达。结果与Fgl2^(+/+)Saline组比较,Fgl2^(+/+)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),肾组织Fgl2表达显著上调(P<0.05);与Fgl2^(+/+)Cis组相比,Fgl2^(-/-)Cis组小鼠肾功能显著下降(P<0.05),肾损伤相关分子Kim-1、NGAL表达显著升高(P<0.05),肾小管损伤病理评分显著升高(P<0.05),巨噬细胞浸润显著增加(P<0.05),M1型巨噬细胞相关分子IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS表达显著上升(P<0.05),流式细胞术结果显示M1型巨噬细胞百分比显著升高(P<0.05),M2型巨噬细胞百分比无明显变化,且M1型占比显著高于M2型(P<0.05)。结论Fgl2基因敲除可通过促进巨噬细胞向M1型转化加重Cis-AKI。

关键词：顺铂急性肾损伤纤维蛋白原样蛋白2 巨噬细胞

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CXCL13联合VEGFA过表达抑制荷黑素瘤和结肠癌小鼠的肿瘤生长

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第5期39卷 429-434页

作者：姜玉王珂张瑞李纪鹏西安医学院陕西西安710021 空军军医大学第一附属医院消化外科陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的探究CXC趋化因子配体13(CXCL13)与血管内皮生长因子A(VEGFA)对肿瘤生长的影响。方法通过慢病毒包装及感染技术,构建稳定过表达CXCL13、VEGFA、CXCL13联合VEGFA的B16小鼠黑素瘤细胞和MC38小鼠结肠癌细胞。采用CCK⁃8、5⁃乙炔基⁃2′⁃... 详细信息

目的探究CXC趋化因子配体13(CXCL13)与血管内皮生长因子A(VEGFA)对肿瘤生长的影响。方法通过慢病毒包装及感染技术,构建稳定过表达CXCL13、VEGFA、CXCL13联合VEGFA的B16小鼠黑素瘤细胞和MC38小鼠结肠癌细胞。采用CCK⁃8、5⁃乙炔基⁃2′⁃脱氧尿苷(EdU)法、集落形成实验检测过表达后肿瘤的体外增殖能力。建立过表达CXCL13、VEGFA细胞的小鼠皮下荷瘤模型探索对体内肿瘤生长的影响。结果与对照组相比,体外单独过表达CXCL13、单独过表达VEGFA和联合过表达CXCL13和VEGFA对B16和MC38细胞增殖无明显影响。体内单独过表达CXCL13和单独过表达VEGFA对黑素瘤的生长无明显影响,而联合过表达CXCL13和VEGFA显著抑制黑素瘤的生长;在MC38结肠癌模型中,单独过表达CXCL13组和单独过表达VEGFA组的肿瘤体积和质量显著高于对照组,而联合过表达CXCL13和VEGFA组的肿瘤体积和体质量较单独过表达组显著减小。结论CXCL13联合VEGFA过表达抑制荷黑素瘤和结肠癌小鼠的肿瘤生长。

关键词：肿瘤 CXC趋化因子配体13(CXCL13) 血管内皮生长因子A(VEGFA) 肿瘤生长

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TRIM32在皮肤黑色素瘤中的表达及预后相关性分析

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1551-1556页

作者：赵丹阳曹东升徐结苟谢娟安徽医科大学第二附属医院整形外科合肥230601 安徽医科大学基础医学院免疫学教研室合肥230032

目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组... 详细信息

目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组化方法检测TRIM32在CMM患者癌组织和癌旁组织中的表达,统计患者的临床资料,分析TRIM32表达与临床特征的相关性,采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型进行预后分析。结果与HACAT正常皮肤细胞相比,TRIM32 mRNA表达水平在A375黑色素瘤细胞中明显升高(P<0.001),在MV3黑色素瘤细胞中无明显差异(P>0.05)。CMM癌组织中TRIM32蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。CMM患者中TRIM32的表达水平与肿瘤Breslow厚度(r=0.771,P<0.001)、Clark分级呈显著的正相关(r=0.635,P<0.001),与患者的性别、有无溃疡、年龄、肿瘤原发部位均无明显相关性(P>0.05)。TRIM32表达水平、肿瘤Breslow厚度、Clark分级与CMM患者生存时间相关(P<0.01),建立COX回归模型,TRIM32表达水平与CMM患者预后关联显著(P<0.05)。结论TRIM32在A375黑色素瘤细胞和CMM患者癌组织中呈高表达。TRIM32表达水平是影响CMM患者预后的独立风险因素,TRIM32可作为CMM预后判断的参考指标。

关键词： TRIM32 皮肤黑色素瘤免疫组化预后

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NEXN基因高表达预示结直肠癌患者的不良预后且与免疫抑制性细胞浸润相关

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免疫学杂志 2021年第6期37卷 512-519页

作者：龙世棋商正玲杨留启赵久刚曾柱贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550001

目的研究nexilin F-肌动蛋白结合蛋白(NEXN)基因表达与结直肠癌患者预后及免疫细胞浸润的相关性。方法利用Oncomine数据库分析NEXN基因在肿瘤和正常组织中的表达差异;通过Prognoscan数据库分析NEXN基因表达与结直肠癌患者预后的关系;通... 详细信息

目的研究nexilin F-肌动蛋白结合蛋白(NEXN)基因表达与结直肠癌患者预后及免疫细胞浸润的相关性。方法利用Oncomine数据库分析NEXN基因在肿瘤和正常组织中的表达差异;通过Prognoscan数据库分析NEXN基因表达与结直肠癌患者预后的关系;通过TIMER及GEPIA数据库分析NEXN基因高表达与免疫浸润的相关性。结果 Oncomine数据库分析结果表明NEXN在结直肠癌中高表达(fold change=3.057,P<0.000 1);Prognoscan数据库GSE17536和GSE14333的芯片分析结果表明,NEXN高表达与结直肠癌患者的不良预后呈正相关(P<0.05);TIMER数据库分析显示NEXN与CD4+T细胞、巨噬细胞、树突状细胞及中性粒细胞的浸润具有中度或强的相关性(COR值>0.4,P<0.05);进一步分析不同细胞亚群标志基因发现NEXN高表达与Treg细胞、M2巨噬细胞标志基因表达呈中度或强的相关性,与T细胞耗竭相关基因TIM3和TIGIT呈中度相关性(COR值>0.4,P <0.05);利用GEPIA数据库分析也证实上述结果。结论 NEXN高表达与结直肠癌患者不良预后呈正相关,而M2型巨噬细胞、Treg细胞的浸润可能是重要的原因。

关键词： NEXN基因结直肠癌预后免疫浸润

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《医学免疫学》课程思政教学实践与思考

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医学理论与实践 2023年第12期36卷 2145-2147页

作者：姜朋涛吕明华李爱连姜凤良西安医学院基础医学部免疫学教研室陕西省西安市710021

本文以护理本科专业《医学免疫学》教学为例,旨在对课堂教学中课程思政教学的有效实施进行探索。首先建立基于护理学专业的特色案例库,之后在教学过程中将所设计案例融入教学过程,在教学终末对学生进行不记名问卷调查。结果显示基于护... 详细信息

本文以护理本科专业《医学免疫学》教学为例,旨在对课堂教学中课程思政教学的有效实施进行探索。首先建立基于护理学专业的特色案例库,之后在教学过程中将所设计案例融入教学过程,在教学终末对学生进行不记名问卷调查。结果显示基于护理专业特点的课程思政教学有益于《医学免疫学》学习,学生认同度和积极性均较高;但存在教师在教学过程中有意联系课程思政内容和学生对不同案例接受程度不同的问题。最后总结出课程思政教学过程中存在的两个问题:教师问题和资源问题,并对相关问题提出一些解决办法。

关键词：课程思政基础医学医学免疫学

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IL-33/ST2轴调控巨噬细胞极化影响肿瘤生长

IL-33/ST2轴调控巨噬细胞极化影响肿瘤生长

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第十六届中国实验动物科学年会

作者：许华丹李冬马娇艳赵元馨许龙田睿刘亚男孙连坤苏静吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林大学基础医学院免疫学教研室

肿瘤相关巨噬细胞以M2型为主,IL-33/ST2轴对于巨噬细胞的极化至关重要。因此探究该信号轴对TAM的作用及机制,以及对于所处微环境中肿瘤细胞生长的影响具有重要意义。体外培养野生型,1133过表达或受体敲除(St2)小鼠骨髓来源的巨噬细胞。... 详细信息

肿瘤相关巨噬细胞以M2型为主,IL-33/ST2轴对于巨噬细胞的极化至关重要。因此探究该信号轴对TAM的作用及机制,以及对于所处微环境中肿瘤细胞生长的影响具有重要意义。体外培养野生型,1133过表达或受体敲除(St2)小鼠骨髓来源的巨噬细胞。检测其线粒体功能以及代谢变化,并建立小鼠体内模型检测其对肿瘤生长的影响。结果表明IL-33/ST2轴改变线粒体自噬水平,促进细胞代谢从糖酵解向OXPHOS转换。并且这种转换与线粒体损伤无关,MMP没有被显著改变,而是可能与MTOR的活性相关。IL-33/ST2轴通过调控巨噬细胞线粒体自噬重塑其极化状态,为肿瘤治疗中M2向M1的转化提供新思路。

关键词： IL-33/ST2 巨噬细胞极化线粒体自噬糖代谢肿瘤微环境

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