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中国病理生理杂志 2021年第1期37卷 159-165页

作者：郭文钧高冉樊天斐王婧中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京100730

磷酸二酯酶5(phosphodiesterase 5,PDE5)抑制剂通过阻断环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)的分解,使包括一氧化氮(nitric oxide,NO)在内的血管舒张介质作用延长,从而导致阴茎和肺的血管舒张。PDE5主要在阴茎海绵体和肺... 详细信息

磷酸二酯酶5(phosphodiesterase 5,PDE5)抑制剂通过阻断环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)的分解,使包括一氧化氮(nitric oxide,NO)在内的血管舒张介质作用延长,从而导致阴茎和肺的血管舒张。PDE5主要在阴茎海绵体和肺血管中发现,所以其抑制剂的主要作用是延长阴茎勃起和降低肺血管压力。

关键词：磷酸二酯酶5 抑制剂西地那非环磷酸鸟苷

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HDAC抑制剂西达本胺对外周T细胞淋巴瘤PD-L1表达的影响

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中国实验血液学杂志 2022年第6期30卷 1741-1745页

作者：颜妙名李钊璇陈翀张薇周道斌中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血液内科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系北京100005

目的:探讨西达本胺对外周T细胞淋巴瘤PD-1/PD-L1免疫逃逸信号通路调控机制的作用。方法:使用不同浓度梯度的西达本胺处理Jurkat细胞系,通过荧光定量PCR与流式细胞术检测西达本胺处理后Jurkat细胞系PD-L1和JAK/STAT通路基因mRNA表达及细... 详细信息

目的:探讨西达本胺对外周T细胞淋巴瘤PD-1/PD-L1免疫逃逸信号通路调控机制的作用。方法:使用不同浓度梯度的西达本胺处理Jurkat细胞系,通过荧光定量PCR与流式细胞术检测西达本胺处理后Jurkat细胞系PD-L1和JAK/STAT通路基因mRNA表达及细胞表面PD-L1蛋白表达的变化。结果:西达本胺上调Jurkat细胞系PD-L1的mRNA表达,上调水平呈剂量依赖(r=0.989),5.0μmol/L组PD-L1的mRNA表达是无处理组的15.4倍。Jurkat细胞系PD-L1细胞比例不足0.5%。西达本胺上调Jurkat细胞表面PD-L1蛋白表达。西达本胺上调TAT3 Jurkat细胞系JAK2、STAT1、S的mRNA表达,高浓度组(5.0μmol/L组)上调水平明显。同时JAK/STAT通路上游负调控基因SOCS1、SOCS3的mRNA表达上调。结论:外周T细胞淋巴瘤中,西达本胺可能通过上调STAT1上调细胞表面PDL1,并诱导T细胞趋化因子,提高PD-1单抗的反应率及T细胞毒性作用。

关键词：西达本胺 JAK/STAT通路 PD-1/PD-L1

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成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定

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基础医学与临床 2024年第1期44卷 16-22页

作者：仇佳星刘宇涵郭泓江张迪雅王钰铖鞠瑞郭磊中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁... 详细信息

目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁培养U87 SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现;通过RT-qPCR和Western blot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平;通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例;通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化;通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87 SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态,细胞球在培养过程中会不断增大;在贴壁剂合适的浓度下,U87 SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖;CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P<0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P<0.05);U87 SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P<0.05);U87 SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P<0.05),U87 SLCs体内增殖更加迅速,具有更强的成瘤能力。结论U87 SLCs具有典型的干性特征,是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。

关键词：成胶质细胞瘤干细胞样细胞神经球干性

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稳定表达Cas9蛋白质、荧光蛋白质和荧光素酶的胰腺癌细胞株的建立及鉴定

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基础医学与临床 2024年第10期44卷 1419-1427页

作者：代娣杨振丽夏雨佳卞晓翠刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、病理学系北京100005

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞... 详细信息

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞系(AsPC-1、CFPAC-1、HPAC、BxPC-3、HS 766T、MIA PaCa-2、PANC-1和SW 1990)、小鼠胰腺癌细胞系(Pan02)中,感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9m1.1-Puro,挑选单细胞克隆培养扩增,提取总蛋白质后,Western blot验证Cas9的表达水平;感染荧光蛋白质表达质粒pLv-EF1α-EGFP、pLv-EF1α-mCherry、pLv-EF1α-tdTomato、pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取每种细胞Cas9稳定表达的一个克隆感染pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取其中2个细胞株感染Lv-EF1a-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况;5只BALB/c Nude小鼠皮下接种MIA PaCa-2-Luc2-tdT细胞(1.0×10^(7)个/只),36 d后活体成像。结果筛选到48个Cas9稳定表达的胰腺癌细胞株(其中表达Cas9m1.1的细胞23株,表达Cas9m1.1-Luc2-tdT的细胞25株),筛选到33个荧光蛋白质稳定表达的胰腺癌细胞株(表达EGFP的细胞8株,表达mCherry的7株,表达Luc2-tdT和tdTomato的各9株)。表达mCherry和Cas9的细胞感染mCherry gRNA后,mCherry被敲除。活体成像显示,表达Luc2-tdT的MIA PaCa-2细胞生物发光和荧光发光均存在。结论成功建立了33个荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,其中表达Luc2-tdT的细胞株具有荧光素酶活性;成功建立了48个Cas9稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,Cas9具有基因编辑活性,基因编辑活性因原始细胞系不同而存在差异。

关键词： Cas9 荧光素酶胰腺癌活体成像基因编辑

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羧胺三唑乳清酸盐对人胰腺癌细胞系增殖及脂肪酸合成代谢的影响

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基础医学与临床 2024年第4期44卷 440-446页

作者：郭泓江徐也婷张迪雅仇佳星王钰铖鞠瑞郭磊中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

目的研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌细胞增殖影响及对其脂肪酸合成代谢的调控作用。方法以人胰腺癌细胞系AsPC-1、AsPC-1/GEM(简称AR)、PANC-1、MiaPaCa-2为研究对象,用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞存活率,采用qPCR检测胰腺癌细胞... 详细信息

目的研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌细胞增殖影响及对其脂肪酸合成代谢的调控作用。方法以人胰腺癌细胞系AsPC-1、AsPC-1/GEM(简称AR)、PANC-1、MiaPaCa-2为研究对象,用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞存活率,采用qPCR检测胰腺癌细胞系中脂肪酸合成关键基因mRNA水平,用Western blot检测细胞内腺苷单磷酸依赖蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)通路蛋白表达;利用液相色谱-质谱联用代谢组学技术检测细胞内脂质代谢物质差异。结果与对照组相比,CTO显著降低AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2 4株人胰腺癌细胞活率(P<0.05);CTO下调细胞内脂肪酸合成关键基因的mRNA水平(P<0.05);CTO下调细胞中AMPK、ACC及c-Myc蛋白表达(P<0.05),而增加p-AMPK、p-ACC蛋白表达(P<0.05);CTO减少AR细胞中脂质代谢物含量(P<0.05)。结论 CTO通过抑制癌基因c-Myc蛋白表达及AMPK/ACC通路,下调脂肪酸合成相关基因的表达活性,减弱细胞脂肪酸合成代谢能力,进而抑制人胰腺癌细胞系AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2的增殖能力。

关键词：羧胺三唑乳清酸盐胰腺癌增殖脂肪酸合成代谢

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乳腺癌类器官的培养及鉴定

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1223-1228页

作者：夏雨佳杨振丽代娣刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、... 详细信息

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、顺铂药敏测试。结果共培养建立了44例乳腺癌类器官,均呈实性类球状生长。类器官ER、PR、HER-2、CK表达情况与患者临床样品一致。乳腺癌类器官对化疗药紫杉醇、多柔比星、顺铂具有一定敏感性。结论乳腺癌类器官作为新型体外模型,具有一定异质性,再现体内病生理功能特性。

关键词：乳腺癌类器官药敏实验

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胰腺癌类器官模型的构建及其对化疗药物的敏感性试验

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临床肝胆病杂志 2024年第9期40卷 1853-1858页

作者：王靖宇黄容卢艳陈子然张晓杰任虎张楠赵冬兵宋伟张星光内蒙古医科大学公共卫生学院呼和浩特010110 中国医学科学院基础医学研究所(北京协和医学院基础学院)生物化学与分子生物学系北京100005 中国医学科学院肿瘤医院胰胃外科北京100124

目的建立及鉴定患者来源的类器官模型,并利用该模型进行化疗药物敏感性检测。方法利用已确诊胰腺癌的2例女性患者的手术标本获取肿瘤组织消化后获取胰腺癌细胞,利用基质胶接种于培养皿中进行三维培养;制备石蜡切片并进行苏木精-伊红(HE... 详细信息

目的建立及鉴定患者来源的类器官模型,并利用该模型进行化疗药物敏感性检测。方法利用已确诊胰腺癌的2例女性患者的手术标本获取肿瘤组织消化后获取胰腺癌细胞,利用基质胶接种于培养皿中进行三维培养;制备石蜡切片并进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色,通过与亲本肿瘤组织对比,检测其能否保留体内肿瘤的组织病理学特征;利用不同浓度的7种化疗药物处理胰腺癌类器官,使用Cell Titer-Glo®3D试剂测定细胞活力,分析药敏结果。结果成功建立了2例患者来源的胰腺癌类器官,HE染色和免疫组化染色结果显示胰腺癌类器官与其来源的患者肿瘤在组织病理学特征上一致;2例胰腺癌类器官均对吉西他滨单药、奥沙利铂与SN38+氟尿嘧啶联用更为敏感,患者1较患者2敏感性更高,来自不同患者的类器官对药物反应存在个体差异。结论本研究成功构建的胰腺癌类器官模型能够反映亲本胰腺肿瘤的组织学分型,并能够进行体外化疗药物敏感性试验,有望为患者临床用药提供参考。

关键词：胰腺肿瘤类器官药物疗法联合敏感性试验

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器官芯片——更具前景的体外模型

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1202-1207页

作者：杨振丽夏雨佳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内... 详细信息

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内各系统角度介绍器官芯片的研究进展和应用,同时提出目前器官芯片发展过程中存在的局限性和未来的发展方向。

关键词：器官芯片类器官疾病模型

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Zfp335调控效应性Treg比例及肿瘤免疫应答

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第5期 385-390页

作者：申晓楠李文华贾筱萱杨飚王昕刘海艳焦安君雷蕾杨小丰张保军西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫系西安交通大学医学部转化医学研究院感染与免疫研究所通用环球西安西航医院上海交通大学医学院上海市免疫学研究所

目的锌指蛋白335（Zfp335）参与调控胸腺T细胞的早期发育和外周T细胞亚群的分化，本研究旨在探讨Zfp335调控调节性T细胞（Treg）在肿瘤免疫中的作用和机制。方法用他莫昔芬在Treg中特异性敲除Zfp335基因[Zfp335fl/fl叉头盒P3（FOXP3）... 详细信息

目的锌指蛋白335（Zfp335）参与调控胸腺T细胞的早期发育和外周T细胞亚群的分化，本研究旨在探讨Zfp335调控调节性T细胞（Treg）在肿瘤免疫中的作用和机制。方法用他莫昔芬在Treg中特异性敲除Zfp335基因[Zfp335fl/fl叉头盒P3（FOXP3）creERT2],并构建MC38移植瘤模型。接种肿瘤后第7天，观察并测量肿瘤的大小，第12天剥离肿瘤组织，用流式细胞术检测野生型（WT）组和Zfp335敲除(Zfp335CKO)组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞和Treg的比例，以及效应性Treg（eTreg）的线粒体功能。结果自接种肿瘤后第10天开始，Zfp335CKO组肿瘤体积显著小于WT组。Zfp335CKO组CD4+T细胞和CD8+T细胞的肿瘤浸润比例、及其对应的效应细胞比例显著高于WT组。Zfp335CKO组CD4+T细胞和CD8+T细胞分泌细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的比例显著高于WT组，Zfp335CKO组CD8+T细胞分泌颗粒酶B （GzmB）的比例显著高于WT组。Zfp335CKO组Treg、诱导性共刺激分子（ICOS）+Treg比例显著低于WT组。Zfp335CKO组eTreg表达Mitotracker Deep Red的水平显著低于WT组。结论在肿瘤发生过程中，Treg特异性缺失Zfp335导致其活化减弱，与eTreg的线粒体功能降低有关；Zfp335CKO小鼠肿瘤浸润的效应性T细胞增多、分泌杀伤性细胞因子增多，进而抵抗肿瘤发展。

关键词：锌指蛋白335(Zfp335) T细胞效应性Treg(eTreg) 肿瘤免疫代谢

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江苏省成年居民骨密度异常患病情况及其影响因素分析

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中国公共卫生 2024年第11期40卷 1289-1294页

作者：王伟壕何慧婧胡耀达陈兴明许锬涂吉李昂林彬彬刘启航陆治名席天舒黄海波许达陈智立王子超单广良中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院流行病与卫生统计学系北京100005 重大疾病共性机制研究全国重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院耳鼻咽喉头颈外科北京100730 苏州大学苏州医学院公共卫生学院流行病学教研室江苏省老年病预防与转化重点实验室苏州215123

目的了解江苏省成年居民骨密度异常患病情况及其影响因素,为制定骨质疏松症的预防控制措施提供参考依据。方法于2023年10—11月采取多阶段整群随机抽样方法在江苏省抽取6000名≥20岁成年居民进行问卷调查、体格检查、实验室检测和骨密... 详细信息

目的了解江苏省成年居民骨密度异常患病情况及其影响因素,为制定骨质疏松症的预防控制措施提供参考依据。方法于2023年10—11月采取多阶段整群随机抽样方法在江苏省抽取6000名≥20岁成年居民进行问卷调查、体格检查、实验室检测和骨密度测量,并应用多因素非条件logistic回归模型分析该地区成年居民骨密度异常患病的主要影响因素。结果江苏省最终纳入分析的5786名成年居民中,骨密度异常、骨量减少和骨质疏松症患病数分别为1280、1148和132例,患病率分别为22.12%、19.84%和2.28%;2265名男性成年居民中,骨密度异常、骨量减少和骨质疏松症患病数分别为624、560和64例,患病率分别为27.55%、24.72%和2.83%;3521名女性成年居民中,骨密度异常、骨量减少和骨质疏松症患病数分别为656、588和68例,患病率分别为18.63%、16.70%和1.93%;江苏省不同性别成年居民比较,男性居民骨密度异常、骨量减少和骨质疏松症的患病率均高于女性居民,差异均有统计学意义(χ^(2)=63.625、55.792和4.944,均P<0.05)。多因素非条件logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁和既往发生脆性骨折是江苏省男性成年居民骨密度异常患病的危险因素,大专及以上文化程度是江苏省男性成年居民骨密度异常患病的保护因素;年龄≥60岁、高血压和已绝经是江苏省女性成年居民骨密度异常患病的危险因素,中学文化程度和中度体力劳动是江苏省女性成年居民骨密度异常患病的保护因素。结论江苏省成年居民骨密度异常患病率较低,男性居民骨密度异常患病率高于女性居民,年龄和文化程度是该地区男性和女性成年居民骨密度异常患病的共同影响因素。

关键词：骨密度异常患病情况影响因素成年居民

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