检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2003年第6期19卷 525-527页

作者：王济顾立刚彭桂英王庆国北京中医药大学基础医学院微生物学与免疫学教研室北京100029

目的:观察束缚应激对荷S180瘤小鼠Th1/Th2型细胞因子及肿瘤生长的影响。方法:取腹腔传代第7天的肿瘤细胞S180,调细胞密度至1×1010/L,注射于昆明小鼠右腋皮下,每只0.2 mL。接种后束缚限制活动,8 h/d,并设单纯束缚组、单纯肿瘤组和... 详细信息

目的:观察束缚应激对荷S180瘤小鼠Th1/Th2型细胞因子及肿瘤生长的影响。方法:取腹腔传代第7天的肿瘤细胞S180,调细胞密度至1×1010/L,注射于昆明小鼠右腋皮下,每只0.2 mL。接种后束缚限制活动,8 h/d,并设单纯束缚组、单纯肿瘤组和正常对照组。10 d后处死小鼠,剥取肿瘤称瘤重,计算胸腺指数,分别采用MTT比色法和丝裂原激活淋巴母细胞法检测脾T细胞增殖及产生Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的能力,并取血清用ELISA法检测Th2型细胞因子IL-4、IL-10的含量。结果:束缚应激可明显增加荷瘤小鼠的瘤重(P<0.01),降低小鼠胸腺指数和脾T细胞的增殖能力(P值分别<0.01),降低荷瘤小鼠脾细胞产生IL-2和IFN-γ的能力(P值分别<0.01),并可使小鼠血清IL-4、IL-10的含量明显增加(P值分别<0.01和<0.05)。结论:束缚应激可显著抑制荷瘤小鼠的细胞免疫功能,使产生Th1型细胞因子的功能减弱,Th2型细胞因子的含量增加,导致Th1/Th2细胞的平衡进一步向Th2细胞漂移。这可能是其促进肿瘤生长的重要机制。

关键词：束缚应激肿瘤细胞免疫细胞因子

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溶瘤新城疫病毒激活NK细胞诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制

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国际生物制品学杂志 2025年第2期48卷 67-74页

作者：孙桐吴醒李然梁莹樊晓晖广西医科大学基础医学院微生物学教研室，南宁　530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室，南宁　530021

目的探讨溶瘤新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）激活的自然杀伤（natural killer，NK）细胞通过分泌颗粒酶A（granzyme A, GZMA）诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制，尤其是焦亡相关蛋白焦孔素B（gasdermin B, GSDMB）表达水平... 详细信息

目的探讨溶瘤新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）激活的自然杀伤（natural killer，NK）细胞通过分泌颗粒酶A（granzyme A, GZMA）诱导结直肠癌细胞焦亡的作用机制，尤其是焦亡相关蛋白焦孔素B（gasdermin B, GSDMB）表达水平在其中的作用。方法以不同浓度的NDV（NDV1、2、3：0.001、0.010、0.100血凝单位/mL）与NK细胞共培养16 h，同时设空白对照组（仅培养基）和无NDV刺激的NK细胞对照组。各组分别与GSDMB高表达的SW837和低表达的SW480结直肠癌细胞共孵育后，通过定量PCR和ELISA分别检测NK细胞中效应分子的基因表达及蛋白质分泌水平，通过细胞增殖-毒性和乳酸脱氢酶释放检测评价2种肿瘤细胞株的存活率及焦亡情况，通过细胞形态学观察和GSDMB切割的蛋白质印迹检测验证NK细胞介导的焦亡效应。结果定量qPCR和ELISA结果显示，NDV感染上调了NK细胞中GZMA、IFN-γ和穿孔素的基因表达及蛋白质分泌，NDV3刺激组的GZMA（t = 6.70, P = 0.003）和IFN-γ（t = 13.66, P < 0.001）分泌水平最高，且与无刺激对照的差异均有统计学意义。相比于与未刺激的NK细胞共孵育者，与激活的NK细胞共孵育后SW837细胞活力抑制（NDV3-NK效靶比 = 1、2：t = -10.17、-25.94，均P < 0.001）、乳酸脱氢酶（NDV3-NK效靶比 = 1、2：t = 13.70、9.75，均P < 0.001）释放、N端GSDMB（NDV2-NK效靶比=1、2：t = 6.80、3.07，均P < 0.05）均增加，且差异有统计学意义。SW837细胞出现质膜气泡化及肿胀等焦亡特征，而SW480细胞虽出现活力抑制和细胞破坏，但焦亡表现不明显。结论NDV激活的NK细胞能通过分泌GZMA诱导结直肠癌细胞焦亡效应，尤其在GSDMB高表达的细胞中效果显著。

关键词：新城疫病毒焦亡结直肠肿瘤自然杀伤细胞颗粒酶A

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甲型流感病毒M2e与CtB基因融合表达及其免疫特性初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 263-266页

作者：杨晓芳江滟李婉宜邝玉蒋忠华王丰平李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)... 详细信息

目的:构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,并初步研究其在NIH3T3细胞中的表达特性及免疫特性。方法:重叠PCR法扩增甲型流感病毒M2e基因和霍乱毒素CtB基因,将扩增得到的融合基因片段M2e-CtB定向克隆入真核表达载体pcDNA 3.1a(+)中,再转化*** JM109。将酶切鉴定、PCR扩增及序列鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1a(+)-M2e/CtB。用KEGEN TRANSⅢ阳离子聚合物将重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB转染NIH3T3细胞,经免疫荧光、RT-PCR产物序列分析、Western blot检测其稳定表达产物。结果:重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB含完整的M2e和CtB基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。重组质粒转染NIH3T3细胞后获得了有效表达,并且稳筛株细胞裂解物和上清均能用抗霍乱毒素抗体和抗流感病毒抗体检测到Mr约18000的蛋白条带。结论:成功构建了真核表达重组质粒pcDNA 3.1a(+)-M2e/CtB,初步证明其在体外表达的重组蛋白可分泌至胞外,且有M2e和CTB的双特异反应原性和免疫原性,为流感病毒核酸疫苗的进一步研究奠定了坚实基础。

关键词：甲型流感病毒 M2e 黏膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位融合蛋白

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抗CD4单抗增强抗CD3单抗/IL-2活化的肿瘤特异性T细胞的抗瘤活性

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 160-163页

作者：黄辉俞红熊思东林云璐秦慧莲复旦大学基础医学院免疫学教研室上海200032 复旦大学基础医学院微生物学教研室上海200032

目的探讨抗CD4mAb增强抗CD3mAb刺激的肿瘤特异性T细胞增殖和杀瘤活性的作用。方法将肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,采用4种不同的方案培养1单独加2×104U/LrIL2IL2组2单独加抗CD3mAb抗CD3组3加抗CD3mAb48h后,再加入抗CD3mAb和2×... 详细信息

目的探讨抗CD4mAb增强抗CD3mAb刺激的肿瘤特异性T细胞增殖和杀瘤活性的作用。方法将肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,采用4种不同的方案培养1单独加2×104U/LrIL2IL2组2单独加抗CD3mAb抗CD3组3加抗CD3mAb48h后,再加入抗CD3mAb和2×104U/LrIL2抗CD3+IL2组4同时加抗CD3mAb和抗CD4mAb48h后,再加入抗CD3mAb、抗CD4mAb和2×104U/LrIL2抗CD3+IL2+抗CD4组。然后分别检测4组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果抗CD3+IL2组细胞的3HTdR掺入量在第6,12和20d分别为:22045、13986和1931;抗CD3+IL2+抗CD4组细胞的3HTdR掺入量在第6、12和20d,分别为46193、31047和7443,后者明显高于前者P0.05。在培养12d时,抗CD3+IL2组的细胞对FBL3细胞株的最大杀伤率为83.6%;抗CD3+IL2+抗CD4组细胞的最大杀伤率为91.7%。细胞表型:FACS分析表明,抗CD3+IL2+抗CD4组培养12d的细胞,99%以上为Thy1.2+细胞,且CD4+、CD25+细胞的百分率均高于抗CD3+IL2组。结论抗CD4mAb对抗CD3mAb刺激、IL2诱导的肿瘤特异性T细胞的增殖和杀瘤活性具有增强作用。

关键词：抗CD4单抗抗CD3单抗肿瘤特异性T细胞肿瘤过继疗法免疫疗法

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非分型流感嗜血杆菌Hap_s蛋白的分离纯化

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南方医科大学学报 2007年第12期27卷 1880-1883页

作者：李婉宜邝玉李明远杨远蒋中华姚锋陈长春四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在2... 详细信息

目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化HapS蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol/LNaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。

关键词： Haps蛋白阳离子交换层析蛋白纯化

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大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌MLVA法基因分型研究

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中国人兽共患病学报 2015年第10期31卷 923-926页

作者：聂恒王旭东吴利先大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室大理671000

目的探讨MLVA基因分型法在云南大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌基因分型中的运用,初步研究其基因型特征。方法选取大理地区61株合并HIV双重感染者结核分枝杆菌临床分离株,采用聚合酶链反应(PCR)分别对VNTR位点进行检测分析,应用B... 详细信息

目的探讨MLVA基因分型法在云南大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌基因分型中的运用,初步研究其基因型特征。方法选取大理地区61株合并HIV双重感染者结核分枝杆菌临床分离株,采用聚合酶链反应(PCR)分别对VNTR位点进行检测分析,应用BioNumerics(6.6)软件进行聚类分析。结果共对61株合并HIV双重感染者的结核分枝杆菌的15个VNTR位点进行检测,呈现出明显的基因多态性。各个位点的分辨能力不同,其中MIRU26(0.839)最高,MIRU4(0.341)最低。经聚类分析,61株双重感染结核分枝杆菌菌株可分为5个基因群,61个基因型,以Ⅰ型占比例最大占51.6%(32/61);H37Rv减毒株在Ⅱ型。结论大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌VNTR基因存在明显多态性,主要流行菌群为北京家族基因型。

关键词：结核分枝杆菌基因分型双重感染 HIV MLVA

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常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第2期26卷 151-155页

作者：洪帮兴江丽芳胡玉山方丹云陶剑平晏辉钧中山大学基础医学院微生物学教研室广东广州510080

【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通... 详细信息

【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。【结果】运用通用引物可以扩增出13 属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱。SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。【结论】PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。

关键词： 23S rDNA 限制性片段长度多态性单链构象多态性聚合酶链反应食源性感染

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鼠β-防御素2(mBD2)真核表达质粒的构建及稳定表达株的鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 28-31页

作者：魏晓丽施桥发李虹李婉宜蒋忠华李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩... 详细信息

目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增小鼠mBD2基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体,对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2转染SiHa细胞,采用G418进行稳定表达株的筛选,用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定细胞内mBD2蛋白表达情况。结果:提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增了250bp左右的产物,通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2。SiHa被该质粒转染后,在100mg/LG418浓度下筛选20d,得到了稳定表达mBD2的细胞株,用免疫荧光染色显示mBD2蛋白在胞质中有大量表达,RT-PCR反应扩增到了mBD2的mRNA。结论:成功地构建了pcDNA3.1(+)/mBD2真核表达质粒,mBD2蛋白在SiHa细胞中能稳定表达,这些结果为进一步深入研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤的作用奠定了基础。

关键词： mBD2 真核表达免疫荧光 RT-PCR

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乳酸菌阴道胶囊治疗60例复发性念珠菌性阴道炎的疗效分析

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中国妇幼保健 2011年第20期26卷 3189-3190页

作者：李江筠陈森洲周玲徐雅娟刘菁桂林医学院附属医院广西桂林541001 桂林医学院医学微生物学与免疫学教研室

目的：观察乳酸菌阴道胶囊治疗复发性念珠菌性阴道炎的疗效。方法：将120例复发性念珠菌性阴道炎的患者随机分成对照组和治疗组各60例,用2%~4%碳酸氢钠液冲洗阴道后,对照组采用达克宁栓治疗,每天1次400 mg阴道用药,连续6天;治疗组采用... 详细信息

目的：观察乳酸菌阴道胶囊治疗复发性念珠菌性阴道炎的疗效。方法：将120例复发性念珠菌性阴道炎的患者随机分成对照组和治疗组各60例,用2%~4%碳酸氢钠液冲洗阴道后,对照组采用达克宁栓治疗,每天1次400 mg阴道用药,连续6天;治疗组采用乳酸菌阴道胶囊和达克宁栓联合治疗,达克宁栓每天1次400 mg阴道用药,连续6天,而后用乳酸菌阴道胶囊每天1次0.5 g阴道用药,连续5天。于停药后5天、90天复查,比较两组近期疗效和复发率。结果：治疗组治愈率83.3%,对照组治愈率63.3%,两组治愈率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。两组复发率分别为8.6%和25.0%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：乳酸菌阴道胶囊和达克宁栓联合治疗复发性念珠菌性阴道炎疗效较好,复发率低,值得临床推广应用。

关键词：乳酸菌阴道胶囊达克宁栓复发性念珠菌性阴道炎

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靶向CXCR4的siRNA对人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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第三军医大学学报 2009年第21期31卷 2140-2142页

作者：臧文巧轩小燕杜英李倩如李敏杨璇郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的探讨CXCR4siRNA对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人食管鳞癌细胞株EC9706裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射化学合成CXCR4siRNA,同时以瘤旁注射阴性对照siRNA和PBS为对照。监测肿瘤生长变化,测量瘤质量。HE染色观察肿瘤... 详细信息

目的探讨CXCR4siRNA对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人食管鳞癌细胞株EC9706裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射化学合成CXCR4siRNA,同时以瘤旁注射阴性对照siRNA和PBS为对照。监测肿瘤生长变化,测量瘤质量。HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测CXCR4mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验结果显示,与对照组比较,CXCR4siRNA组肿瘤生长受到明显抑制,瘤质量下降;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明CXCR4siRNA处理组CXCR4mRNA和蛋白表达下调。结论CXCR4siRNA能抑制人食管鳞癌EC9706细胞株裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调CXCR4mRNA和蛋白的表达。

关键词：食管鳞癌 CXCR4 裸鼠 RNAi

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