检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫突触与T细胞活化

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 111-113,116页

作者：杜丽华昆明医学院基础医学院微生物学暨免疫学教研室昆明650031

淋巴细胞活化是适应性免疫应答的关键因素,免疫突触的形成是T细胞识别抗原、增殖和活化的关键步骤,是机体细胞免疫应答和体液免疫应答的重要组成部分。干预免疫突触形成,可望用于预防治疗与免疫相关的疾病。

关键词：免疫突触免疫识别 T细胞活化

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幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性

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世界华人消化杂志 2006年第8期14卷 789-794页

作者：毛小琴杨致邦张绍兰田一玲黄进重庆医科大学基础医学院微生物学教研室重庆400016

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一... 详细信息

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素重组蛋白蛋黄抗体活性细胞毒性

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QS系统中LasR和RhlR蛋白对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及免疫原性研究(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第1期33卷 31-38页

作者：谢轶曾蔚贾文祥杨发龙杨维青程曦康梅王兰兰张再容四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学华西医学中心临床医学院实验医学部成都610041

为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全... 详细信息

为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全自动荧光测序仪测序,并用 Blast 方法检测克隆片段. 利用 pGEX4T-1 载体分别构建 lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒,在大肠杆菌 BL21(DE3)中诱导表达,并经过免疫印迹实验验证其生物学活性. 用硅胶膜培养法建立生物被膜模型,诱导转入了pGFPuv 质粒的铜绿假单胞菌 PAG0305 形成生物被膜,并测定 LasR 蛋白和 RhlR 蛋白对生物被膜形成的影响. 同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率. 以 PAO1 染色体 DNA 为模板的 PCR 结果显示,lasR 的全基因序列为 720 bp,rhlR 基因序列为 726 bp,经序列分析和同源性比较分别与 GenBank 中 lasR/rhlR 基因(登录号:M59425; AE004768) 的同源性为 100%. 大肠杆菌 BL21 (DE3) 分别转化重组质粒 lasR/rhlR-pGEX4T-1 后,经 IPTG诱导和 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表达的融合蛋白分子质量均为 54 ku 左右,与预期蛋白质分子质量相同. 荧光显微镜观察和测定结果表明,在硅胶膜上 PAG0305 能够形成典型的发荧光的生物被膜,LasR 或 RhlR 蛋白 (10 mg/L) 存在的情况下,PAG0305 生物被膜的形成速度在前三天比对照组平均提高 40.77%,而且两蛋白单独存在与同时存在时的作用相同. 体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率显著高于未经免疫的正常组 (P < 0.05). 上述结果表明:构建的lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒能够在大肠杆菌 BL21(DE3)中成功地表达并具有生物学活性. LasR/RhlR 蛋白在体外模型中能够加快铜绿假单胞菌生物被膜的形成速度,是调节铜绿假单胞菌生物被膜形成的重要因素之一. 免疫结果表明,重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用,这为进一步开展疫苗研究奠定了基础.

关键词：铜绿假单胞菌数量感知系统生物被膜免疫原性

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一种制备高效感受态细胞的方法

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大理学院学报（综合版） 2007年第2期6卷 27-27页

作者：潘云华周东霞陈元鼎大理学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室云南大理671000 中国医学科学院医学生物研究所中心实验室云南昆明650118

感受态是细菌最易吸收外源DNA的状态，感受态细胞是基因工程中外源DNA转化必不可少的材料，通常是用新鲜的CaCl2溶液诱导产生，但制备时对实验条件要求较高，本方法制备感受态细胞操作简便，价格便宜，而且转化效率高。

关键词：质粒转化感受态细胞细菌

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HPV16 E5蛋白原核表达、鉴定及真核表达稳定株的筛选

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南方医科大学学报 2006年第1期26卷 31-35页

作者：施桥发魏晓丽李虹王保宁张卫东蒋忠华曹康李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 成都医学院病原生物学教研室四川成都610083

目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶... 详细信息

目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG 对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westem blotting检测目标蛋白表达情况。将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切 pET32(+)／E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3．1(+)空质粒,构建pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒并对NIH3T3 细胞进行转染,最后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16 E5基因表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32／E5,在1 mmol／L IPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10％左右。真核表达质粒pcDNA3．1(+)／E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21 d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列。结论成功构建了pET32／E5原核和 pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础。

关键词： HPV16 原核表达 SDS-PAGE 免疫印迹 RT-PCR

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浅论硕士研究生细胞培养实验的教学

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解剖学杂志 2006年第1期29卷 133-135页

作者：李京培方海红余莉姚娟吕树娟王明丽安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032

细胞培养技术现已广泛应用于生物医学各领域。1996年始我室向硕士研究生开设细胞实验课程，32学时，8个实验，2个学分。目前已建立一套适合培养硕士生学习的实验教材、教学资料和能让270位学生在14d内完成的一个系列实验，获得了较好的... 详细信息

细胞培养技术现已广泛应用于生物医学各领域。1996年始我室向硕士研究生开设细胞实验课程，32学时，8个实验，2个学分。目前已建立一套适合培养硕士生学习的实验教材、教学资料和能让270位学生在14d内完成的一个系列实验，获得了较好的教学效果并受到学生的广泛欢迎。在有限的条件（包括时间和经费）下学习实验技术，这要求教师尽可能多地增加细胞培养知识信息量和尽可能地提高授课质量。在实践中我们发现以我要开展细胞培养课题研究——问题式为中心授课方式，有助于调动学生的学习兴趣和提高学生综合运用知识解决问题的能力。

关键词：细胞培养技术硕士研究生实验课程教学资料学习兴趣生物医学实验教材教学效果实验技术授课质量

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CKLFSF8对BGC823细胞表皮生长因子受体表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 617-619页

作者：黄玉敏李付广杜英郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:探讨趋化因子CKLFSF8对人胃腺癌细胞株BGC823表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:RTPCR检测细胞株BGC823中CKLFSF8基因的表达;利用脂质体将CKLFSF8转染BGC823;倒置显微镜观察BGC823生长情况,免疫细胞化学法检测CKLFSF8基因转... 详细信息

目的:探讨趋化因子CKLFSF8对人胃腺癌细胞株BGC823表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:RTPCR检测细胞株BGC823中CKLFSF8基因的表达;利用脂质体将CKLFSF8转染BGC823;倒置显微镜观察BGC823生长情况,免疫细胞化学法检测CKLFSF8基因转染前后BGC823细胞EGFR的表达。结果:BGC823生长过程中可测到CKLFSF8表达;CKLFSF8转染前后BGC823细胞株EGFR表达的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CKLFSF8基因转染对人胃癌细胞株BGC823EGFR的表达有明显抑制作用,可望在肿瘤治疗中发挥重要作用。

关键词：趋化因子人胃腺癌细胞株表皮生长因子受体

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内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第3期26卷 241-245页

作者：沈爱国刘海鸥陈梦玲高永静程纯南通大学基础医学院微生物学和免疫学教研室南通大学神经再生重点实验室226001

目的观察内毒素脂多糖(LPS)致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达变化和细胞定位。方法腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组。用RealtimePCR法和Westernblot法检测各组肺组织SSeCKS... 详细信息

目的观察内毒素脂多糖(LPS)致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达变化和细胞定位。方法腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组。用RealtimePCR法和Westernblot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位。结果SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系:1、5、10和15mgkg组SSeCKSmRNA水平皆显著高于对照组(P<0.05),且随注射剂量增高SSeCKSmRNA表达量亦逐渐增高;不同时相LPS(5mgkg)注射后肺组织中SSeCKSmRNA水平表达呈动态变化过程,1h开始增高,3h达到表达高峰,12h降至正常水平;SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞。结论SSeCKS是炎症反应蛋白,其表达量与炎症的严重程度相关。内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调。

关键词： LPs SSeCKS 血管内皮细胞炎症

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免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 299-301,305页

作者：陈文捷李虹贾怡张林吕梅励李明远蒋中华四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室四川成都610041

目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂... 详细信息

目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性。结果构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达。表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞。结论免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础。

关键词：免疫毒素 mIP10 DT390 真核表达

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重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达

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郑州大学学报（医学版） 2006年第3期41卷 491-494页

作者：何炜章茜张朝赵国强郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大... 详细信息

目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE1基因原核表达载体。方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT- PCR扩增出MAGE1基因。酶切鉴定后,将其插入pGEM T载体,再克隆至原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达质粒pGEX4T-1MAGE-1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR扩增出长度为927bp的MAGE1基因。重组表达质粒pGEX4T1MAGE1转化大肠杆菌BL21(DE3)后经诱导表达,目的蛋白约57000,占菌体总蛋白的23%。结论:成功构建出重组原核表达载体pGEX4T-1MAGE-1,该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。

关键词： MAGE-1 pGEX-4T-1 表达载体原核表达融合蛋白

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