检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2006年第5期22卷 480-483,486页

作者：刘北星吕昌龙木村吉延中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001 福井大学医学部微生物学教研室

目的:穿孔素介导的细胞凋亡机制在流感病毒初次感染中作用的研究。方法:用流感病毒A/PR/8/34经鼻感染穿孔素基因敲除鼠和同源对照C57BL/6小鼠,采用PFU方法测定肺内流感病毒增殖状况;免疫组织化学染色方法观察小鼠病毒感染后感染细胞的... 详细信息

目的:穿孔素介导的细胞凋亡机制在流感病毒初次感染中作用的研究。方法:用流感病毒A/PR/8/34经鼻感染穿孔素基因敲除鼠和同源对照C57BL/6小鼠,采用PFU方法测定肺内流感病毒增殖状况;免疫组织化学染色方法观察小鼠病毒感染后感染细胞的凋亡情况;利用乳酸脱氢酶释放法检测感染鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性。结果:穿孔素基因缺乏导致流感病毒在小鼠肺内大量增殖;小鼠清除感染病毒所需时间延长;病毒感染细胞发生凋亡的时间亦因穿孔素的缺乏而延迟;感染小鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性均显著降低。结论:穿孔素依赖的细胞介导的细胞毒效应在控制流感病毒初次感染,快速清除感染病毒方面起重要作用。

关键词：穿孔素流感病毒细胞毒活性细胞凋亡

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人食管癌Eca-109细胞膜肿瘤抗原的筛选

引用

郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 610-613页

作者：李付广杜英孙涛董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:从人食管癌Eca109细胞入手,筛选出食管癌高效细胞膜肿瘤抗原的大致范围。方法:采用敏感的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)来确定Eca109细胞人主要组织相容性复合体(HLA)基因分型,用HLA血清学分型技术筛选健康志愿者;改良的Nevi... 详细信息

目的:从人食管癌Eca109细胞入手,筛选出食管癌高效细胞膜肿瘤抗原的大致范围。方法:采用敏感的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)来确定Eca109细胞人主要组织相容性复合体(HLA)基因分型,用HLA血清学分型技术筛选健康志愿者;改良的Neville法结合超滤法纯化膜蛋白并分组:<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000、总膜蛋白共7个组,各组抗原负载树突状细胞(DC),以DC激活的T淋巴细胞为效应细胞,Eca109细胞为靶细胞,设效靶比为81、161、321,用MTT法检测效应细胞杀伤率。结果:Eca109细胞HLA的基因分型为A03,A24;B35,B37;DRB101,DRB112;DR52;DRB3;筛选到1例表型为A03杂合子的健康志愿者。根据MTT检测,在效靶比为81、161和321时,膜蛋白相对分子质量小于10000组的肿瘤细胞杀伤率与未使用去垢剂的总膜蛋白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而相对分子质量小于3000组的杀伤率最高,与各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Eca109细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞免疫反应的肿瘤抗原,相对分子质量小于3000的膜蛋白成分中可能存在人食管癌的高效肿瘤抗原。

关键词：食管癌肿瘤抗原 HLA 膜蛋白树突状细胞

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人食管癌Eca-109细胞膜蛋白的分离和纯化

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郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 607-610页

作者：李付广杜英孙涛杨红艳董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:建立人食管癌Eca109细胞系膜蛋白分离和初步纯化方法。方法:使用改良的Neville法提取细胞膜,在pH6.3的条件下,用去垢剂TritonX100和辛基β葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来,以超滤法纯化膜蛋白并分组。结果:在pH6.3的条件下,适当的... 详细信息

目的:建立人食管癌Eca109细胞系膜蛋白分离和初步纯化方法。方法:使用改良的Neville法提取细胞膜,在pH6.3的条件下,用去垢剂TritonX100和辛基β葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来,以超滤法纯化膜蛋白并分组。结果:在pH6.3的条件下,适当的去垢剂与膜蛋白质量之比使用去垢剂辛基β葡糖苷时为61;使用TritonX100时为21。超滤法将膜蛋白分为相对分子质量<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000共6个组分。结论:获得适当的去垢剂与膜蛋白质量比,并获得了不同的膜蛋白组分,为进一步研究人食管癌Eca109细胞肿瘤抗原奠定了基础。

关键词：食管癌细胞株膜蛋白

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鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

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四川大学学报（医学版） 2006年第5期37卷 801-803,813页

作者：杨发龙贾文祥谢轶曾蔚杨维青岳华四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 西南民族大学生命科学与技术学院动物医学教研室

目的建立检测鸭疱疹病毒1型（鸭瘟病毒）的实时荧光定量PCR方法，为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列，设计引物和探针，采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR，用含有125bp扩... 详细信息

目的建立检测鸭疱疹病毒1型（鸭瘟病毒）的实时荧光定量PCR方法，为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列，设计引物和探针，采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR，用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照，构建标准曲线，对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价，同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2．3×10^5～2．3×10拷贝数之间有很好的线性关系（r=0．999）；实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒，说明有很好的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为1．22～6．69以及2．09～8．84，说明有较好的重复性；对非鸭瘟病毒DNA无扩增，说明有很好的特异性；在对病毒DNA的检测方面，比传统PCR的敏感性高出10^4倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。

关键词：鸭疱疹病毒1型鸭瘟实时荧光定量PCR TaqMan

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人食管癌Eca-109细胞M_r小于3000膜蛋白肿瘤抗原肽的筛选

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郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 614-616页

作者：李付广金戈董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:寻找被T细胞识别的食管癌细胞抗原肽,为食管癌免疫治疗奠定基础。方法:应用pH3.3的枸橼酸磷酸盐缓冲液间隔24h多次酸洗贴壁生长的Eca109细胞,获得人主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(HLAⅠ)类分子结合的多肽,经超过滤,反相HPLC色谱层... 详细信息

目的:寻找被T细胞识别的食管癌细胞抗原肽,为食管癌免疫治疗奠定基础。方法:应用pH3.3的枸橼酸磷酸盐缓冲液间隔24h多次酸洗贴壁生长的Eca109细胞,获得人主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(HLAⅠ)类分子结合的多肽,经超过滤,反相HPLC色谱层析得到不同组分多肽,DC递呈抗原肽刺激特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞杀伤作用。结果:Mr小于3000的混合多肽经过反相HPLC可获得50多个组分,混合肽、P17、P29和P41组分体外诱导实验表明可以诱导出较强的CTL反应。结论:酸洗法能有效获得HLAⅠ类分子结合的多肽抗原,Mr小于3000的多肽成分中3个组分存在能引起特异性的抗肿瘤CTL免疫反应的肿瘤抗原,具有潜在的免疫治疗作用。

关键词：食管癌肿瘤抗原 HLA 抗原肽树突状细胞

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铜绿假单胞菌生物被膜形成能力与基因型的相关性分析

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四川大学学报（医学版） 2006年第5期37卷 666-669页

作者：程曦杨维青石磊尹晓琳谢轶曾蔚李心晖苏建裕寇亚丽贾文祥四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 华南理工大学食品与生物工程学院河北医科大学基础医学院

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱... 详细信息

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱,应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图。结果48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同。生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性,PA在17%遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型,生物被膜形成能力强的PA大都属于D型,其遗传相似性系数为42%。结论绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力;生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性;生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性。

关键词：铜绿假单胞菌生物被膜基因指纹图谱基因型

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外周血T淋巴细胞的培养、纯化及鉴定

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郑州大学学报（医学版） 2006年第4期41卷 605-607页

作者：李付广李沛靳静董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 河南职工医学院郑州450003

目的:建立外周血T淋巴细胞初步纯化方法。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),在低剂量IL2维持下,利用细胞培养淘汰法筛选纯化T淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变。结果:用流式细胞术检测发现:B淋巴细... 详细信息

目的:建立外周血T淋巴细胞初步纯化方法。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),在低剂量IL2维持下,利用细胞培养淘汰法筛选纯化T淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变。结果:用流式细胞术检测发现:B淋巴细胞于第1周时基本死亡,第3周时完全消失;NK细胞于第1周时明显增加,第4周时大部分死亡;第4周时,所培养的细胞绝大多数为T淋巴细胞。T淋巴细胞亚群的整体变化趋势为:随着培养时间的延长,CD4+百分数稍增加,CD8+百分数明显增加,CD4+/CD8+比值明显降低,CD3+CD16+CD56+百分数明显增加。结论:在IL2维持下,人PBMCs培养4周时,收获培养细胞为初步纯化的T淋巴细胞。

关键词： T淋巴细胞流式细胞术细胞培养纯化

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人脐血树突状细胞分泌外来体的特性及其增强CTL杀伤活性的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第1期22卷 33-36页

作者：杜英陈绍倩黄玉敏董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用。方法分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,... 详细信息

目的探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用。方法分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,继续培养2d。收集DC并从其培养上清中通过离心(1×105g)分离外来体。用流式细胞术、SDS-PAGE、透射电子显微镜(TEM)和MTT比色法,对DC和外来体的特性及其对CTL杀伤活性的增强作用进行分析。结果用3种细胞因子体外诱导UBMC12d,可使其扩增10倍,并出现DC典型的形态特征。负载肿瘤抗原后,细胞表面可高表达MHC-I、MHC-II、CD40、CD80、CD86、CD11c和CD54。利用超速离心法能从DC培养上清中分离出外来体。混合淋巴细胞反应(MLR)和CTL杀伤活性的分析表明,脐血DC分泌的外来体能有效地刺激T细胞增殖并增强CTL的杀伤活性。结论由UBMC可诱导出大量的DC并分泌外来体。后者可有效地向CTL细胞递呈肿瘤抗原使之活化并增强其杀伤活性。

关键词：脐血树突状细胞外来体细胞毒效应

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可生物降解材料作为基因载体的研究

引用

生物医学工程学杂志 2006年第3期23卷 573-577页

作者：杨远贾文祥祁欣曾蔚杨发龙谢轶杨维青张再容周绍兵李孝红四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 中国科学院成都有机化学所高分子材料室

研究可生物降解聚合物作为控制释放的基因载体。合成聚乳酸-聚乙二醇二元共聚物（Poly（Dl-lactic acid）-co—poly（ethylene glycol，PELA）及聚乳酸-聚乙二醇-聚乙醇酸三元无规共聚物（Poly（lactic acid）-co—poly（ethylene glyco... 详细信息

研究可生物降解聚合物作为控制释放的基因载体。合成聚乳酸-聚乙二醇二元共聚物（Poly（Dl-lactic acid）-co—poly（ethylene glycol，PELA）及聚乳酸-聚乙二醇-聚乙醇酸三元无规共聚物（Poly（lactic acid）-co—poly（ethylene glycol）-co—poly（glycolic acid）random copolymer，PLGAE），包裹质粒pCH110。探讨了PELA和PLGAE作为基因载体包裹DNA的各种影响因素，这两种控制释放体系的体外降解及释放行为以及对它们的细胞毒性及体外转染效率进行了测定。制备的PELA微球平均粒径1～3μm，包裹效率为62％。PLGAE微球平均粒径0．72μm，包裹效率为70％。采用包裹了质粒pCH110的微球对COS-1细胞的细胞毒性及转染实验中得出：二者的细胞毒性较小，PELA和PLGAE的转染效率均较高，且能持续表达96h，其中PLGAE的缓释效果更明显。可生物降解聚合物材料作为基因载体具有较强的优越性。

关键词：可生物降解聚合物基因载体微球转染

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胶质瘤RNA致敏的人脐血树突状细胞诱导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

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郑州大学学报（医学版） 2006年第3期41卷 470-472页

作者：徐虹黄玉敏孙蕾阮丽荣杜英河南省肿瘤研究所郑州450003 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:制备人脐血来源的树突状细胞(DCs),用胶质瘤RNA诱导其成熟,并观察DCs诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性。方法:以rhGM CSF、IL4诱导人脐血单个核细胞向DCs分化并鉴定。提取胶质瘤RNA与DCs混合,使DCs致敏,未致敏的DC... 详细信息

目的:制备人脐血来源的树突状细胞(DCs),用胶质瘤RNA诱导其成熟,并观察DCs诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性。方法:以rhGM CSF、IL4诱导人脐血单个核细胞向DCs分化并鉴定。提取胶质瘤RNA与DCs混合,使DCs致敏,未致敏的DCs为对照组。观察细胞形态并检测致敏前后DCs的表型。将DCs与外周血T细胞共培养,以胶质瘤细胞为靶细胞,采用MTT比色法检测T细胞抗肿瘤活性差异。结果:人脐血单个核细胞于诱导第5d呈现典型的DCs形态;经rhGM CSF、IL4诱导培养后,CD86、CD11c、CD54、MHCⅠ、MHCⅡ类分子表达与培养前比较均明显增高(P<0.01)。负载抗原后,MHCⅠ和CD54表达与负载抗原前相比进一步增高(P<0.05)。以DCs诱导活化的T细胞与胶质瘤细胞共培养可使胶质瘤细胞的生长受到抑制,并最终导致其死亡;杀伤率与未负载抗原的对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:人脐血单个核细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DCs。经抗原致敏后,能增强淋巴细胞对相应肿瘤细胞的体外杀伤效应。

关键词：树突状细胞胶质瘤 RNA 细胞毒 T淋巴细胞

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