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中国中西医结合消化杂志 2006年第4期14卷 219-222页

作者：沙建平邹全明张新胜祝彼得陈卫银陈永峰刘开云张卫军郭鹰第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室四川成都610041 成都中医药大学四川成都610075

[目的]研究葡激酶(r-Sak)和益活清胰汤对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用及2药合用的协同作用。[方法]162只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=18)、造模(B)组、益活清胰汤治疗(C)组r、-Sak治疗(D)组及益活清胰汤合用r-Sak治疗(E)组(均n=... 详细信息

[目的]研究葡激酶(r-Sak)和益活清胰汤对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用及2药合用的协同作用。[方法]162只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=18)、造模(B)组、益活清胰汤治疗(C)组r、-Sak治疗(D)组及益活清胰汤合用r-Sak治疗(E)组(均n=36)。每组随机选9只用于测定18 h存活情况,SAP造模术后6、12、18h各取9只测定胰腺血流量,计算腹水量,测定血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPO),并在光镜下观察胰腺病理变化。[结果]A、B、C、D和E组大鼠18 h存活数分别为9、2、6、7、8只。A、C、D、E 4组SAP术后6、12、18 h AMY、LPO、腹水均较B组明显降低,C组较D组低,E组较C、D组低(均P<0.05)。术后各时点B组胰组织血流量呈逐渐下降趋势,B、C、D、E组较A组显著下降(P<0.05)。C、D、E 3组各时点胰组织血流量降低值

关键词：重症急性胰腺炎益活清胰汤葡激酶

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急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

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胰腺病学 2006年第4期6卷 208-210页

作者：沙建平邹全明张新胜祝彼得陈卫银陈永峰赵艳胡蓉冯本华重庆市生物制药工程技术中心第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都中医药大学

目的研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核因子-κB(NF-κB)的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、ANP组(n=27)、葡激酶干预组(n= 27),ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自... 详细信息

目的研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核因子-κB(NF-κB)的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、ANP组(n=27)、葡激酶干预组(n= 27),ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自造模前2 d腹腔注射葡激酶1．5 mg／kg体重,一天2次,共4次。ELISA法测定制模后6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量;RT- PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达;免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,常规观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果ANP组术后6 h大鼠心肌NF-κB mRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下词,血TNF-α、IL-6明显下降,与ANP组比较,差异均显著(P<0．05)。结论ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关。葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。

关键词：葡激酶胰腺炎,急性坏死性心肌损伤 NF—κB

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儿童血小板减少症的可溶性选择素P、L检测

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河南科技大学学报（医学版） 2006年第4期24卷 251-253页

作者：王雅军盛光耀肖胜伟杜英郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450001 郑州大学第一附属医院小儿血液科河南郑州450052 洛阳市中心医院小儿科河南洛阳471009

目的探讨血浆可溶性选择素在儿童血小板减少症血浆浓度变化。方法儿童ITP患者25例,白血病15例,再生障碍性贫血15例,均为初发病例,在接受治疗前采集清晨空腹全血。对照组为15例健康体检儿童,采集清晨空腹全血2 m l。所有血液标本均先检... 详细信息

目的探讨血浆可溶性选择素在儿童血小板减少症血浆浓度变化。方法儿童ITP患者25例,白血病15例,再生障碍性贫血15例,均为初发病例,在接受治疗前采集清晨空腹全血。对照组为15例健康体检儿童,采集清晨空腹全血2 m l。所有血液标本均先检测即时血小板计数,然后分离血浆检测可溶性选择素。结果ITP组和白血病组血浆sP浓度低于对照组(P<0.05)。再生障碍性贫血组血浆sP浓度与对照组无显著差异。然而与对照组的血浆sP/Plt浓度相比,ITP组和再生障碍性贫血组均高于对照组9倍左右(P<0.01),白血病组则无显著差异。白血病组血浆sL浓度高于对照组3倍左右(P<0.01),其它两组无显著差异。结论ITP组sP浓度下降,sP/Plt浓度明显升高;白血病组sP浓度明显下降,sL明显升高;再障组sP/Plt明显升高。

关键词：血小板减少症选择素可溶性儿童

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重组葡激酶对重症急性胰腺炎大鼠心肌损伤的治疗作用

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中国中西医结合消化杂志 2006年第6期14卷 355-358页

作者：沙建平陈炫祝彼得邹全明张新胜陈卫银赵艳冯本华胡蓉陈永峰第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 四川大学华西医学中心第一临床医院感染科四川成都610042 成都中医药大学四川成都610075 四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室四川成都610041

[目的]研究重组葡激酶(r-Sak)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的发展及心肌损伤的干预作用,探讨其作用机制。[方法]63只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=9),模型对照(B)组(n=27),r-Sak治疗(C)组(n=27)。SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射... 详细信息

[目的]研究重组葡激酶(r-Sak)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的发展及心肌损伤的干预作用,探讨其作用机制。[方法]63只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=9),模型对照(B)组(n=27),r-Sak治疗(C)组(n=27)。SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6、12、18 h各时点血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及心肌肌钙蛋白(CTn1)水平,免疫组化法检测术后6、121、8 h各时点心肌核转录因子-κB(NF-κB)的活化情况,光镜及电镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。[结果]大鼠从术后6 h开始出现CTn1、CK-MB升高,治疗组各时点较对照组明显下降(P<0.05)。IL-6、TNF-α水平亦从术后6 h开始升高,其变化在时点上与CTn1、CK-MB的变化具有一致性,治疗组各时点与对照组相比明显下降(P<0.05)。治疗组胰腺及心肌组织的出血坏死减轻,微血管血栓的形成减少。[结论]r-Sak能减轻SAP的病变程度和心肌损伤,可能具有治疗SAP及预防心肌损伤等并发症的作用,特异性溶栓剂的应用可能成为治疗SAP的新途径。

关键词：重症急性胰腺炎溶栓剂葡激酶心肌损伤

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亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药性及耐药相关基因的研究

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药性及耐药相关基因的研究

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中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班

作者：朱家馨周宇麒黄静张天托江丽芳中山大学附属第三医院呼吸内科中山大学附属第三医院呼吸内科中山大学附属第三医院呼吸内科中山大学附属第三医院呼吸内科中山大学基础医学院微生物学教研室

碳青霉烯类抗生素以亚胺培南、美罗培南为代表,是一类高效广谱的β-内酰胺类抗生素。对于由产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL)、AmpC β-内酰胺酶的多重耐药革兰阴性杆菌引起的重症感染,碳青霉烯类抗生素是最后一道防线。铜绿假单胞菌是医院... 详细信息

碳青霉烯类抗生素以亚胺培南、美罗培南为代表,是一类高效广谱的β-内酰胺类抗生素。对于由产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL)、AmpC β-内酰胺酶的多重耐药革兰阴性杆菌引起的重症感染,碳青霉烯类抗生素是最后一道防线。铜绿假单胞菌是医院内获得性感染重要的条件致病菌。为了探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床感染现状及其耐药特征,了解本地医院感染铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制,确定本地铜绿假单胞菌碳青霉烯酶流行的主要基因型,我们收集2002年1月至2005年8月间广州地区4间医院临床分离的无重复铜绿假单胞菌500株,用纸片法筛选出70株耐亚胺培南菌株并采用

关键词：耐药铜绿假单胞菌耐药相关基因碳青霉烯酶基因亚胺培南耐药性

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糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

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微生物学杂志 2006年第5期26卷 19-22页

作者：李平飞李艳梅赵兰娟刘敏万崎陈新文章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室基础医学院免疫学系和过敏及其免疫相关疾病湖北省重点实验室湖北武汉430071 清华大学生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室第二军医大学微生物学教研室中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071

检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设... 详细信息

检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴性对照和空载质粒对照。血清标本用ELISA检测特异性IgG及其亚类IgG1I、gG2α表达水平,观测特异性体液免疫反应和脾细胞分泌细胞因子水平。与阴性对照和空载组对比,E2和N-糖基化突变体质粒DNA免疫小鼠都能诱导产生强烈的特异性免疫反应(P<0.01),并且N-糖基化突变体(560、576位糖基化突变体)质粒DNA与野生型E2相比,其特异性IgG效价明显降低(P<0.05),IL-4分泌水平明显降低(P<0.05)。E2糖蛋白的560、576位N-糖基化位点是诱导体液免疫反应所需要的,除去560、576位N-糖基化会降低E2诱导的体液免疫应答。

关键词： HCV 包膜蛋白糖基化体液免疫

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糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究

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第五届全国感染与免疫及生物制品学术研讨会

作者：李平飞李艳梅赵兰娟刘敏万崎陈新文章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室基础医学院免疫学系和过敏及其免疫相关疾病湖北省重点实验室湖北武汉430071 中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071 清华大学生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室第二军医大学微生物学教研室

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响.野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫 3 次,末次免疫后第 10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响.野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫 3 次,末次免疫后第 10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴性对照和空载质粒对照.血清标本用ELISA检测特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2α表达水平,观测特异性体液免疫反应和脾细胞分泌细胞因子水平.与阴性对照和空载组对比,E2和N-糖基化突变体质粒DNA免疫小鼠都能诱导产生强烈的特异性免疫反应(P＜0.01),并且N-糖基化突变体(560、576 位糖基化突变体)质粒DNA与野生型E2相比,其特异性IgG效价明显降低(P＜0.05),IL-4分泌水平明显降低(P＜0.05).E2糖蛋白的 560、576 位N-糖基化位点是诱导体液免疫反应所需要的,除去 560、576 位N-糖基化会降低E2诱导的体液免疫应答.

关键词： HCV 包膜蛋白糖基化体液免疫

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DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第1期26卷 56-60页

作者：曾祥凤江丽芳方丹云汤云霞魏惠永晏辉钧中山大学基础医学院微生物学教研室

[目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫... 详细信息

[目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、Western Blot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性.[结果]用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;Western Blot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66～69)×103的DEN2重组E蛋白结合.空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用.[结论]成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础.

关键词： E蛋白 DEN 单克隆抗体生物学活性登革病毒 ELISA 分泌杂交瘤细胞硫酸铵沉淀法纯化

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登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定

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免疫学杂志 2005年第6期21卷 482-484,488页

作者：晏辉钧江丽芳方丹云周经姣郭辉玉中山大学基础医学院微生物学教研室广州510080

目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RTPCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒... 详细信息

目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RTPCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌***,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDSPAGE检测表达产物。结果RTPCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长NS3基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达Mr约78000的蛋白质,与DEN2多抗和登革2型病毒患者恢复期血清的免疫印迹证实它为型特异的重组NS3蛋白质。结论成功将克隆的全长DEN2NS3基因在酵母菌中表达,获得的重组NS3蛋白质具有免疫反应性。

关键词：登革2型病毒 NS3基因巴氏毕赤酵母基因表达抗体

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常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨

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中山大学学报（医学科学版） 2005年第2期26卷 151-155页

作者：洪帮兴江丽芳胡玉山方丹云陶剑平晏辉钧中山大学基础医学院微生物学教研室广东广州510080

【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通... 详细信息

【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。【结果】运用通用引物可以扩增出13 属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱。SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。【结论】PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。

关键词： 23S rDNA 限制性片段长度多态性单链构象多态性聚合酶链反应食源性感染

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