检索结果-内蒙古大学图书馆

中山大学学报（医学科学版） 2005年第1期26卷 38-41页

作者：晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳中山大学基础医学院微生物学教研室广东广州510080 南方医科大学微生物学教研室广东广州510515

【目的】在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒包膜(M)蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并对其进行血清学鉴定。【方法】克隆编码SARS冠状病毒M蛋白的基因,并在原核系统中表达GST-M融合蛋白,用Westernblot和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析GS... 详细信息

【目的】在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒包膜(M)蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并对其进行血清学鉴定。【方法】克隆编码SARS冠状病毒M蛋白的基因,并在原核系统中表达GST-M融合蛋白,用Westernblot和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析GST-M融合蛋白。【结果】10份SARS患者恢复期血清均能识别M-GST融合蛋白,并在Mr=52000附近出现特异性结合带;而10份正常人血清不与M-GST融合蛋白起反应。【结论】本研究获得了SARS冠状病毒GST-M融合蛋白,它可与SARS患者的恢复期血清产生特异性的结合反应,为研究SARS冠状病毒感染宿主细胞的过程和制备重组疫苗提供了条件。

关键词： SARS冠状病毒表达 GST融合蛋白融合蛋白恢复期免疫学特性血清大肠杆菌特异性结合克隆

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豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

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郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1021-1024页

作者：李敏卢新亚赵国强杜献堂郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克... 详细信息

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克隆测序结果为一923bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3150～3565bp位置,包含4个外显子(外显子13～16)及3个内含子(内含子13～15);与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%。结论:①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体。

关键词：豫医无毛小鼠昆明小鼠无毛基因序列分析

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郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19感染情况测定

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 383-384页

作者：靳静冷弘徐慧丹刘全离赵国强河南职工医学院微生物学与免疫学教研室郑州450053 洛阳市卫生学校微生物学教研室洛阳471001 淮阳卫生职业中专微生物学教研室淮阳466700 漯河医学专科学校微生物学教研室漯河462000 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA... 详细信息

目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别为51.7%(15/29)、6.9%(2/29)和13.8%(4/29),237例正常孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别30.4%(72/237)、1.3%(3/237)和2.5%(6/237),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:郑州市孕妇中存在人微小病毒B19的感染,可能导致不明原因流产或死胎。

关键词：人微小病毒B19 孕妇流产死胎郑州市

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束缚应激条件下S180荷瘤小鼠Th1/Th2细胞因子失衡与肿瘤的生长(英文)

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中国临床康复 2005年第16期9卷 248-250页

作者：王济顾立刚彭桂英王庆国北京中医药大学基础医学院微生物学与免疫学教研室北京市100029

背景:束缚是研究心理应激的可靠方法。束缚应激可以通过下丘脑-垂体-肾上腺轴抑制T细胞免疫。目的:观察束缚应激状态下小鼠体内Th1/Th2平衡的改变以及荷瘤小鼠肿瘤生长情况,并试图发现心理应激对肿瘤细胞生长的影响。设计:以实验动物为... 详细信息

背景:束缚是研究心理应激的可靠方法。束缚应激可以通过下丘脑-垂体-肾上腺轴抑制T细胞免疫。目的:观察束缚应激状态下小鼠体内Th1/Th2平衡的改变以及荷瘤小鼠肿瘤生长情况,并试图发现心理应激对肿瘤细胞生长的影响。设计:以实验动物为研究对象的对照研究。单位:北京中医药大学基础医学院微生物学与免疫学教研室。材料:实验在北京中医药大学基础医学院免疫学实验室开展。选择鼠龄6～8周的昆明种小鼠为实验对象。购进后适应性饲养3d,称质量,并按体质量顺序编号,剔除体质量最大和最小的个体,再随机分入4个实验组中。分组后每组有小鼠16只(雌雄各8只),体质量18～20g。方法:取腹腔传代第7天的肿瘤细胞S180,用生理盐水洗涤后,用RP-MI1640细胞培养基调细胞密度至1×1010L-1,在单纯肿瘤组和肿瘤束缚组小鼠右腋皮下注射0.2mL/只。同时在正常对照组和单纯束缚组相同部位注射生理盐水0.2mL/只,接种后将单纯束缚组和肿瘤束缚组小鼠用特制小管限制活动,8h/d。10d后处死小鼠,剥取肿瘤和胸腺并分别称其质量,计算胸腺指数,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法和丝裂原激活淋巴母细胞法检测脾T细胞增殖及产生Th1型细胞因子白细胞介素2、干扰素γ的能力,并取血清用酶联免疫吸附法检测Th2型细胞因子白细胞介素4、白细胞介素10的?

关键词：应激肿瘤免疫,细胞细胞因子类

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HBsAg和B19VP2复合抗原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 387-390页

作者：赵国强张世杰刘全离徐慧丹陈宗德郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 漯河医学专科学校微生物学教研室漯河462000 淮阳卫生职业中专微生物学教研室淮阳466700

目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统。方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEMT重组,构建出pGEMTHBs及pGEMTVP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEMTHBs中的HBs基因克隆入pGEX-5-X-1... 详细信息

目的:构建乙肝表面抗原(HBsAg)人微小病毒B19VP2蛋白的原核高效表达系统。方法:用PCR扩增HBsAg基因及B19病毒VP2基因,分别与pGEMT重组,构建出pGEMTHBs及pGEMTVP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEMTHBs中的HBs基因克隆入pGEX-5-X-1表达载体中,得到pGEX-5X-1-HBs;再将pGEMTVP2中的VP2基因克隆入pGEX5X1HBs中,得到pGEX5-X-1-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定。结果:pGEX5X1HBsVP2可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达产物经Western-blot鉴定具有HBsAg及B19VP2的双重抗原性。结论:成功构建pGEX5X1HBsVP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为HBV和B19病毒重组多价疫苗的研究奠定了基础。

关键词： B19 VP2 HBsAg 原核表达

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肠侵袭性大肠埃希菌O抗原多糖的致病作用

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中华传染病杂志 2005年第2期23卷 83-86页

作者：钟启平陈恩临徐建设董亚利天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070 天津医科大学基础医学院超微病理学教研室 300070

目的研究肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)O抗原多糖(OPS)的特异性致病作用。方法提取并纯化大肠埃希菌O29———EIEC的脂多糖(LPS)亚单位分子———OPS进行体内外试验,观察其毒性作用并与LPS作对比。结果EIECOPS可引起HeLa细胞病变;致兔回肠... 详细信息

目的研究肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)O抗原多糖(OPS)的特异性致病作用。方法提取并纯化大肠埃希菌O29———EIEC的脂多糖(LPS)亚单位分子———OPS进行体内外试验,观察其毒性作用并与LPS作对比。结果EIECOPS可引起HeLa细胞病变;致兔回肠袢肠黏膜出血,但不引起肠腔积液;电镜观察OPS致病变的HeLa细胞,明显可见细胞的超微病理损害。结论EIECOPS有特异的致病作用,与其LPS的内毒素作用不同;大肠埃希菌O29(致病菌株)OPS毒性作用比大肠埃希菌HB101(非致病菌株)OPS毒性强烈。

关键词：肠侵袭性大肠埃希菌 O抗原多糖致病作用脂多糖(LPS) EIEC Hela细胞毒性作用致病菌株体内外试验 OPS 细胞病变黏膜出血电镜观察病理损害特异性亚单位内毒素

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铜绿假单胞菌耐药性在生物被膜形成过程中的变化

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第4期25卷 314-318页

作者：谢轶杨维青贾文祥程曦曾蔚杜艳李学如张再容四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 西南交通大学生物工程系

目的　研究铜绿假单胞菌遗传性耐药(gyrA基因突变和MexAB OprM主动外排)在生物被膜形成过程中对药物抗性的作用。方法　通过PCR技术鉴定gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株,利用三亲杂交的方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转到铜绿假单... 详细信息

目的　研究铜绿假单胞菌遗传性耐药(gyrA基因突变和MexAB OprM主动外排)在生物被膜形成过程中对药物抗性的作用。方法　通过PCR技术鉴定gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株,利用三亲杂交的方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转到铜绿假单胞菌药物敏感株中,测定gyrA基因突变株、MexAB OprM主动外排株以及带有绿色荧光蛋白的铜绿假单胞菌在特氟隆上产生生物被膜耐药的规律。结果　筛选出gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株。通过三亲杂交成功构建了带有pGFPuv质粒的铜绿假单胞菌。将突变株和敏感株培养在最低杀菌浓度(MBC)的环丙沙星溶液中形成生物被膜使菌株的存活率均在50%以上。结论　比较遗传性耐药和生物被膜耐药的作用表明gyrA基因突变和主动外排在生物被膜耐药形成前期发挥主要作用,当生物被膜完全形成之后,铜绿假单胞菌的耐药性有可能是由生物被膜介导的。

关键词：铜绿假单胞菌生物被膜形成过程耐药性 gyrA基因突变绿色荧光蛋白基因突变株主动外排遗传性耐药最低杀菌浓度三亲杂交膜耐药药物抗性技术鉴定环丙沙星敏感株 PCR 特氟隆存活率

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SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测

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中国公共卫生 2005年第5期21卷 513-515页

作者：晏辉钧赵卫方丹云周经姣张文炳龙北国郭辉玉江丽芳中山大学基础医学院微生物学教研室广州510080 南方医科大学热卫系微生物学教研室

目的　确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法　用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特... 详细信息

目的　确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法　用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果　在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT- PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT -PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论　在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。

关键词：传染性非典型肺炎衣原体 SARS冠状病毒电镜逆转录多聚酶链式反应

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嗜肺军团菌m ip基因真核表达重组质粒构建与表达

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四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 773-775页

作者：王涛陈建平李虹张雷陶大昌杨春蕾四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川大学华西医院四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T ... 详细信息

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T 3细胞,采用免疫荧光法和W estern-b lot分别鉴定pcDNA 3.1-m ip的瞬时表达产物和稳定表达产物。结果在细胞膜和细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA 3.1-m ip成功转入N IH 3T 3细胞,并在细胞膜和细胞内获得短暂表达;用嗜肺军团菌兔血清抗体检测pcDNA 3.1-m ip稳定转染的N IH 3T 3细胞,在相对分子质量24×103处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA 3.1-m ip在细胞内表达出M ip蛋白。空质粒pcDNA 3.1(+)转染的N IH 3T 3细胞未检测到绿色荧光和杂交信号。结论成功构建m ip基因真核表达重组质粒,并在N IH 3T 3细胞中表达出相对分子质量为24×103的M ip蛋白。

关键词：嗜肺军团菌 mip基因转染体外表达

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人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 588-590页

作者：赵国强汤黎明路静赵军宋谦崔自由杨洪艳赵继敏黄幼田董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T... 详细信息

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。

关键词：人B7-2 绿色荧光蛋白肿瘤疫苗免疫效应

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