检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 773-775页

作者：王涛陈建平李虹张雷陶大昌杨春蕾四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川大学华西医院四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T ... 详细信息

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T 3细胞,采用免疫荧光法和W estern-b lot分别鉴定pcDNA 3.1-m ip的瞬时表达产物和稳定表达产物。结果在细胞膜和细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA 3.1-m ip成功转入N IH 3T 3细胞,并在细胞膜和细胞内获得短暂表达;用嗜肺军团菌兔血清抗体检测pcDNA 3.1-m ip稳定转染的N IH 3T 3细胞,在相对分子质量24×103处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA 3.1-m ip在细胞内表达出M ip蛋白。空质粒pcDNA 3.1(+)转染的N IH 3T 3细胞未检测到绿色荧光和杂交信号。结论成功构建m ip基因真核表达重组质粒,并在N IH 3T 3细胞中表达出相对分子质量为24×103的M ip蛋白。

关键词：嗜肺军团菌 mip基因转染体外表达

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人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 588-590页

作者：赵国强汤黎明路静赵军宋谦崔自由杨洪艳赵继敏黄幼田董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T... 详细信息

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。

关键词：人B7-2 绿色荧光蛋白肿瘤疫苗免疫效应

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应用流式细胞术动态观测小鼠树突状细胞诱导的T细胞增殖的变化

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郑州大学学报（医学版） 2005年第5期40卷 822-824页

作者：崔自由黄幼田赵继敏赵军路静赵国强赵明耀董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:运用流式细胞术(FCM)分析小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)中T细胞增殖的动态变化。方法:把分别经脂多糖(LPS)和生理盐水(NS)刺激的小鼠树突状细胞(DC)经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后,以1:50的比例与小鼠T细胞(TC)进行同种MLR,分别作为LPS+DC... 详细信息

目的:运用流式细胞术(FCM)分析小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)中T细胞增殖的动态变化。方法:把分别经脂多糖(LPS)和生理盐水(NS)刺激的小鼠树突状细胞(DC)经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后,以1:50的比例与小鼠T细胞(TC)进行同种MLR,分别作为LPS+DC+TC组和NS+DC+TC组,同时设LPS+TC组和空白TC对照组。经体外培养,分别于反应的第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d收集TC,FCM检测TC细胞周期。结果:随培养时间的延长,LPS+DC+TC组、NS+DC+TC组S期细胞及细胞增殖指数均先增后减、LPS+TC组和空白TC对照组则呈下降趋势(P<0.05),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FCM可以从单细胞水平客观、准确地反映淋巴细胞增殖的动态变化。

关键词：混合淋巴细胞反应流式细胞术细胞周期树突状细胞小鼠

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IL-18在抗流感病毒感染早期免疫应答中的作用

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 536-537页

作者：刘北星吕昌龙木村吉延中国医科大学基础医学院免疫学教研室福井大学医学部微生物学教室

IL-18是活化巨噬细胞产生的IFN-γ诱导因子.IL-18可增加脑实质中IFN-γ产生细胞数,增强活化小神经胶质细胞的功能[1].体外实验证明肺巨噬细胞能选择性识别和杀伤被流感病毒感染的组织细胞,抑制流感病毒的增殖[2].本研究利用IL-18基因缺... 详细信息

IL-18是活化巨噬细胞产生的IFN-γ诱导因子.IL-18可增加脑实质中IFN-γ产生细胞数,增强活化小神经胶质细胞的功能[1].体外实验证明肺巨噬细胞能选择性识别和杀伤被流感病毒感染的组织细胞,抑制流感病毒的增殖[2].本研究利用IL-18基因缺陷鼠流感病毒感染模型,探讨IL-18在调节肺巨噬细胞抗流感病毒感染早期免疫应答中的作用。

关键词：流感病毒感染 IL-18 免疫应答 IFN-γ诱导因子早期肺巨噬细胞小神经胶质细胞选择性识别基因缺陷鼠

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稳定表达缺失型DNA聚合酶β的CHO细胞系的建立

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郑州大学学报（医学版） 2005年第5期40卷 817-818页

作者：赵继敏杨洪艳赵国强黄幼田郑智敏金戈董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052

目的:建立稳定表达缺失型DNA聚合酶β(polβ)的细胞系。方法:将已构建的缺失型polβ的真核表达载体pcDNA3.1-polβ用脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),经G418筛选后得到稳定转染的细胞株,用RT-PCR方法鉴定细胞缺失型polβmRNA的表达... 详细信息

目的:建立稳定表达缺失型DNA聚合酶β(polβ)的细胞系。方法:将已构建的缺失型polβ的真核表达载体pcDNA3.1-polβ用脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),经G418筛选后得到稳定转染的细胞株,用RT-PCR方法鉴定细胞缺失型polβmRNA的表达。结果与结论:成功转染和筛选出表达缺失型polβ的细胞株CHO-polβ,建立了稳定表达缺失型polβ的CHO细胞株。

关键词： DNA聚合酶β 细胞转染基因缺失

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DT390-IL2重组质粒治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的初步研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2005年第6期25卷 386-388,400,F003页

作者：陈明琪张林李虹蒋中华庄永华贾怡李明远四川大学华西医学中心基础医学与法医学院微生物学教研室

目的:研究DT390-IL2重组质粒对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:提取髓鞘碱性蛋白(MBP)并经SDS-PAGE鉴定后,用MBP+CFA诱导豚鼠的EAE模型;采用亚精胺法进行DT390-IL2重组质粒的大量制备,并经肌注DT390-IL2重组质粒对EAE... 详细信息

目的:研究DT390-IL2重组质粒对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:提取髓鞘碱性蛋白(MBP)并经SDS-PAGE鉴定后,用MBP+CFA诱导豚鼠的EAE模型;采用亚精胺法进行DT390-IL2重组质粒的大量制备,并经肌注DT390-IL2重组质粒对EAE进行治疗,观察豚鼠临床症状和中枢神经系统病理改变。结果:①所提取的MBP,其分子量在17kD左右,并具有良好的生物学活性,成功地建成了豚鼠的EAE模型;②通过DT390-IL2重组质粒治疗豚鼠EAE,各治疗组与未治疗组相比,其差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:DT390-IL2重组质粒治疗EAE有效。

关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白重组质粒免疫毒素

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真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2的构建

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 583-585页

作者：路静王明臣赵军宋谦崔自由赵继敏杨洪艳黄幼田汤黎明赵国强董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052

目的:构建含人B7-2基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2。方法:应用RT-PCR、巢式PCR方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增出人B7-2cDNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM-T和pEGFP-C3上。结果与结论:酶切及测序证... 详细信息

目的:构建含人B7-2基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2。方法:应用RT-PCR、巢式PCR方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增出人B7-2cDNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM-T和pEGFP-C3上。结果与结论:酶切及测序证实成功构建了克隆载体pGEM-B7-2和真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2。

关键词：人B7分子绿色荧光蛋白真核表达载体克隆

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荧光定量PCR检测B19病毒方法的建立

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 380-382页

作者：赵国强胡军冷弘王岚陈宗德郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 洛阳市卫生学校微生物学教研室洛阳471001 郑州大学护理学院微生物学教研室郑州450052

中图分类号R373摘要目的:建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测人微小病毒B19的方法。方法:根据B19病毒VP2基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆入pGEMT载体,重组质粒pGEM-T-VP2经筛选、鉴... 详细信息

中图分类号R373摘要目的:建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测人微小病毒B19的方法。方法:根据B19病毒VP2基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆入pGEMT载体,重组质粒pGEM-T-VP2经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;对15例B19病毒感染血标本和几种其他病毒进行PCR测定。结果:应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算,15例B19病毒感染标本中B19拷贝数为4.8×105μl-1～8.7×108μl-1;对其他几种病毒的扩增均无信号出现。结论:成功建立了检测B19的荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

关键词： B19 荧光定量PCR 检测

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真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 586-587页

作者：何炜张朝章茜赵国强董子明郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与... 详细信息

目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。

关键词： MAGE—1 pcDNA3.1(+) 真核表达载体

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野生型DNA聚合酶β重组绿色荧光蛋白表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 590-592页

作者：赵国强秦冰何炜赵军路静宋谦崔自由董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNApolβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ。方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNApolβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3,重组质粒pEGF... 详细信息

目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNApolβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ。方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNApolβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3,重组质粒pEGFP-C3-polβ用限制性内切酶酶切鉴定,通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果与结论:多种鉴定方法证实了重组载体pEGFP-C3-polβ中的wtDNApolβ序列与GenBank中已知的序列相符。携带wtDNApolβ的重组增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ构建成功。

关键词： DNA聚合酶β 增强型绿色荧光蛋白 DNA序列分析

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