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前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测

郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 613-615页

作者：王明臣唐琳赵国强赵勤王红钢董子明郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院药理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达。方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况。结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ... 详细信息

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达。方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况。结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均<0.01)。Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P<0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均<0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件。

关键词：前列腺癌良性前列腺增生 DNA聚合酶β PTEN Ha—ras

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人野生型DNA聚合酶β在NIH3T3细胞中的定位

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 596-597页

作者：赵军赵勤赵国强秦冰路静宋谦崔自由赵继敏杨红艳黄幼田汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052

目的:研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNApolβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法:将携带人wtDNApolβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ,用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,观察wtpEGFP-C3-polβ融合基因表... 详细信息

目的:研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNApolβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法:将携带人wtDNApolβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ,用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,观察wtpEGFP-C3-polβ融合基因表达。以转染空质粒pEGFP-C3的NIH3T3细胞为对照。结果:转染细胞均有GFP表达,说明转染成功。转染pEGFP-C3-polβ的细胞胞核荧光强度较胞浆强,而空质粒转染细胞胞浆胞核荧光强度无差别。结论:wtDNApolβ在NIH3T3细胞中定位于胞核内。

关键词：野生型DNA聚合酶β 转染蛋白质定位 NIH3T3细胞

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前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β基因突变检测

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 611-613页

作者：王明臣唐琳赵国强赵勤董子明郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院药理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:研究前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况.方法:采用RT-PCR、DNA序列分析技术对12例Pca及20例BPH组织中的polβ进行检测,并利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据.结果:Pca组织中polβ突变率... 详细信息

目的:研究前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况.方法:采用RT-PCR、DNA序列分析技术对12例Pca及20例BPH组织中的polβ进行检测,并利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据.结果:Pca组织中polβ突变率为4/12,BPH组织中polβ突变率为1/20.突变形式如下:①点突变:325位A→G转换(71位Glu→Gly),721位A→G转换(203位Glu→Gly),768位C-→T转换(219位Gln→终止码),801位A→G转换(230位Lys→Glu),853位A→G转换(247位Glu→Gly),1071位A→G转换(320位Phe→Leu),177.188位CT→AA(22位Leu→Asn).②58 bp片段缺失(181～238位),导致移码及提前终止.结论:Pca组织中polβ的突变以点突变A→G转换为主要突变形式.181～238位的58 bp的大片段缺失系国内外首次发现的突变形式.DNA polβ突变可能与Pca的发生、发展密切相关.

关键词： DNA聚合酶β 前列腺癌良性前列腺增生基因突变序列分析

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诱导分化的人食管癌细胞DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的改变

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郑州大学学报（医学版） 2005年第6期40卷 1018-1021页

作者：金戈李沛赵继敏杨洪艳黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052

目的:了解诱导分化的食管癌细胞中DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的变化。方法:采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用原位杂交、碱基切除修复功能(BER)测定方法分别检测细胞polβ基因的表达和BER功... 详细信息

目的:了解诱导分化的食管癌细胞中DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的变化。方法:采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用原位杂交、碱基切除修复功能(BER)测定方法分别检测细胞polβ基因的表达和BER功能的变化。结果:ATRA、DMSO作用5d后可以诱导Eca109细胞分化。随着Eca109细胞的分化,polβ基因的表达降低,BER恢复。结论:ATRA、DMSO可下调Eca109细胞polβ基因的表达,恢复BER活性使其趋向正常细胞分化。

关键词：食管肿瘤 DNA聚合酶β 全反式维甲酸二甲亚砜细胞分化碱基切除修复

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稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3T3细胞系的建立及其生长特性

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郑州大学学报（医学版） 2005年第5期40卷 819-822页

作者：金戈杨洪艳赵继敏黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052

目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检... 详细信息

目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检测转染细胞polβmRNA和POLB蛋白的表达水平,MTT法测转染细胞生长曲线,免疫组化法测增殖细胞核抗原(PCNA),并用流式细胞仪测细胞周期。结果与结论:成功建立了稳定表达野生型及突变型polβ的NIH3T3细胞系。野生型polβ对NIH3T3细胞生长无明显影响,突变型polβ则使NIH3T3细胞生长速度加快,细胞周期发生改变,细胞多被阻滞在S期。

关键词： DNA聚合酶β NIH3T3细胞系细胞转染

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IL-2、15、22基因对CVB3 VP1 DNA疫苗免疫效果的影响

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中国生物制品学杂志 2005年第3期18卷 222-224页

作者：房文亮牛庆茂金玉怀揣侠王永祥河北医科大学基础医学院微生物学教研室石家庄050017

目的观察白细胞介素2(Interleukin2,IL2)、白细胞介素15(Interleukin15,IL15)和白细胞介素22(Interleukin22,IL22)基因对柯萨奇病毒(CoxasckievirusB3,CVB3)VP1DNA疫苗诱导小鼠免疫应答及保护作用的影响。方法取雄性BALBc小鼠,随机分为6组,每组20只,分别肌内注射盐水、pcDNA3、pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1、pcDNA3IL15+pcDNA3VP1和pcDNA3IL22+pcDNA3VP1,每周1次,共3次,每次免疫后6d取血清用微量中和试验检测CVB3中和抗体,3次免疫后用800TCID50CVB3感染小鼠,观察小鼠的生存时间和生存率。结果pcDNA3VP1、pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高。病毒攻击后,各组的生存率差异无显著意义,pcDNA3IL2+pcDNA3VP1和pcDNA3IL15+pcDNA3VP1组较其他4组生存时间明显延长。pcDNA3IL22+pcDNA3VP1组虽也能诱导小鼠产生中和抗体,但抗体滴度和生存情况无明显变化。结论IL2、IL15基因对CVB3VP1DNA疫苗诱导小鼠产生免疫应答和免疫保护有一定的增强作用,而IL22基因无明显作用。

关键词： DNA疫苗 IL-2 VP1 基因免疫效果 pcDNA3 BALB/c小鼠白细胞介素中和抗体免疫应答生存时间抗体滴度保护作用试验检测免疫次数病毒攻击增强作用免疫保护生存率诱导注射

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SAM-P1鼠对神经毒型流感病毒R404BP株中枢神经系统感染的免疫防御

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中国免疫学杂志 2005年第7期21卷 524-527页

作者：刘北星木村吉延中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳11000 福井大学医学部微生物学教室 9101193

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,... 详细信息

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,感染神经元清除时间以及Th1型细胞免疫。结果:SAMP1鼠对流感病毒R404BP株易感性高,感染后生存率降低,清除感染神经元所需时间延长,脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性低下。结论:老化鼠因机体Th1型免疫应答下降导致对神经毒型流感病毒免疫防御机制的降低。

关键词：老化鼠神经毒型流感病毒R404BP株 Th1型免疫应答

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人微小病毒B19VP2蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 391-393页

作者：胡军王岚宋建伟陈宗德赵国强郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学护理学院微生物学教研室郑州450052 郑州大学医学实验中心郑州450052

目的:利用原核系统表达人微小病毒B19的重组蛋白抗原,为建立ELISA方法诊断B19病毒感染提供特异性抗原。方法:采用PCR方法扩增B19VP2基因,将之插入到T载体中进行测序,验证序列正确后再重组入原核表达载体pET-30a(+),并转化大肠杆菌BL21(D... 详细信息

目的:利用原核系统表达人微小病毒B19的重组蛋白抗原,为建立ELISA方法诊断B19病毒感染提供特异性抗原。方法:采用PCR方法扩增B19VP2基因,将之插入到T载体中进行测序,验证序列正确后再重组入原核表达载体pET-30a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达。用SDSPAGE分析表达产物。表达产物经亲合层析柱纯化得到VP2重组蛋白抗原。用B19VP2IgG对该蛋白进行了Western-Blot分析。结果:筛选出2株B19VP2蛋白抗原高表达菌株,经IPTG诱导后,表达VP2重组蛋白量占菌体总蛋白量的24.6%。结论:VP2重组蛋白具有良好的抗原活性。

关键词：人微小病毒B19 VP2抗原表达

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郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 385-387页

作者：赵国强宋建伟戚敏张世杰陈宗德郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学医学实验中心郑州450052 郑州大学基础医学院药理学教研室郑州450052

目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1～814),849bp(753～1601),663bp(1523～2185),738bp(... 详细信息

目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1～814),849bp(753～1601),663bp(1523～2185),738bp(2124～2861),1011bp(2790～3800),1014bp(3747～4760),914bp(4681～5594)。将其分别克隆入T载体,进行测序分析。结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF)。第1个ORF位于615～2630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2623～4968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3304～4968位核苷酸,编码555个氨基酸。在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1655/5594),T,26.52%(1484/5594),G,22.88%(1280/5594),C,21.02%(1175/5594)。郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3752位C→G导致Ser→Cys)。结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型。

关键词： B19 聚合酶链反应序列分析

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B19 VP2抗原真核表达载体的构建及免疫原性观察

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 377-379页

作者：胡军戚敏张世杰宋建伟赵国强郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院药理学教研室郑州450052 郑州大学医学实验中心郑州450052

目的:探讨以B19VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法:用PCR方法以pGEM1B19为模板扩增出B19VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家... 详细信息

目的:探讨以B19VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法:用PCR方法以pGEM1B19为模板扩增出B19VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家兔血清中B19VP2抗体产生情况。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3-VP2;其作为基因疫苗接种家兔后可产生滴度较高,持续时间较长的抗体。结论:B19VP2基因可作为B19病毒基因疫苗构建的靶基因。

关键词：人微小病毒B19 VP2抗原免疫家兔

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