检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2005年第1期20卷 1-4页

作者：晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳中山大学基础医学院微生物学教研室广东广州510080 南方医科大学热带卫生学系微生物学教研室广东广州510515

从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SD... 详细信息

从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SDS PAGE检测其表达产物。Mut+ 酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约 65kDa和42 kDa的蛋白质,与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M蛋白质,且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。

关键词： SARS冠状病毒 M基因克隆巴氏毕赤酵母表达

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肾移植患者皮肤脓肿分离出糠秕马拉色菌1例报道

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四川大学学报（医学版） 2005年第1期36卷 143-146页

作者：赵红梅冉玉平蒋献曾蔚熊琳代亚林杜小平杨果四川大学华西医院皮肤科成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川大学华西基础医学与法医学院电镜室

报道 1例从肾移植患者腹股沟脓肿中分离出糠秕马拉色菌 ,并通过实验研究其致病性。患者男性 ,33岁 ,因发热伴右侧腹股沟炎性结节 1周入院。3年前曾接受肾移植 ,术后持续使用免疫抑制剂。入院后多种广谱抗生素治疗无效 ,结节破溃形成脓... 详细信息

报道 1例从肾移植患者腹股沟脓肿中分离出糠秕马拉色菌 ,并通过实验研究其致病性。患者男性 ,33岁 ,因发热伴右侧腹股沟炎性结节 1周入院。3年前曾接受肾移植 ,术后持续使用免疫抑制剂。入院后多种广谱抗生素治疗无效 ,结节破溃形成脓肿及深溃疡。脓液及坏死组织培养有酵母样菌落生长 ,菌落涂片镜下见卵形出芽孢子 ,转种后仅在含菜子油的培养基生长 ,各分离株均鉴定为糠秕马拉色菌。将菌悬液经尾静脉注入免疫抑制的小鼠3d后可引起内脏器官的微脓肿和炎性反应 ,病灶中可见出芽孢子 ,透射电镜观察发现其细胞壁内侧有马拉色菌属特有的锯齿状结构。抗真菌治疗采用氟康唑内服和两性霉素 B外敷 ,分离株在治疗前对氟康唑和两性霉素 B均敏感 ,抗真菌治疗后的分离株仅对两性霉素 B敏感。本例报道提示糠秕马拉色菌可引起深部感染。

关键词：糠秕马拉色菌脓肿肾移植

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《医学微生物学》教学方法的探讨

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湖南医科大学学报（社会科学版） 2005年第3期7卷 161-162页

作者：王莉莉陈利玉夏忠弟中南大学基础医学院微生物学教研室

《医学微生物学》教学中应注意“少而精”的原则；重视教材和教学内容的重组与更新；重视培养学生的学习兴趣，创造良好的教学氛围；加强与临床学科的联系，关注世界医学热点。

关键词：微生物微生物学教学方法

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食管癌组织中线粒体DNA突变检测

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 601-603页

作者：宋谦张世杰王明臣高丽王志举赵国强董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 河南省人民医院儿科郑州450003 郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052

目的:检测食管癌组织中线粒体DNA(mtDNA)的突变。方法:提取8例食管癌组织的mtDNA;PCR扩增mtDNA的控制区,纯化PCR产物、与T载体连接,转化大肠杆菌,筛选出阳性克隆,用引物T7/SP6做PCR鉴定后测序,与GenBank序列对比。结果:8例标本mtDNA的... 详细信息

目的:检测食管癌组织中线粒体DNA(mtDNA)的突变。方法:提取8例食管癌组织的mtDNA;PCR扩增mtDNA的控制区,纯化PCR产物、与T载体连接,转化大肠杆菌,筛选出阳性克隆,用引物T7/SP6做PCR鉴定后测序,与GenBank序列对比。结果:8例标本mtDNA的控制区共有36个位点发生突变,其中转换32个,颠换4个;同义突变13个,错义突变23个。结论:mtDNA突变很可能在食管癌的发生中发挥一定作用。

关键词：食管肿瘤线粒体DNA D—loop区突变

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胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

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郑州大学学报（医学版） 2005年第4期40卷 598-600页

作者：赵国强何炜赵勤朱涵赵洁董子明郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生理学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 解放军155医院消化内科开封475003 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的:了解胃癌组织中DNA聚合酶β(polβ)基因的突变情况。方法:利用RT-PCR、单链构象多态性(SSCP)和序列分析对38例胃癌组织及其相应癌旁正常组织标本polβ基因进行检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据,Chou&Fasman算法推测... 详细信息

目的:了解胃癌组织中DNA聚合酶β(polβ)基因的突变情况。方法:利用RT-PCR、单链构象多态性(SSCP)和序列分析对38例胃癌组织及其相应癌旁正常组织标本polβ基因进行检测。利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据,Chou&Fasman算法推测polβ氨基酸序列二级结构。结果:38例胃癌组织标本中SSCP异常9例(23.7%);而对应的癌旁正常组织均未见异常。polβ在低分化胃癌中的突变率达57.1%(8/14),而在中、高度分化胃癌中的突变率为4.2%(1/24),差异有统计学意义(P<0.05)。突变分别为196位A→G(28位Asn→Ser),268位A→G(52位Lys→Arg),790位A→T(226位Asp→Val)。其中196位A→G突变可导致polβ酶蛋白的二级结构明显改变。结果:胃癌组织中的polβ基因突变可能与胃癌的发生、发展有关。

关键词： DNA聚合酶β 胃癌基因突变序列分析

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MAGE-3基因片段真核表达质粒的构建

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中国现代医学杂志 2005年第23期15卷 3576-3579,3582页

作者：裴瑞杨红梅陈洁陈晓玲杨萍赵国强河南职工医学院实验中心河南郑州450003 河南职工医学院病理生理学教研室河南郑州450003 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的克隆人MAGE-3基因片段,以构建真核重组表达质粒pcDNA3.1-MAGE-3,为制备以MAGE-3基因片段为基础的核酸疫苗及探讨相关的肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法RT-PCR法从肝癌组织制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的MAGE-3基因片段,pGEM-TEasy... 详细信息

目的克隆人MAGE-3基因片段,以构建真核重组表达质粒pcDNA3.1-MAGE-3,为制备以MAGE-3基因片段为基础的核酸疫苗及探讨相关的肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法RT-PCR法从肝癌组织制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的MAGE-3基因片段,pGEM-TEasy为克隆载体,pcDNA3.1为真核表达载体,采用DNA重组技术,将目的基因先克隆至pGEM-TEasy载体再亚克隆至pcDNA3.1载体上,然后,据氨苄青酶素(Amp)抗性、蓝白筛选实验、克隆鉴定引物T7/SP6PCR扩增方法鉴定阳性克隆,并对阳性克隆pcDNA3.1-MAGE-3中的插入序列进行DNA测序。结果扩增出了MAGE-3目的基因片段;经蓝白筛选实验、克隆鉴定引物扩增方法鉴定得到重组子pGEM-T-MAGE-3;引物扩增方法鉴定得到重组子pcD-NA3.1-MAGE-3;DNA测序后与GenBank中MAGE-3相应序列比较,结果完全一致。结论成功构建了重组pcDNA3.1-MAGE-3肿瘤核酸疫苗,为肿瘤免疫治疗提供了条件。

关键词： MAGE-3克隆 RT-PCR重组质粒肿瘤免疫治疗

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系统性红斑狼疮患者外周血Th1/Th2细胞平衡的研究

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南通大学学报（医学版） 2005年第4期25卷 253-254页

作者：刘晓娟钱勣虎南通大学基础医学院微生物学教研室南通226001

目的:探讨Th1/Th2细胞因子失衡与系统性红斑狼疮(SLE)发病的关系,为研究SLE的免疫发病机制提供新的思路,为SLE患者的临床诊断和治疗提供实验依据。方法:运用三色荧光标记法流式细胞术检测35例SLE患者(狼疮性肾炎组和不伴狼疮性肾炎组)... 详细信息

目的:探讨Th1/Th2细胞因子失衡与系统性红斑狼疮(SLE)发病的关系,为研究SLE的免疫发病机制提供新的思路,为SLE患者的临床诊断和治疗提供实验依据。方法:运用三色荧光标记法流式细胞术检测35例SLE患者(狼疮性肾炎组和不伴狼疮性肾炎组)和正常对照组20例外周血中Th1和Th2胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的分泌情况。结果:(1)狼疮性肾炎(LN)患者Th1及Th1/Th2比值较对照组明显升高(P<0.01)。(2)不伴有LN的SLE患者Th1较对照组降低(P<0.05)。(3)LN患者Th1及Th1/Th2比值较不伴有LN的SLE患者明显升高(P<0.01)。结论:伴有LN的SLE患者Th1细胞功能亢进,具有Th1优势。不伴有LN的SLE是一种Th2细胞相对占优势的自身免疫性疾病。

关键词：系统性红斑狼疮狼疮性肾炎辅助性T细胞流式细胞术

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D,L-聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物微球防龋基因疫苗的体外研究

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免疫学杂志 2005年第3期21卷 182-185页

作者：陈恬谢轶贾文祥杨远曾蔚杨维清刘莉周绍兵李孝红四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室西南交通大学材料学院先进技术教育部重点实验室成都610031

目的制备防龋基因疫苗的DNA/PELA微球,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法采用改进的溶剂挥发法双乳液(W1/O/W2)体系制备基因疫苗的DNA/PELA微球;测定了微球的形态大小、包封率及细胞毒性,将基因疫苗微球转染哺乳动物细胞,用流式细... 详细信息

目的制备防龋基因疫苗的DNA/PELA微球,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法采用改进的溶剂挥发法双乳液(W1/O/W2)体系制备基因疫苗的DNA/PELA微球;测定了微球的形态大小、包封率及细胞毒性,将基因疫苗微球转染哺乳动物细胞,用流式细胞仪和RT-PCR测定在其中表达的情况。结果制备的DNA/PELA复合物多呈球状,平均粒径1.806μm,对细胞无毒性,可在体外转染哺乳动物细胞,并能正确地转录表达;结果证实基因疫苗微球转染效率低,提示微球中的DNA具有缓慢释放的特征。结论PELA可作为防龋基因疫苗的投递系统,是一种安全、有效的释放体系。

关键词：防龋基因疫苗 PELA微球转染

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人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2005年第3期40卷 411-413页

作者：张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院食管癌研究室郑州450052 郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PC... 详细信息

中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。

关键词：人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒

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正、反义β1,4半乳糖基转移酶-V表达质粒的构建

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中国交通医学杂志 2005年第1期19卷 5-7页

作者：严美娟程纯邵晓轶李爱红张冬梅南通大学基础医学院微生物学与免疫学教研室江苏226001

目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其... 详细信息

目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。

关键词： β1,4半乳糖基转移酶-V 逆转录-聚合酶链反应正、反义表达质粒

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