检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 447-449页

作者：罗夙医吴利先大理学院基础医学院微生物学及免疫学教研室大理671000

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1]。虽然HP确切的致病机制尚未完全阐明,但HP必须首先定植于胃粘膜,然后再进一... 详细信息

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1]。虽然HP确切的致病机制尚未完全阐明,但HP必须首先定植于胃粘膜,然后再进一步侵入宿主防御系统,由其毒素的直接作用和诱导的炎症反应等间接作用损伤组织而致病。流行病学调查研究显示，我国幽门螺旋杆菌感染率约为40％～60％，儿童也有相当高的感染率。

关键词：幽门螺杆菌活载体疫苗慢性活动性胃炎宿主防御系统流行病学调查幽门螺旋杆菌致病机制消化性溃疡

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活化NK细胞抗结核分枝杆菌感染的实验研究

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中国病原生物学杂志 2020年第2期15卷 174-176,182页

作者：刘丽婷翟凯新王国富吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的探讨活化的NK细胞的抗结核分枝杆菌作用,为建立一种新型安全的以NK细胞源性外泌体(exosome)为基础的抗结核免疫疗法提供基础。方法将从外周血分离纯化的NK细胞活化后直接作用于结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞,通过观察细胞形态变... 详细信息

目的探讨活化的NK细胞的抗结核分枝杆菌作用,为建立一种新型安全的以NK细胞源性外泌体(exosome)为基础的抗结核免疫疗法提供基础。方法将从外周血分离纯化的NK细胞活化后直接作用于结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞,通过观察细胞形态变化,细菌抑菌率,乳酸脱氢酶(LDH)活性等评价NK细胞的抗Mtb作用。结果流式细胞术检测活化NK细胞纯度为95%;Mtb感染后的Ana-1巨噬细胞形态成多形性;Mtb感染的巨噬细胞受活化NK细胞作用6、12、24h的抑菌率分别为(39.1±4.2)%、(73.9±6.4)%和(91.3±5.7)%,其中以作用24h的抑制率最好;LDH释放率与活化NK细胞作用时间成正比。结论 NK细胞在体外有抗Mtb的作用,为研究更为安全的NK源性exosome的抗Mtb作用奠定了基础。

关键词：活化NK细胞免疫治疗结核分枝杆菌

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鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2022年第8期17卷 907-911页

作者：陈瑞枫马枫茜李祥芳丁寿鹏高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的结构和功能。方法利用UniproKB数据库、PredictProtein服务、SWISS-MODEL服务、ProtParam蛋白分析工具、Protcale、TMHMM-2.0服务和SignalP-5.0服务、ProtCompB方法和IEDB数据库等生物信息学预测软件对MAV_2043编码蛋白的二级和三级结构、理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及免疫表位进行分析预测;运用UniprotKB数据库的Blast工具对氨基酸序列进行比对,采用MEGA11软件构建进化树,进行系统进化分析。结果MAV_2043基因全长618 bp,共编码205个氨基酸。MAV_2043基因编码蛋白与鸟分枝杆菌亚种起源相同,该蛋白与结核分枝杆菌的[Cu-Zn]超氧化物歧化酶同源性较高。该蛋白为稳定的亲水性蛋白,无跨膜区、有信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞膜上,二级结构以β折叠为主;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,有两个Cu~+配体的结合空间位置。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白可能为[Cu-Zn]超氧化物歧化酶,是鸟分枝杆菌中的重要毒力因子,可为鸟分枝杆菌靶向治疗提供新思路。

关键词：鸟分枝杆菌 MAV_2043 [Cu-Zn]超氧化物歧化酶生物信息学

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幽门螺杆菌重组Bb-hpaA-vacA疫苗的构建

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中国人兽共患病学报 2012年第2期28卷 131-134页

作者：王国富高峰吴利先云南省大理学院基础医学院微生物学教研室大理671000

目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔法将该质粒导入Bb,构建幽门螺杆菌重组hpaA-vacA疫苗,然后用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果 PCR成功扩增出分子量约为1 500bp的hpaA-vacA融合基因,双酶切证实hpaA-vacA融合基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,而且重组蛋白能在双岐杆菌中得到正确表达,Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建螺杆菌rBb-hpaA-vacA疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌双歧杆菌重组hpaA-vacA疫苗构建

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ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第8期26卷 764-766,770页

作者：王保宁杨远邝玉曹康李明远李婉宜四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 成都医学院病原生物学教研室四川成都610083

目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确... 详细信息

目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。

关键词：尿素膜通道蛋白(ureI) 霍乱毒素B亚单位与尿素膜通道蛋白融合(CtB-ureI) 真核表达

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RNAi沉默polβ基因部分逆转食管鳞癌细胞顺铂耐药性

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第二军医大学学报 2014年第3期35卷 279-284页

作者：唐悦王黎柳璐璐李敏郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院寄生虫学教研室郑州450052

目的通过RNA干扰(RNAi)技术沉默DNA聚合酶polβ的表达,观察其对食管癌细胞顺铂(cDDP)耐药性的影响。方法构建靶向polβ基因的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2及阴性对照载体pRNAT-U6.2/Lenti-polβC,将其感染人食管鳞癌顺铂耐药细胞系EC9706/cDDP,通过RT-PCR、蛋白质印迹分析和免疫荧光实验观察细胞polβ的表达情况,采用MTT法观察不同浓度顺铂对细胞生长的抑制作用并计算50%细胞生长抑制所需的药物浓度(IC50)和耐药指数(RI)。结果靶向polβ的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1和pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2感染EC9706/cDDP后均可下调polβ的mRNA和蛋白表达水平,其中前者效果更为显著。顺铂以剂量依赖方式抑制EC9706/cDDP细胞增殖,感染pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβC的EC9706/cDDP细胞及未感染EC9706/cDDP细胞对顺铂的IC50分别为55.71、62.41、63.11μg/mL,耐药指数分别为13.9、15.5、15.7,其中前者与后二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 polβ的表达与食管鳞癌细胞系EC9706/cDDP顺铂耐药性有关,沉默其表达可部分逆转EC9706/cDDP细胞对顺铂的耐药性。

关键词：食管肿瘤肿瘤抗药性顺铂 polβ RNA干扰

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HPV16 E5蛋白原核表达、鉴定及真核表达稳定株的筛选

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南方医科大学学报 2006年第1期26卷 31-35页

作者：施桥发魏晓丽李虹王保宁张卫东蒋忠华曹康李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 成都医学院病原生物学教研室四川成都610083

目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶... 详细信息

目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG 对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westem blotting检测目标蛋白表达情况。将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切 pET32(+)／E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3．1(+)空质粒,构建pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒并对NIH3T3 细胞进行转染,最后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16 E5基因表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32／E5,在1 mmol／L IPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10％左右。真核表达质粒pcDNA3．1(+)／E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21 d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列。结论成功构建了pET32／E5原核和 pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础。

关键词： HPV16 原核表达 SDS-PAGE 免疫印迹 RT-PCR

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肺炎衣原体在HEp-2细胞中增殖的观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第12期28卷 1121-1125页

作者：洪莉杨坤张利军陈宁李梅张丽莙天津医科大学基础医学院病理生理学教研室 300070 微生物学教研室

目的研究肺炎衣原体AR-39株在体外培养中的增殖规律，进一步了解其超微结构的变化，并探讨AR-39株在体外连续培养的方法。方法AR-39株感染人喉癌细胞（human epider-moid carcinoma-2，HEp-2），光镜下观察细胞病变；PCR技术鉴定其核酸... 详细信息

目的研究肺炎衣原体AR-39株在体外培养中的增殖规律，进一步了解其超微结构的变化，并探讨AR-39株在体外连续培养的方法。方法AR-39株感染人喉癌细胞（human epider-moid carcinoma-2，HEp-2），光镜下观察细胞病变；PCR技术鉴定其核酸；荧光显微镜和电镜下观察感染24h、48h和72h后AR-39株在HEp-2细胞内的形态变化。结果光镜下可见HEp-2细胞内形成包涵体；PCR扩增出肺炎衣原体437bp的特异性片段；荧光显微镜和电镜显示AR-39株在HEp-2细胞内包涵体从幼稚型到成熟型的衍变过程，并观察到梨形原体及微型小体等AR-39株特征性的超微结构。结论AR-39株在HEp-2细胞内经72h完成一个发育周期，此时可获得高感染性的肺炎衣原体用于连续传代。

关键词：肺炎衣原体发育周期超微结构增殖

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鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第2期16卷 150-154页

作者：高婧华陈晓文陈越吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的应用生物信息学分析软件预测鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的结构和功能。方法利用在线uniprot蛋白数据库、ProtParam蛋白分析网站、在线Protcale、TMHMM(TMHMM Server V 2.0)和SignalP 5.0、Softberry和PSORTⅡ Server,以及SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学预测软件对MAV-2052蛋白的理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及二级结构进行分析预测并对其三级结构进行模型构建;登录网站http://***/services/netrhos/对蛋白磷酸化位点进行预测,运用uniprot蛋白数据库的Blast工具对氨基酸进行比对,采用MEGA-X软件构建进化树。结果MAV-2052基因全长933 bp,编码310个氨基酸的蛋白质。该蛋白与鸟分枝杆菌亚型起源于同一物种,与结核分枝杆菌的半胱氨酸合酶k1同源性较高。MAV-2052为稳定的疏水性蛋白,无跨膜区、无信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞质中,蛋白序列中存在13个丝氨酸磷酸化位点,二级结构以α-螺旋为主且有两个结构域;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,但无其他配体结合空间位置。MAV-2052蛋白为半胱氨酸合酶,属于半胱氨酸合酶/半胱氨酸β合成酶家族,是调控鸟分枝杆菌生长中的重要蛋白之一。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV-2052为半胱氨酸合成酶,是调控细菌生长的重要蛋白,可为鸟分枝杆菌的靶向治疗提供新思路。

关键词：鸟分枝杆菌结构功能生物信息学分析

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细胞因子在非结核分枝杆菌(NTM)病中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2021年第3期16卷 368-370页

作者：高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

非结核分枝杆菌(Non-tuberculous Mycobacteria)进入机体后,机体免疫功能的一系列变化导致不同细胞因子的改变,从而在NTM病的发病机制中发挥重要作用。本文就不同细胞因子在NTM病中的作用做一综述,为细胞因子变化在非结核分枝杆菌感染... 详细信息

非结核分枝杆菌(Non-tuberculous Mycobacteria)进入机体后,机体免疫功能的一系列变化导致不同细胞因子的改变,从而在NTM病的发病机制中发挥重要作用。本文就不同细胞因子在NTM病中的作用做一综述,为细胞因子变化在非结核分枝杆菌感染中的预测、诊断、疗效观察、预后评估等提供依据。

关键词：细胞因子非结核分枝杆菌发病机制综述

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