目的构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子Ⅱ(enhancerⅡ,EnhⅡ)、核心启动子区(basal core promoter,BCP)和C区基因的真核表达载体,以研究EnhⅡ、BCP和C区基因的生物功能。方法提取HBV DNA,PCR法扩增EnhⅡ-BCP-C区基因片段...
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目的构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子Ⅱ(enhancerⅡ,EnhⅡ)、核心启动子区(basal core promoter,BCP)和C区基因的真核表达载体,以研究EnhⅡ、BCP和C区基因的生物功能。方法提取HBV DNA,PCR法扩增EnhⅡ-BCP-C区基因片段;HindⅢ和XbaⅠ双酶切PCR产物,胶回收纯化的DNA片段,连接入载体pBudCE4.1,酶切及DNA测序鉴定重组载体。采用脂质体介导的方法将重组载体DNA转染HepG2细胞和HeLa细胞,酶联免疫吸附试验检测重组载体转染的HepG2细胞、HeLa细胞上清液及细胞裂解物中乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)的表达水平。结果双酶切及DNA测序鉴定,含840 bp HBV EnhⅡ-BCP-C区基因片段的重组载体构建成功。EnhⅡ+BCP+C/pBudCE4.1重组载体转染HepG2细胞24、48 h后的上清液和转染48 h后裂解物中HBeAg表达水平均明显高于pBudCE4.1空载体转染HepG2细胞(均P<0.05),EnhⅡ+BCP+C/pBudCE4.1重组载体转染HeLa细胞24、48 h后的上清液和转染48 h后的裂解物中HBeAg表达水平与pBudCE4.1空载体转染HeLa细胞比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论成功构建HBV EnhⅡ-BCP启动-C基因肝细胞特异表达的真核载体,有利于进一步研究EnhⅡ、BCP和C区基因某些突变位点的生物学意义。
目的从新疆极端盐碱环境巴里坤湖土壤中分离培养获得细菌资源并鉴定,为今后微生物资源开发和利用提供菌种储备。方法采集新疆巴里坤湖面沉积物(北纬43.35°、东经92.47°),利用稀释法分离、培养菌株,通过测定16S rDNA基因序列,结合系统进化树鉴定分离纯化的细菌。结果本研究共分离和培养出细菌25株,经16S r DNA基因序列测定与基因bank中比对和建立进化树,发现这些菌株分属于厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)的5个属:芽孢杆菌属(Bacillus,占68.00%)、微小杆菌属(Exiguobacterium,占8.00%)、动球菌属(Planococcus,占16.00%)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus,占4.00%)、盐单胞菌属(Halomonas,占4.00%),其中芽孢杆菌属Bacillus占绝对优势(68.00%)。结论本研究分离获得耐高盐高碱细菌25株,为今后开发和利用极端环境微生物资源提供理论和实践依据。
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