检索结果-内蒙古大学图书馆

幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的克隆及在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达

中国现代医学杂志 2011年第35期21卷 4388-4391,4395页

作者：王国富高峰薛士鹏吴利先大理学院基础医学院微生物学教研室云南大理671000

目的构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(***)和双歧杆菌(***)中的表达情况。方法通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(***)和双歧杆菌(***)中的表达情况。方法通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔转化入大肠杆菌BL21和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-vacA-hpaA,vacA-hpaA融合基因的分子量约为1 548 bp;经SDS-PAGE分析,在大肠杆菌中表达出85 kD的融合蛋白,表达的蛋白约占细菌总蛋白的20.5%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,但表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约8.5%。Western blotting结果确认了该条带为hpaA-vacA融合基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-hpaA-vacA能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。

关键词：幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA 双歧杆菌大肠杆菌表达

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肝硬化患者肠道微生态的初步研究

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中华肝脏病杂志 2012年第11期20卷 817-821页

作者：吴旭吴晓卢群代玉平吴中明遵义市第一人民医院消化科遵义医学院基础医学院微生物学教研室 563000

目的了解肝硬化患者粪便中的类杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌、直肠真杆菌一球形梭菌、梭状芽胞杆菌隋况，比较肝硬化患者与健康对照组之间肠道微生态的差异。方法收集2010年3月至12月遵义市第一人民医院消化科收治的肝硬化患者29... 详细信息

目的了解肝硬化患者粪便中的类杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌、直肠真杆菌一球形梭菌、梭状芽胞杆菌隋况，比较肝硬化患者与健康对照组之间肠道微生态的差异。方法收集2010年3月至12月遵义市第一人民医院消化科收治的肝硬化患者29例，并以13名健康在校大学生作对照，收集粪便标本测量其pH值、细菌比浊度并在玻片上行荧光原位杂交，用激光共聚焦扫描显微镜对细菌进行计数观察。比较肝硬化患者及健康对照者的粪便19H值、细菌比浊度及不同细菌计数差异，比较不同病因（肝炎陛、酒精性和非酒精陛）及肝硬化程度（Child@ugh分级）患者间的细菌计数差异。独立样本t检验或非参数检验Kmskal-Wallis法进行统计学分析。结果肝硬化组患者粪便pH值高于健康对照组（6．79±0．64比6．18±0．74，t=2．607，P〈0．05），细菌比浊度与健康对照间的差异无统计学意义（1．15±0．59比1．39±1．01，f=0．960，P〉0．05）。肝硬化患者粪便中双歧杆菌、类杆菌、真杆菌一直肠梭菌、肠球菌、大肠杆菌、梭状芽胞杆菌均较健康对照组明显减少（每个视野中细菌个数的中位数分别为32．14个比289．67个、17．09个比128．38个、21．91个比91．48个、25．78个比175．92个、13．11个比80．18个和34．68个比173．84个，z值分别为-4．006、-4．34、-4．399、-4．174、-3．558和-3．95，P值均〈0．01）。细菌数量的这种改变在肝硬化不同病因及严重程度患者间无明显差异（P值均〉0．05）。结论肝硬化患者肠道中类杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌、直肠真杆菌一球形梭菌、梭状芽胞杆菌数量减少，并致肠腔pH升高；但肠道微生态的变化在肝硬化不同病因及严重程度患者间无明显差异。

关键词：肝硬化肠杆菌科原位杂交荧光显微镜检查共焦肠道微生态

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诺如病毒的研究进展

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中国人兽共患病学报 2014年第12期30卷 1245-1251页

作者：吴琼何玉林广西师范大学生命科学院干细胞与医药生物技术实验室桂林541004 桂林医学院基础医学院微生物学教研室桂林541004

诺如病毒(Norovirus)可感染人和动物引起急性病毒性胃肠炎。随着分子生物学、病毒细胞培养和动物模型研究方面的发展,不同类群诺如病毒全基因组测序完成、病毒体外增殖和衣壳蛋白分别获得真核、原核和植物系统体外表达,从而对该病毒的... 详细信息

诺如病毒(Norovirus)可感染人和动物引起急性病毒性胃肠炎。随着分子生物学、病毒细胞培养和动物模型研究方面的发展,不同类群诺如病毒全基因组测序完成、病毒体外增殖和衣壳蛋白分别获得真核、原核和植物系统体外表达,从而对该病毒的特性有了一些新的认识和观点。本文从诺如病毒的基因组结构与功能、细胞培养、组织嗜性、流行病学、病毒的感染机制、检测方法和疫苗发展7个方面入手,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及其中存在的问题;其中,对该病毒的细胞培养、组织嗜性及其疫苗的研究已成为热点。本文还对诺如病毒分子进化、检测技术和病毒的传播扩散等提出了不同的观点。

关键词：诺如病毒细胞培养组织嗜性流行病学感染机制检测方法疫苗

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普乐可复防治大鼠抗肾小球基底膜肾炎的实验研究

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中国病理生理杂志 2003年第12期19卷 1631-1634,I001页

作者：汤仁仙王迎伟黄瑞高丰光刘晓梅徐州医学院微生物学与免疫学教研室江苏徐州221002 南京医科大学微生物学与免疫学教研室江苏南京210007 苏州大学基础医学院微生物学教研室江苏苏州215007

目的 :观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5m... 详细信息

目的 :观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5mg·kg-1·d-1) ,至第 2 1d。对照组则给予等量的生理盐水。定期于第 4d、第 14d和第2 1d ,检测大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平 ,观察肾组织病理学改变 ,以及检测T淋巴细胞转化功能。结果 :肾炎对照组大鼠注射抗血清后于第 4d即出现异常蛋白尿 ,血清肌酐和尿素氮亦持续上升 ;肾小球内可见细胞数增加和新月体形成 ,肾小管内大量蛋白管型 ,GBM呈不规则增厚 ,足突大片融合 ;T淋巴细胞转化功能异常。而肾炎 +FK5 0 6组大鼠上述病变均明显较轻。结论 :FK5 0 6能够明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。

关键词：普乐可复抗肾小球基底膜肾炎大鼠

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婴儿双歧杆菌对肠易激综合征小鼠肠道黏膜 CRF 受体表达及肥大细胞活化的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第8期34卷 571-576页

作者：刘思濛郑鹏远李付广陈东晖郑州大学第二附属医院消化内科 450014 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

目的探讨肠易激综合征（ IBS ）小鼠结肠黏膜不同促肾上腺皮质激素释放因子（ CRF）受体表达对肥大细胞的影响，并观察婴儿双歧杆菌的治疗作用。方法30只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组及婴儿双歧杆菌组。以束缚应激法建立IBS小... 详细信息

目的探讨肠易激综合征（ IBS ）小鼠结肠黏膜不同促肾上腺皮质激素释放因子（ CRF）受体表达对肥大细胞的影响，并观察婴儿双歧杆菌的治疗作用。方法30只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组及婴儿双歧杆菌组。以束缚应激法建立IBS小鼠模型。婴儿双歧杆菌组给予婴儿双歧杆菌灌胃，而对照组及模型组给予等体积生理盐水灌胃。观测腹肌收缩反射（ AWR ）后处死小鼠。 ELISA检测外周血中组胺、类胰蛋白酶及肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）的表达变化。免疫组织化学分析结肠黏膜CRF的表达情况。免疫荧光双标分析结肠黏膜CRF-R1及CRF-R2在肥大细胞的表达情况。 RT-PCR检测结肠CRF-R1 mRNA、CRF-R2 mRNA的表达情况。结果与对照组相比，模型组外周血中组胺、类胰蛋白酶及TNF-α表达量增加；结肠黏膜中肥大细胞数目、CRF 表达量、CRF-R1＋肥大细胞及CRF-R2＋肥大细胞数目、CRF-R1 mRNA和CRF-R2 mRNA表达量增加，差异均有统计学意义（ P＜0．05）。婴儿双歧杆菌干预后，该组外周血中组胺、类胰蛋白酶及TNF-α表达量较模型组降低；结肠黏膜中肥大细胞数目、CRF 表达量、CRF-R1＋肥大细胞及CRF-R2＋肥大细胞数目、CRF-R1 mRNA和CRF-R2 mRNA表达量较模型组均降低，差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论IBS小鼠模型中，婴儿双歧杆菌可以同时抑制结肠黏膜肥大细胞上CRF-R1及CRF-R2的表达，从而抑制肥大细胞的激活。

关键词：肠易激综合征益生菌促肾上腺皮质激素释放因子肥大细胞

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云南新现蝙蝠SARS样冠状病毒密码子偏性及其聚类分析

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中国人兽共患病学报 2018年第12期34卷 1079-1086页

作者：田明明魏雪玲杨兴宋秀锋李光华刘奇大理大学基础医学院病原生物学综合实验室医学微生物学与免疫学教研室大理671000

目的探索云南新现蝙蝠SARS样冠状病毒(SARSr-CoV)密码子偏性及其与SARS冠状病毒(SARS-CoV)及其他地区SARSr-CoV密码子偏性的进化关系。方法运用Lasergene、EMBOSS、CodonW等生物信息软件,以SARS-CoV为对照,对云南新现蝙蝠SARSr-CoV各蛋... 详细信息

目的探索云南新现蝙蝠SARS样冠状病毒(SARSr-CoV)密码子偏性及其与SARS冠状病毒(SARS-CoV)及其他地区SARSr-CoV密码子偏性的进化关系。方法运用Lasergene、EMBOSS、CodonW等生物信息软件,以SARS-CoV为对照,对云南新现蝙蝠SARSr-CoV各蛋白的编码序列进行密码子偏性分析,并基于此与不同时期报道的SARSr-CoV及SARS-CoV进行聚类分析。结果 11株云南新现蝙蝠SARSr-CoV各蛋白有效密码子数目均接近61,密码子偏性较弱;各蛋白偏性的密码子有差异,但均以A、U结尾的密码子为主。ENC-Plot、中性绘图分析与PR2规则分析均提示新现蝙蝠SARSrCoV在进化过程中主要受到自然选择因素的影响。基于密码子偏性的聚类分析发现,部分云南蝙蝠SARSr-CoV与SARSCoV关系极为密切。同时,其他云南SARSr-CoV分散聚类于其他地区的SARSr-CoV中。结论新报道的蝙蝠SARSr-CoV的密码子偏性与SARS-CoV相似度较高,在进化过程中主要受到自然选择因素的影响,跨种传播至人的风险较高。

关键词：冠状病毒密码子偏性分析聚类分析

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丹参酮Ⅱ_A诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡

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中国中药杂志 2011年第15期36卷 2129-2133页

作者：戴支凯黄大林石京山余丽梅吴芹徐庆桂林医学院药理学教研室广西桂林541004 贵州省基础药理重点实验室贵州遵义563003 桂林医学院微生物学教研室广西桂林541001 贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003

目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人鼻咽癌CNE作用及其可能作用机制。方法:通过细胞形态学观察、生长曲线绘制、MTT检测以及克隆实验观察TanⅡA对CNE细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察TanⅡA对CNE细胞凋亡的影... 详细信息

目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人鼻咽癌CNE作用及其可能作用机制。方法:通过细胞形态学观察、生长曲线绘制、MTT检测以及克隆实验观察TanⅡA对CNE细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察TanⅡA对CNE细胞凋亡的影响;采用荧光分光光度计检测TanⅡA对CNE细胞细胞内钙及线粒体膜电位的影响;RT-PCR检测TanⅡA对CNE细胞Bad,MT-1A mRNA表达的影响。结果:TanⅡA能抑制CNE细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用CNE细胞24,48,72 h的IC50分别为45.7,24.8,3.3 mg.L-1。TanⅡA作用CNE细胞24 h后,CNE细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,CNE细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,CNE细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达上调。结论:TanⅡA具有抗CNE作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达上调有关。

关键词：丹参酮ⅡA 肿瘤人鼻咽癌CNE细胞凋亡钙依赖性通路 MT-1A

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CD38基因敲除对小鼠脾脏B细胞炎性因子产生的影响

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第二军医大学学报 2016年第11期37卷 1373-1377页

作者：焦会园陈诚李玲戴倩倩宋矿余李蓉南昌大学基础医学院微生物学教研室南昌330006 南昌大学转化医学研究院南昌330031

目的分析CD38基因敲除小鼠脾脏中B细胞的数量及B细胞中炎性因子和去乙酰化酶1(SIRT1)的表达水平,探讨CD38基因敲除对B细胞中炎性因子的影响及其潜在机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测小鼠尾巴CD38和新霉素(Neo)基因的DNA表达水平;磁... 详细信息

目的分析CD38基因敲除小鼠脾脏中B细胞的数量及B细胞中炎性因子和去乙酰化酶1(SIRT1)的表达水平,探讨CD38基因敲除对B细胞中炎性因子的影响及其潜在机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测小鼠尾巴CD38和新霉素(Neo)基因的DNA表达水平;磁珠阴选法分选出野生型(WT)C57BL/6和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞,经流式细胞仪鉴定B细胞分选纯度;实时定量PCR检测CD38和炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测CD38及SIRT1的蛋白表达水平。结果鉴定CD38-/-小鼠,并成功分选出WT和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞(纯度>95%)。与WT小鼠相比,CD38-/-小鼠脾脏发育障碍,脾细胞总数及其中的B细胞数量均减少(P<0.01),伴炎性因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.01),SIRT1蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论 CD38基因敲除可引起脾脏B细胞数量减少;并可能通过激活SIRT1通路,抑制脾脏B细胞中炎性因子TNF-α和IL-1β的表达。

关键词： CD38基因 B淋巴细胞炎性因子去乙酰化酶肿瘤坏死因子α 白介素1β

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miR-207调控结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的机制研究

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中国比较医学杂志 2024年第12期34卷 41-49页

作者：杜文雅代禹美乐林芝马涛吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra... 详细信息

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra并转染miRNA-207 mimics)和mi-NC组(感染H37Ra并转染mimics NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将miRNA-207 mimics和mimics NC转入Ana-1细胞。结核菌落形成单位计数评估miR-207对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-207、细胞凋亡基因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。Western blot检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达量。采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内ROS的荧光强度,以及检测细胞内LDH的含量。结果显微镜下观察成功建立感染模型,qPCR检测发现对照组miR-207表达量低于空白组(P<0.01),表明miR-207在空白组和对照组中差异性表达,mi组miR-207表达量显著高于mi-NC组(P<0.0001),表明成功建立转染模型。菌落形成单位计数发现mi组的菌落数高于mi-NC组和对照组(P<0.001)。流式细胞术检测发现mi组总凋亡高于mi-NC组和对照组(P<0.05)。qPCR及Western blot检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。对照组炎症基因相对表达量高于空白组(P<0.001),mi组高于mi-NC组(P<0.05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.01),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。自噬正调节基因LC3和Beclin1在对照组的相对表达量高于空白组(P<0.0001),mi组低于mi-NC组(P<0.05)。负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。ROS荧光强度检测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.001)。LDH检测发现对照组细胞内LDH含量高于空白组(P<0.01),mi组与mi-NC组含量无统计学意义(P>0.05)。结论miR-207过表达促进细胞凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于H37Ra的存活,为结核病的治疗提供新的方向。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra miR-207 自噬巨噬细胞凋亡焦亡

来源：评论

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杨氏欣痨宁胶囊免疫调节作用的实验研究

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现代免疫学 2009年第2期29卷 153-156页

作者：张才军李莉后文俊王玲昆明医学院基础医学院微生物学与免疫学教研室昆明650031 昆明医学院基础医学院药理学教研室昆明650031

研究复方中药制剂杨氏欣痨宁胶囊(YLN)对小鼠的免疫调节作用,为YLN的临床研究提供实验依据。通过建立环磷酰胺(CY)所致免疫功能低下ICR小鼠模型,研究YLN对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清凝集素和DTH降低或增强模型的影响。研究结果显示... 详细信息

研究复方中药制剂杨氏欣痨宁胶囊(YLN)对小鼠的免疫调节作用,为YLN的临床研究提供实验依据。通过建立环磷酰胺(CY)所致免疫功能低下ICR小鼠模型,研究YLN对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清凝集素和DTH降低或增强模型的影响。研究结果显示YLN高、中剂量组均能明显增强Mφ的吞噬功能,使其达到正常水平(P<0.01);YLN中剂量组可显著提高小鼠血清凝集素水平(P<0.01);YLN高、中剂量组均可使受抑制的DTH反应恢复至正常水平,以YLN中剂量组作用最佳;YLN高、中剂量组又使CY增强的DTH反应降低至正常水平(P<0.05,P<0.01)。研究表明,YLN对免疫功能低下模型小鼠的免疫功能有上调作用,并可使降低或增高的DTH反应恢复至正常水平。

关键词：杨氏欣痨宁免疫调节实验研究 ICR小鼠

来源：评论

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