检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2009年第3期25卷 288-291页

作者：陈亮宝福凯昆明医学院基础医学院微生物学与免疫学教研室昆明650031

因耐药甚至耐多药的结核分枝杆菌(Mycobac-terium tuberculosis,MTB)的感染,使原来可治愈的结核病变成难以治疗的致死性疾病。据WHO估计全球有5000万人感染耐药结核杆菌,其中中国最多,占到11%^[1-2],耐药性结核病的暴发流行已成为世界... 详细信息

因耐药甚至耐多药的结核分枝杆菌(Mycobac-terium tuberculosis,MTB)的感染,使原来可治愈的结核病变成难以治疗的致死性疾病。据WHO估计全球有5000万人感染耐药结核杆菌,其中中国最多,占到11%^[1-2],耐药性结核病的暴发流行已成为世界范围内的严重的公共卫生问题。最新研究发现,[第一段]

关键词：结核分枝杆菌耐药机制耐药基因 tuberculosis 异烟肼耐药结核杆菌公共卫生问题耐药性结核病

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大理地区志贺菌耐药性分布及其对氟喹诺酮类药物的耐药机制

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中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 855-858页

作者：王国富薛士鹏吴利先大理学院基础医学院微生物学教研室云南大理671000

目的了解大理地区志贺菌耐药性分布及其对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法对2010～2011年从大理地区各医院收集的粪便标本进行分离培养和血清型鉴定;K-B琼脂扩散法检测分离的志贺菌对12种常见抗菌药物的耐药性;E-test法检测环丙沙星和... 详细信息

目的了解大理地区志贺菌耐药性分布及其对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法对2010～2011年从大理地区各医院收集的粪便标本进行分离培养和血清型鉴定;K-B琼脂扩散法检测分离的志贺菌对12种常见抗菌药物的耐药性;E-test法检测环丙沙星和萘啶酸对耐药菌株的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC);经PCR和DNA测序检测耐药菌株基因突变;R质粒接合试验检测氟喹诺酮类药物耐药性与R质粒介导的相关性。结果共分离到68株志贺菌,其中福氏志贺菌41株,宋内志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株;志贺菌对萘啶酸耐药率最高,其次为复方磺胺甲噁唑、氨苄西林,对头孢曲松和头孢噻肟较敏感,对喹诺酮类显示出不同程度的耐药率;环丙沙星对志贺菌的MIC在0.008～32μg/ml之间,萘啶酸对志贺菌的MIC均≥1μg/ml,有4株MIC≥256μg/ml;6株对氟喹诺酮类药物耐药的菌株中均存在gyrA基因Ser83→Leu和parC基因Ser80→Ile的突变,其中有2株存在gyrA基因Asp87→Asn的突变,2株存在Asp87→Gly的突变,3株存在parC基因Gln91→His的突变;R质粒介导与氟喹诺酮类药物耐药无关。结论治疗细菌性痢疾首选头孢曲松和头孢噻肟,志贺菌gyrA和parC基因突变与对氟喹诺酮类药物耐药性密切相关,与R质粒介导无关。

关键词：志贺菌氟喹诺酮类药物耐药性

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HPV16 E7“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达特性研究

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四川大学学报（医学版） 2008年第2期39卷 165-168页

作者：王红仁王保宁李婉宜左凤琼李虹蒋忠华施桥发李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重... 详细信息

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。

关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌 “自杀性”DNA疫苗治疗性疫苗细胞凋亡

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肺炎支原体诱导A549细胞胞内TLR2的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第10期26卷 937-938页

作者：柳卫凰刘先洲董碧麟汤纪路饶邦忠武汉大学基础医学院医学微生物学教研室 430071

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是能独立存活的病原微生物,其通过黏附、定植于呼吸道上皮细胞进而引起呼吸道的炎性反应.Mp的感染存在着复杂的免疫学机制,国外近来研究显示,Toll样受体2（TLR2）在启动机体天然免疫系统并介导... 详细信息

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是能独立存活的病原微生物,其通过黏附、定植于呼吸道上皮细胞进而引起呼吸道的炎性反应.Mp的感染存在着复杂的免疫学机制,国外近来研究显示,Toll样受体2（TLR2）在启动机体天然免疫系统并介导支原体感染所致的炎性反应中起了重要作用.

关键词：肺炎支原体 A549细胞 TLR2 呼吸道上皮细胞 Toll样受体支原体感染胞内天然免疫系统

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HPV-16E4原核表达系统的建立和表达特性研究

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四川大学学报（医学版） 2006年第3期37卷 361-364页

作者：王保宁施桥发李虹张卫东庄永华杨靖蒋忠华李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和... 详细信息

目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4)。经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果克隆到完整E4基因为342bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%。在28℃和37℃,0.1mmol/L的IPTG诱导18h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Westernblot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His)。结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础。

关键词： HPV-16 E4基因原核表达

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反义ST6GalⅠ基因对HeLa细胞黏附和侵袭力的影响

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中华肿瘤杂志 2007年第1期29卷 21-24页

作者：苑天红李明远李婉宜李虹蒋忠华四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的研究人α2，6-唾液酸转移酶（ST6GalⅠ）反义寡核苷酸（ASODN）转染对ST6GalⅠ高表达的官颈癌HeLa细胞的黏附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的ASODN及正义寡核苷酸（SODN），用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeL... 详细信息

目的研究人α2，6-唾液酸转移酶（ST6GalⅠ）反义寡核苷酸（ASODN）转染对ST6GalⅠ高表达的官颈癌HeLa细胞的黏附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的ASODN及正义寡核苷酸（SODN），用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞。实验设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和ASODN组。应用RT-PCR测定细胞中ST6GalⅠ mRNA水平，流式细胞术检测细胞表面α2，6-唾液酸含量，分别用CytoMatrix^TM细胞黏附试剂盒和细胞侵袭分析试剂盒，检测细胞对细胞外基质（ECM）的黏附与侵袭力。结果HeLa细胞被转染48h后，与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比，ASODN组细胞中ST6GalⅠ mRNA表达明显下调（P〈0．01）；与3个对照组相比，ASODN组细胞表面以，6-唾液酸的含量明显降低，同时细胞对ECM的黏附和侵袭力均降低（均P〈0．05）。结论靶向ST6GalⅠ的ASODN能下调HeLa细胞ST6GalⅠ基因的表达，降低细胞表面α2，6-唾液酸含量，继而降低细胞对ECM的黏附和侵袭力。

关键词：反义寡核苷酸宫颈肿瘤唾液酸转移酶黏附肿瘤侵袭力

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不可分型流感嗜血杆菌Hap基因的克隆及原核表达

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生物医学工程学杂志 2009年第5期26卷 1072-1076页

作者：李婉宜邝玉姚锋杨远陈长春蒋忠华李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白。以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap... 详细信息

构建不可分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)Hap基因的原核表达载体,并诱导其表达Hap融合蛋白。以NTHi标准株ATCC49247基因组DNA为模板扩增出Hap目的基因片段,双酶切后连接于原核表达载体pET-32a(+),构建Hap重组原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,将经PCR、酶切及DNA测序鉴定正确者转化***21(DE3),诱导表达带有His标签的Hap融合蛋白。SDS-PAGE电泳分析重组蛋白的相对分子量大小及表达形式,Western blot进一步鉴定表达产物的特异性。通过PCR成功扩增出NTHi Hap基因,构建了具有正确基因序列的Hap原核表达质粒pET-32a(+)-Hap,SDS-PAGE电泳分析成功表达出相对分子量(Mr)为176000的重组融合蛋白,该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot结果表明该重组融合蛋白可与抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合。NTHi Hap蛋白在原核表达系统中的成功表达,将为Hap蛋白免疫活性的深入研究及NTHi新型保护性疫苗的开发奠定实验基础。

关键词：不可分型流感嗜血杆菌 Hap蛋白原核表达

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信号肽重组mBD2在宫颈癌细胞中的稳定表达及活性测定

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四川大学学报（医学版） 2007年第2期38卷 222-225页

作者：魏晓丽李明远李虹施桥发李婉宜蒋忠华四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041

目的探讨鼠重组beta防御素2(rmBD2)对SiHa细胞增殖的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达质粒pcDNA3.1(+)/rmBD2转染SiHa细胞系,G418筛选出稳定表达细胞克隆。分别采用间接免疫荧光染色、RT-PCR方法检测稳定转染细胞中rmBD2蛋白和rmBD... 详细信息

目的探讨鼠重组beta防御素2(rmBD2)对SiHa细胞增殖的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达质粒pcDNA3.1(+)/rmBD2转染SiHa细胞系,G418筛选出稳定表达细胞克隆。分别采用间接免疫荧光染色、RT-PCR方法检测稳定转染细胞中rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA表达,并采用MTT法对稳定转染细胞株进行细胞增殖能力的测定。结果采用100μg/mL的G418浓度筛选质粒转染的SiHa细胞20d,得到了rmBD2稳定表达细胞株SiHa/rmBD2及转染pcDNA3.1(+)空质粒的对照细胞SiHa/K。免疫荧光染色显示SiHa/rmBD2细胞质中均有目的蛋白的表达,转染效率为100%。提取稳定转染4、6、8、10周SiHa/rmBD2细胞总RNA,RT-PCR反应扩增得到220bp左右的目的片段,而SiHa/K及SiHa细胞未见目的蛋白表达。细胞生长曲线显示SiHa/rmBD2细胞的生长速度低于SiHa/K及SiHa细胞(P<0.05)。结论本研究成功筛选了稳定表达rmBD2的细胞株SiHa/rmBD2,并采用间接免疫荧光染色、RT-PCR证实了rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA的稳定表达,细胞增殖实验表明rmBD2可以明显抑制肿瘤细胞的增殖,为进一步研究rmBD2的抗肿瘤作用奠定了细胞学基础。

关键词： rmBD2稳定表达免疫荧光 RT-PCR 细胞生长曲线

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昆明山海棠对胶原诱导型关节炎大鼠的作用及可能机制

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现代免疫学 2012年第4期32卷 287-292页

作者：骆耐香陈森洲李莎莎刘菁陈建宏梁爽桂林医学院微生物学与免疫学教研室广西桂林541004

探讨昆明山海棠(THH)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的作用及可能机制。取60只大鼠随机分6组,建立CIA大鼠模型,分别采用不同剂量的THH每天灌胃1次,连续30d。动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化法分别检测HIF-1αm... 详细信息

探讨昆明山海棠(THH)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的作用及可能机制。取60只大鼠随机分6组,建立CIA大鼠模型,分别采用不同剂量的THH每天灌胃1次,连续30d。动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化法分别检测HIF-1αmRNA及其蛋白的表达。结果显示,THH可明显抑制CIA大鼠的足爪肿胀,减轻滑膜增殖及炎症反应,降低HIF-1α表达,其中以中剂量THH的治疗效果最佳。以上结果表明THH治疗CIA大鼠具有明显疗效,其作用机制可能与降低外周血以及滑膜组织内的HIF-1α的表达有关。

关键词：昆明山海棠 Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠机制

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TTV相关病毒的发现

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第1期22卷 116-118页

作者：李俊茜庄辉北京大学基础医学院微生物学教研室 100083

近年来发现一些TTV相关病毒,如TTV样微小病毒(TLMV)、PM病毒(PMV)、SANBAN病毒(SANBAN)、YONBAN病毒(YONBAN)和SEN病毒(SENV)等,并对其致病性进行了一些研究.

关键词： TTV相关病毒 TLMV PM病毒 SEN病毒基因组

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