检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2019年第4期50卷 423-430页

作者：毕文杰郑翔成都医学院人体解剖学与组织学胚胎学教研室成都610500 四川大学华西基础医学与法医学院基础医学专业实验室成都610041

目的探讨孤束核联合亚核前部(ac NTS)损伤在慢性束缚应激(CRS)所致的胰岛素抵抗性高血糖症发生中的作用。方法采用CRS大鼠模型(n=20;7 d束缚+3 d自由活动,共40 d),检测葡萄糖代谢相关指标。结果 CRS导致约1/3的个体(n=7)持续性的中度胰... 详细信息

目的探讨孤束核联合亚核前部(ac NTS)损伤在慢性束缚应激(CRS)所致的胰岛素抵抗性高血糖症发生中的作用。方法采用CRS大鼠模型(n=20;7 d束缚+3 d自由活动,共40 d),检测葡萄糖代谢相关指标。结果 CRS导致约1/3的个体(n=7)持续性的中度胰岛素抵抗性高血糖(空腹血糖不超过11 mmol/L)。CRS高血糖鼠ac NTS可观察到神经元染色浓缩,Caspase-3表达和TUNEL阳性染色,提示出现神经元凋亡样改变。机械损伤ac NTS(n=6),空腹血糖水平逐渐升高,也能导致胰岛素抵抗性高血糖,且高胰岛素血症、胰岛平均体积增大和血清皮质酮水平不变等特点与CRS小鼠一致。结论 CRS损伤了ac NTS的葡萄糖敏感神经元,从而使血糖调节紊乱。

关键词：慢性束缚应激,胰岛素抵抗性高血糖,神经元损伤,孤束核,酶联免疫吸附测定大鼠

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何首乌饮减轻β-淀粉样蛋白诱导的海马神经元损伤的作用机制

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解剖学报 2015年第2期46卷 175-181页

作者：陈靖博王玉娟郭胜男牛嗣云段斐河北大学基础医学院药理学专业河北保定071000 河北大学基础医学院组织学胚胎学教研室河北保定071000

目的探讨何首乌饮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法采用新生24h内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组... 详细信息

目的探讨何首乌饮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法采用新生24h内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组及空白对照组。Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测各组海马神经元硫氧还蛋白1(Trx1)蛋白和mRNA的表达情况。结果模型组细胞凋亡率增高(P<0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显减少(P<0.05);与模型组相比,何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低(P<0.05),Trx1蛋白和mRNA的表达量明显增加(P<0.05)。结论何首乌饮可明显减轻Aβ诱导的海马神经元的损伤,其机制可能与增加抗氧化蛋白Trx1的表达有关。

关键词：海马神经元阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白何首乌饮硫氧还蛋白免疫组织化学大鼠

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树突状细胞电转染的优化条件及影响因素

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解剖学报 2007年第2期38卷 209-212页

作者：唐岩唐军民战军刘影常昕莹王国涛单铁英苏安英北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083 河北工程大学临床医学院邯郸056029

目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC... 详细信息

目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC)。将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC(imDC)。应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件。荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率。结果当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%。结论电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术。影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间。

关键词：电转染人肝癌细胞RNA 树突状细胞电转染率人

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mIL-12重组逆转录病毒载体的构建及包装细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2006年第2期32卷 254-256页

作者：李菁华陈东刘颖吉林大学基础医学院病原生物学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021

目的:构建mIL-12重组逆转录病毒载体。方法:将mIL-12 DNA克隆到载体pLEGFP,用该重组质粒转染PA317包装细胞获得重组逆转录病毒。结果:重组质粒pLEGFP-mIL12酶切及PCR产物在2 290 bp区域见强荧光条带与mIL-12基因大小相符;转染PA317细胞... 详细信息

目的:构建mIL-12重组逆转录病毒载体。方法:将mIL-12 DNA克隆到载体pLEGFP,用该重组质粒转染PA317包装细胞获得重组逆转录病毒。结果:重组质粒pLEGFP-mIL12酶切及PCR产物在2 290 bp区域见强荧光条带与mIL-12基因大小相符;转染PA317细胞后的上清感染NIH3T3细胞后,经共聚焦显微镜能观察到融合蛋白的表达。结论:包装细胞上清中有含mIL-12 DNA的重组逆转录病毒,mIL-12重组逆转录病毒可感染NIH3T3细胞并在细胞中进行有效的复制。

关键词： mIL-12基因逆转录病毒载体包装细胞

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神经生长因子诱导神经干细胞向胆碱能神经元的分化

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神经解剖学杂志 2005年第6期21卷 603-606页

作者：刘佳梅陈东孟晓婷吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室湛江524023

为了探讨神经生长因子(NGF)是否具有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能神经元分化的能力,利用无血清培养技术从胎鼠脑内获得神经干细胞,传代纯化后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后神经干细胞向胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞分... 详细信息

为了探讨神经生长因子(NGF)是否具有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能神经元分化的能力,利用无血清培养技术从胎鼠脑内获得神经干细胞,传代纯化后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后神经干细胞向胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况。结果发现:50、100、200ng/ml NGF组ChAT阳性细胞数明显比对照组增加,且以100ng/ml组最为明显;各NGF组,分化的细胞状态较好,且突起明显比对照组增粗增长,以200ng/ml组最为明显。此结果证明NGF具有诱导NSCs向胆碱能神经元分化的趋势,且能促进分化细胞突起的生长。

关键词：神经干细胞神经生长因子胆碱能神经元

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HOX基因在肿瘤发生发展过程中的作用

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解剖学报 2014年第3期45卷 430-436页

作者：牛苗苗战军张宏权北京大学医学部基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100191

HOX基因是同源异形盒基因家族的一个亚家族,在进化上高度保守。HOX基因编码的蛋白是一类重要的转录因子,在胚胎发育中调节多个过程,包括细胞的生长、分化、凋亡、运动和血管生成等。近年来的研究发现,HOX基因的异常表达与恶性肿瘤密切... 详细信息

HOX基因是同源异形盒基因家族的一个亚家族,在进化上高度保守。HOX基因编码的蛋白是一类重要的转录因子,在胚胎发育中调节多个过程,包括细胞的生长、分化、凋亡、运动和血管生成等。近年来的研究发现,HOX基因的异常表达与恶性肿瘤密切相关。我们就有关HOX基因在肿瘤发生发展中的研究进展进行以下综述。

关键词： HOX基因转录因子肿瘤生物调控免疫组织化学

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铝对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白mRNA表达的影响

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武汉大学学报（医学版） 2015年第4期36卷 517-519页

作者：王程强陈筠欧超燕施文祥李胜联桂林医学院公共卫生学院广西桂林541001 桂林医学院组织学与胚胎学教研室广西桂林541001

目的:研究氯化铝对体外培养大鼠睾丸支持细胞的雄激素结合蛋白(ABP)mRNA表达的影响。方法:体外培养大鼠睾丸支持细胞为模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(0,300,400,500μmol/L)氯化铝染毒睾丸支持细胞,培养24h后采取MTT... 详细信息

目的:研究氯化铝对体外培养大鼠睾丸支持细胞的雄激素结合蛋白(ABP)mRNA表达的影响。方法:体外培养大鼠睾丸支持细胞为模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(0,300,400,500μmol/L)氯化铝染毒睾丸支持细胞,培养24h后采取MTT法检测细胞活性,RT-PCR法检测ABP mRNA的表达水平。结果:随着氯化铝染毒剂量的增大,ABP mRNA的表达下降。高剂量染毒组与对照组相比较,ABP mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:氯化铝对体外培养的睾丸支持细胞具有毒性作用,抑制ABP mRNA的表达,从而损伤支持细胞功能,导致生殖功能障碍。

关键词：三氯化铝睾丸支持细胞雄激素结合蛋白

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低剂量甲基汞促进鼠胚肠上皮细胞凋亡及相关机制的体内实验

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第三军医大学学报 2007年第5期29卷 410-412页

作者：林雪梅张海英姜蓉汪维伟重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的探讨低剂量氯化甲基汞(methyl-mercury chloride,MMC)对小鼠胚胎肠上皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法给E12.5d、E13.5d孕鼠一次性腹腔注射MMC液(0、1、2、4mg/kg),48h后取十二指肠、结肠。所获标本均制成石蜡切片,部分经HE染色,... 详细信息

目的探讨低剂量氯化甲基汞(methyl-mercury chloride,MMC)对小鼠胚胎肠上皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法给E12.5d、E13.5d孕鼠一次性腹腔注射MMC液(0、1、2、4mg/kg),48h后取十二指肠、结肠。所获标本均制成石蜡切片,部分经HE染色,体视学法计数肠上皮凋亡小体;其余切片用于免疫组化染色,半定量分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及即刻早期基因c-fos的表达。结果①各实验组凋亡小体数均高于对照组(P<0.05),与MMC剂量呈正相关(P<0.01)。②Bcl-2在各组上皮中的表达均低于对照组(P<0.05),与MMC的剂量呈负相关(P<0.01);而Bax及c-fos的表达均强于对照组(P<0.05),与MMC的剂量呈正相关(P<0.01)。结论低剂量MMC在体内可促进胎鼠肠上皮细胞凋亡,可能是一种通过下调Bcl-2表达,上调Bax及c-fos表达的机制。

关键词：氯化甲基汞胎鼠肠上皮凋亡

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RegⅠ在胃泌素促胃癌细胞体外增殖通路中的作用

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解剖学报 2012年第1期43卷 63-67页

作者：程珊丁一张钦宪郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室河南省分子医学重点学科开放实验室郑州450052 新乡医学院基础医学院组织学胚胎学教研室河南新乡453003

目的探讨再生蛋白I(RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用。方法根据RegⅠcDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利... 详细信息

目的探讨再生蛋白I(RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用。方法根据RegⅠcDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利用脂质体2000转染试剂分别转染胃癌细胞BGC823细胞株、SGC7901细胞株,同时设转染空质粒的实验对照组和无质粒转染的空白细胞组。后经G418筛选建立稳定转染细胞株。RT-PCR检测RegⅠ基因mRNA的转录水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应。结果酶切及测序鉴定,插入片段正确,3个RegⅠ-shRNA表达载体构建成功;RT-PCR显示,pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠmRNA在胃癌细胞BGC823、SGC7901的转录。Western boltting结果显示,BGC823和SGC7901细胞的RegⅠ蛋白表达率分别下调到空载体对照组的(45±4)%和(53±4)%;MTT结果显示,RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系的增殖效率均降低(P<0.05)。胃泌素孵育后,胃癌细胞BGC823、SGC7901的增殖效率均增加(P<0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系增殖效率则无明显改变(P>0.05)。结论实验成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系;RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用。

关键词： Reg Ⅰ基因胃泌素胃癌细胞 RNA干扰反转录聚合酶链式反应免疫印迹法

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核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定

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南方医科大学学报 2008年第3期28卷 392-395,398页

作者：张功员赵国强尹磊张钦宪郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河南郑州450052 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450052

目的构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法根据GenBank提供的NS基因AY825265mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144nt,199-217nt和487-505nt3个19bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况。结果PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Westernblot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NSmRNA和蛋白水平的表达。结论成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础。

关键词：核干细胞因子 RNA干扰基因克隆 EC9706

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