检索结果-内蒙古大学图书馆

山西医科大学学报 2010年第9期41卷 775-779页

作者：李辉龚燕华胡光宇阴彬武警医学院组织胚胎学教研室天津300162 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室武警医学院生物化学教研室

目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的... 详细信息

目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。

关键词： RNA干扰 NSPc1 小发夹状RNA 慢病毒载体多梳家族

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利用Cre/loxp技术构建血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠

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实用医学杂志 2010年第24期26卷 4483-4486页

作者：胡国栋陈英华张琳张磊兰雨杨晓孟莹蔡绍曦南方医科大学南方医院呼吸内科广州市510515 南方医科大学基础医学院组织胚胎学教研室广州市510515 军事医学科学院生物工程研究所遗传与发育研究室北京市100853

目的:利用Cre/loxp条件性基因敲除技术构建血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究cdc42在维持微血管屏障中的作用提供研究平台。方法:将引进的cdc42flox/flox小鼠和血管内皮细胞特异性表达Cre重组酶的... 详细信息

目的:利用Cre/loxp条件性基因敲除技术构建血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究cdc42在维持微血管屏障中的作用提供研究平台。方法:将引进的cdc42flox/flox小鼠和血管内皮细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠分别进行繁殖和鉴定,然后两种小鼠进行杂交,并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Cdc42flox/+Cre+的小鼠即为本实验所构建的血管内敲除/-cdc42基因杂合子小鼠。结果:从引进这两种小鼠开始繁殖5个月,共繁殖cdc42flox/flox小鼠40只,取其21只进行鉴定,均为cdc42flox纯合的子小鼠。血管内皮细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠和野生型C57小鼠杂交后繁殖,共得到子代小鼠36只,其中表达Cre重组酶的小鼠17只,基因型为cdc42flox/flox与表达Cre重组酶的杂合子小鼠杂交并繁殖,得到基因型为Cdc42flox/+Cre+的小鼠10只,基因型为Cdc42/-flox/+Cre-13只。这/-两种基因型小鼠其身高、体重无明显差异。结论:本研究利用Cre/loxp技术成功构建了血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠,为进一步构建血管内敲除cdc42基因小鼠奠定基础,为在整体动物水平研究cdc42在维持微血管屏障中的作用提供研究平台。

关键词：小鼠,基因敲除 Cre/loxp技术 cdc42 杂合子

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哈萨克族食管癌中survivin基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体

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新疆医科大学学报 2010年第7期33卷 739-742页

作者：刘玲张丽萍陈艳李卉姜孝芳李秀梅谌宏鸣赵学信李惠武新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院科研中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的构建survivin基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究survivin基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出survivin基因,以阳性组织基因组DN... 详细信息

目的构建survivin基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究survivin基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出survivin基因,以阳性组织基因组DNA扩增出survivin基因启动子区CpG岛,survivin基因经双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1相连,并转入甲基化酶缺陷的大肠杆菌***1793中扩增。经测序正确后,将重组质粒及survivin基因启动子区CpG岛用HindⅢ酶切,连接后再次转入***1793中扩增。将重组质粒转染至食管癌细胞株Eca-109中,荧光显微镜观察结果。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的survivin基因及其启动子区CpG岛,并将双序列成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。转染后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。结论成功构建真核表达载体,为进一步探讨survivin基因启动子区CpG岛甲基化状态对该基因在哈萨克族食管癌细胞株中的表达及功能的影响奠定了基础。

关键词： survivin 启动子区哈萨克族食管癌载体构建

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哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用

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新疆医科大学学报 2010年第2期33卷 113-115页

作者：巩雪俐张丽张建龙张锦前新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室新疆乌鲁木齐830011 北京地坛医院传染病研究所北京100015

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相... 详细信息

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05)。结论LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用。

关键词： HBV表面抗原大蛋白胰腺癌细胞哺乳动物双杂交

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高通量斑马鱼造血缺陷突变体的正向遗传学筛选研究

高通量斑马鱼造血缺陷突变体的正向遗传学筛选研究

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2010·第一届斑马鱼学术研讨会

作者：戴朝霞霍中军颜广刘靖王鹍温宗华陈英华刘伟黄志斌马宁陈小辉罗伟豪赵颖樊淑黄红辉温子龙张文清南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室南方医科大学基础医学院病理学教研室南方医科大学基础医学院组织胚胎学教研室南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室香港科技大学生化系

目的:化学遗传学方法筛选并初步鉴定获得不同造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法:乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder的F1杂交产生F2家族,F2代... 详细信息

目的:化学遗传学方法筛选并初步鉴定获得不同造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法:乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder的F1杂交产生F2家族,F2代同家族内自交所产生的F3代胚胎分别以βe7为探针的整体原位杂交实验(WISH)标记胚胎期珠蛋白基因进行红系造血缺陷突变体筛选、以中性红(neutral red,NR)活体标注巨噬细胞和苏丹黑B(Sudan black B,SB)活体标注中性粒细胞进行髓系造血缺陷突变体筛选,并根据所筛选到的突变体的不同造血过程缺陷表型分原始造血、造血干细胞和定向造血三个不同时间段进行初步分类研究。其中,22hpfβe7检测原始红系、36hpfc-myb检测造血干细胞、3.0dpf时用O-dianisidine对原始造血阶段的血红蛋白进行检测、3.5dpf时的NR和SB分别对原始造血阶段的巨噬细胞和中性粒细胞进行检测、5.0dpf rag7检测定向淋系、5.0dpfβe7验证定向红系、5.0dpf/yc检测定向造血的髓系。结果:在350个F2家系中配种筛选了1424对鱼,共获得23个突变体。经过初步鉴定,其中12个为红系特异性造血缺陷,2个为红系和淋系造血缺陷,2个为头部巨噬细胞(小胶质细胞)缺陷,1个为头部小胶质细胞和VDA区巨噬细胞同时缺陷,5个为中性粒细胞缺陷,1个为红系和髓系造血同时缺陷。

关键词：斑马鱼(zebrafish) 遗传筛选(genetic screening) ENU诱变(ENU mutagenesis) 造血过程(hematopoiesis) 造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCS)

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海拔对不同生活环境藏、汉两族血压、血糖、血尿酸和血脂水平的影响

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临床荟萃 2010年第11期25卷 949-952页

作者：马平宋克勤王向农来焱华李玉琴李宝娟高艳辉李进祥王砚琴齐社宁甘南藏族自治州人民医院心内科甘肃甘南747000 兰州大学基础医学院组织胚胎学教研室甘肃兰州730000

目的探讨海拔对不同生活环境藏、汉族血压、血糖、血尿酸和血脂水平的影响,为不同海拔地区高血压、高血糖、高尿酸血症和高脂血症的预防提供研究资料。方法275例被调查者为世居或长期生活在海拔3 500 m及2 400 m的牧区藏族、城镇藏族、... 详细信息

目的探讨海拔对不同生活环境藏、汉族血压、血糖、血尿酸和血脂水平的影响,为不同海拔地区高血压、高血糖、高尿酸血症和高脂血症的预防提供研究资料。方法275例被调查者为世居或长期生活在海拔3 500 m及2 400 m的牧区藏族、城镇藏族、城镇汉族人群,测定被调查者收缩压、舒张压、血糖、血尿酸、血脂,对检测结果进行比较。结果3 500 m海拔中,城镇汉族收缩压高于城镇藏族收缩压,(121.83±18.22)mmHg vs(111.92±12.97)mmHg(P<0.05),牧区藏族血糖高于城镇藏族血糖,(6.07±2.29)mmol/L vs(4.58±1.13)mmol/L(P<0.01),城镇汉族甘油三酯(TG)高于牧区藏族TG,(1.52±0.94)mmol/L vs(1.07±0.64)mmol/L(P<0.05),牧区藏族低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于城镇汉族LDL-C,(2.58±0.75)mmol/L vs(2.13±0.94)mmol/L(P<0.05),但牧区藏族、城镇藏族、城镇汉族之间舒张压、血尿酸、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)差异无统计学意义(P>0.05)。2 400 m海拔中,牧区藏族舒张压高于城镇藏族舒张压,(86.14±9.84)mmHg vs(80.17±10.98)mmHg(P<0.05),城镇藏族HDL-C高于城镇汉族HDL-C,(1.73±0.45)mmol/L vs(1.49±0.27)mmol/L(P<0.05),但牧区藏族、城镇藏族、城镇汉族之间收缩压、血糖、血尿酸、TG、TC、LDL-C差异无统计学意义(P>0.05)。3 500 m海拔中牧区藏族血糖及LDL-C高于2 400 m海拔中牧区藏族血糖及LDL-C(P<0.05或<0.01),而收缩压、舒张压、TG、HDL-C却低于2 400 m海拔中牧区藏族收缩压、舒张压、TG、HDL-C(P<0.05或<0.01)。3 500 m海拔中城镇藏族舒张压、TG、HDL-C低于2 400 m海拔中城镇藏族舒张压、TG、HDL-C(P<0.05或<0.01)。两个海拔中城镇汉族之间各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论海拔对牧区藏族及城镇藏族血压、血糖、血脂水平存在不同程度影响。

关键词：高血压血糖血脂异常高海拔

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哈萨克族食管癌中cdc42启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体

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新疆医科大学学报 2010年第7期33卷 735-738页

作者：刘玲张景萍李卉姜孝芳陈艳李秀梅谌宏鸣赵学信李惠武新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院科研中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的构建cdc42基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究cdc42基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出cdc42基因,以阳性组织基因组DNA扩增出cd... 详细信息

目的构建cdc42基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究cdc42基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出cdc42基因,以阳性组织基因组DNA扩增出cdc42基因启动子区CpG岛,cdc42基因经双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1相连,并转入甲基化酶缺陷的大肠杆菌***1793中扩增。经测序成功后,将重组质粒及cdc42基因启动子区CpG岛用HindⅢ酶切,连接后再次转入***1793中扩增。将重组质粒转染至食管癌细胞株Eca-109中,荧光显微镜观察结果。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的cdc42基因及其启动子区CpG岛,并将双序列成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。转染后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。结论成功构建真核表达载体,为进一步探讨cdc42基因启动子区CpG岛甲基化状态对该基因在哈萨克族食管癌细胞株中的表达及功能的影响奠定了基础。

关键词： cdc42 哈萨克族食管癌载体构建

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慢性溴氰菊酯摄取对大鼠胃黏膜损伤及P物质的表达的影响(英文)

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现代生物医学进展 2010年第7期10卷 1280-1283页

作者：陈宗慧吴梅马晓梅石微杜卫山东青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 山东青岛大学医学院基础医学实验中心人体显微学实验室 266071 山东青岛大学医学院生物化学教研室 266071 山东青岛大学医学院基础医学实验中心细胞与分子生物学实验室 266071

目的:探索溴氰菊酯慢性中毒对大鼠胃黏膜的病理损伤及损伤后P物质表达的影响。方法:实验组大鼠分别给予不同剂量溴氰菊酯灌胃,对照组仅给予橄榄油。取胃体部组织,制成石蜡切片,HE及免疫组织化学染色,镜下观察胃黏膜损伤及胃黏膜组织P物... 详细信息

目的:探索溴氰菊酯慢性中毒对大鼠胃黏膜的病理损伤及损伤后P物质表达的影响。方法:实验组大鼠分别给予不同剂量溴氰菊酯灌胃,对照组仅给予橄榄油。取胃体部组织,制成石蜡切片,HE及免疫组织化学染色,镜下观察胃黏膜损伤及胃黏膜组织P物质的表达情况,并对损伤程度进行累计积分、壁细胞计数。结果:高剂量组大鼠胃粘膜慢性损害病理积分与各组相比差异均有显著性(P<0.05);壁细胞计数与对照组相比较其差异有P<0.05)。免疫组化发现SP在实验组大鼠胃黏膜组织中呈强阳性表达,在对照组则呈弱阳性表达;平均光密度(OD)值显示高、中剂量组之间及与其余各组之间差异均有显著(P<0.05)。结论:溴氰菊酯对大鼠胃黏膜有较明显的慢性损伤,SP可能参与胃黏膜局部病变。

关键词：溴氰菊酯大鼠胃黏膜慢性损伤 P物质

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脂质体转染survivin反义寡核苷酸对人胰腺癌细胞凋亡的影响

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中国普外基础与临床杂志 2010年第10期17卷 1056-1061页

作者：刘海威程乐吴非厉成杰陈维平刘志明广西医科大学第一附属医院胃肠外科南宁530021 广西医科大学基础医学院组织胚胎学教研室南宁530021

目的探讨survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向ASODN及正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotides,SODN)。ASODN经FAM标记,以阳离子脂质体为载体转染至体外培养的PANC-1细胞中(ASODN组),另设空白对照组(正常培养的细胞)、脂质体空转染组(脂质体转染的为正常的培养基)及SODN组作为对照组。采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测转染率,依次筛选最佳细胞接种数量、ASODN浓度和脂质体的量;荧光显微镜观察转染后的细胞;MTT法测定转染后细胞的抑制率;透射电镜观察转染后细胞的超微结构变化;吖叮橙(AO)与溴化乙啶(EB)染色观察转染后细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳观察转染后细胞凋亡情况;FCM测转染后细胞凋亡率及细胞周期;免疫组织化学技术检测转染后survivin蛋白的表达。结果①ASODN浓度为50、100、150、200、250、400、600及800 nmol/L时,转染率分别为31.9%、37.4%、41.4%、52.6%、24.2%、11.4%、16.1%和15.5%;接种细胞数量为2×104、2×105及2×106个/孔时,转染率分别为12.0%、50.8%和11.2%;转染所用的脂质体量为2、3及4μl时,转染率分别为58.8%、34.0%和23.6%。②转染ASODN后荧光显微镜发现转染后细胞之间空隙加大,形态变圆,贴壁细胞生长较少,部分漂浮于培养液中。③ASODN组24、36及48 h后细胞抑制率明显高于各对照组(P<0.05),随着时间延长,细胞抑制率增高(P<0.05)。④ASODN组电泳图上凋亡细胞呈明显的"梯状"条带。⑤AO与EB染色观察ASODN组细胞出现凋亡的形态学改变,其核染色质均高度聚集或核染色呈新月形聚集于核膜一边,核仁消失。⑥ASODN组细胞凋亡率为(38.10±3.4)%,明显高于SODN组的(4.16±1.7)%(P<0.05)。⑦ASODN组细胞周期阻滞于G2/M期。⑧转染后ASODN组survivin蛋白表达明显低于各对照组(P<0.05)。结论 survivin ASODN转染至胰腺癌细胞最佳转染条件为接种细胞数量为2×105个/孔,ASODN的浓度为200 nmol/L,脂质体的量为2μl;survivin ASODN能明显下调survivin蛋白的表达,抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。

关键词：胰腺癌 survivin 反义寡核苷酸细胞凋亡

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溴氰菊酯致大鼠胃黏膜慢性损伤的观察

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青岛大学医学院学报 2010年第2期46卷 160-162页

作者：陈宗慧吴梅李杰马晓梅石微杜卫青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 青岛大学医学院基础医学实验中心人体显微结构学实验室山东出入境检验检疫局青岛大学医学院生物化学教研室青岛大学医学院基础医学实验中心细胞与分子生物学实验室

目的探讨溴氰菊酯中毒对大鼠胃黏膜的慢性病理损伤及其机制。方法染毒组大鼠分别给予不同剂量溴氰菊酯灌胃;对照组即橄榄油组仅给予相同剂量橄榄油。肉眼观察各组大鼠胃黏膜的大体损伤情况;取胃体部组织,制成切片,苏木精-伊红染色,镜下... 详细信息

目的探讨溴氰菊酯中毒对大鼠胃黏膜的慢性病理损伤及其机制。方法染毒组大鼠分别给予不同剂量溴氰菊酯灌胃;对照组即橄榄油组仅给予相同剂量橄榄油。肉眼观察各组大鼠胃黏膜的大体损伤情况;取胃体部组织,制成切片,苏木精-伊红染色,镜下观察胃黏膜损伤情况,并对损伤程度进行累计积分;观察胃底腺的形态结构,计数壁细胞的数量。结果镜下对照组大鼠胃黏膜结构完整,胃底腺排列紧密规则,壁细胞形态结构较正常,无炎性细胞浸润。染毒组大鼠与对照组大鼠相比较,胃黏膜均呈现不同程度的损伤。高剂量组大鼠胃黏膜慢性病理损伤积分与其余各组比较差异有显著性(F=10.65,q=4.81～7.49,P<0.05);高剂量组大鼠胃黏膜壁细胞数量较对照组明显增多,差异有显著性(F=5.11,q=5.04,P<0.05)。结论溴氰菊酯对大鼠胃黏膜有较明显的慢性病理损伤的作用,尤其对胃底腺壁细胞的影响较为明显,损伤的机制可能与胃黏膜屏障功能的破坏和胃肠神经递质的变化有关。

关键词：溴氰菊酯胃黏膜创伤和损伤大鼠 Wistar

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