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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 536-539页

作者：朱珊丽郑丹欧琴陈俊陈韶张丽芳温州医学院微生物学和免疫学教研室 325000

目的对沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位进行预测和选择，并进行Ct MOMP多表位基因克隆和多表位蛋白的原核表达及其抗原性分析，为研制多表位Ct疫苗提供基础资料。方法利用SYFPEITHI法和多项式方案... 详细信息

目的对沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位进行预测和选择，并进行Ct MOMP多表位基因克隆和多表位蛋白的原核表达及其抗原性分析，为研制多表位Ct疫苗提供基础资料。方法利用SYFPEITHI法和多项式方案结合预测HLA-A2限制性的0MOMP的CTL表位，选取含多个CTL表位的基因片段作为目的基因，兼顾目的基因上下游存在的TH和B细胞表位的基因，共同组成含CTL、TH和B细胞表位的多表位基因。多表位基因经密码子优化后进行全序列合成，克隆入原核表达载体pET-32a（＋），经IPTG诱导在大肠杆菌BL21（DE3）表达并纯化，经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果经预测筛选得到了多个MOMPHLA-A2限制性的CTL表位，成功克隆了含CTL、TH、B表位的MOMP多表位基因，并在大肠杆菌中获得了高效表达。表达产物的相对分子质量（Mr）约24×10^3，与预期肘，相符，并用Western blot方法初步证实多表位蛋白有抗原特异性。结论成功设计了Ct MOMP的T、B细胞多表位基因，并证实在原核表达系统中获得正确表达的多表位蛋白具有良好的抗原性。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白表位表达

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EB病毒核蛋白-1 B细胞表位的预测及其同源性分析

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生物医学工程学杂志 2011年第2期28卷 371-375页

作者：李玲玲朱珊丽李文姝薛向阳张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室温州325000

预测EB病毒核蛋白1(EBNA-1)的B细胞优势表位,并与人体组织抗原序列比对,以分析两者匹配情况。以EBV-1型NA-1的氨基酸序列为基础,采用SOPMA、GOR和HNN方法,结合跨膜区域、亲水性等参数综合预测EBNA-1的B细胞优势表位;进一步采用blastp方... 详细信息

预测EB病毒核蛋白1(EBNA-1)的B细胞优势表位,并与人体组织抗原序列比对,以分析两者匹配情况。以EBV-1型NA-1的氨基酸序列为基础,采用SOPMA、GOR和HNN方法,结合跨膜区域、亲水性等参数综合预测EBNA-1的B细胞优势表位;进一步采用blastp方法,比对分析预测的EBNA-1 B细胞表位与相关的人体组织抗原序列的匹配情况。结果提示:B细胞优势表位可能位于其N端16-23、35-78、332-337、340-357、398-404、419-432、620-637区域;其中部分表位的不同区域分别与小核糖核蛋白SmB、SmD,核蛋白SSA,不均一核糖核蛋白hnRNPA1、hnRNP G具有较高的匹配率。结果表明,用多参数预测可获得EBNA-1的B细胞优势表位,并可进一步分析其与人体组织抗原的相同或相似序列,为自身免疫性疾病的发病机制研究提供理论依据。

关键词： EB病毒核蛋白-1 B细胞表位预测自身免疫性疾病

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葡萄球菌肠毒素B突变体的纯化及其活性

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复旦学报（医学版） 2001年第3期28卷 187-190页

作者：俞红钱利生熊思东复旦大学基础医学院微生物学教研室上海200032 复旦大学基础医学院免疫学教研室上海200032

目的　从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白 ,研究其毒力及抗原性。方法　表达野生型SEB蛋白 (SEB N)和SEB突变体 (SEB M2 3、SEB 1 50 )的 3株重组菌经IPTG诱导 ,反复冻融后 ,制备细菌裂解液。将初步纯化的... 详细信息

目的　从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白 ,研究其毒力及抗原性。方法　表达野生型SEB蛋白 (SEB N)和SEB突变体 (SEB M2 3、SEB 1 50 )的 3株重组菌经IPTG诱导 ,反复冻融后 ,制备细菌裂解液。将初步纯化的抗SEB抗血清与CNBr活化的Sepharose 4B作共价偶联 ,制成亲和层析柱。分柱纯化SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50蛋白。用SDS PAGE和酚试剂改良法对纯化蛋白作纯度鉴定和定量 ;用双向免疫扩散试验和ELISA法作抗原性鉴定 ;用小鼠致死性试验作毒力鉴定。结果　SDS PAGE和双向免疫扩散试验表明 ,3种纯化蛋白均为单一条带 ,且都能与抗SEB抗体形成明显的沉淀线。ELISA表明SEB N、SEB M2 3、SEB M 1 50与抗SEB抗体有相似的结合力 ,提示 2 3位突变和 1 50位突变并未改变SEB的抗原表位。小鼠致死性试验表明 ,LPS激发的 3组小鼠 ( 6只 /组 ) ,分别用上述纯化蛋白攻击 ( 1 0 μg/只 ) ,SEB N组死亡率为 5/6;SEB M1 50组死亡率为 4 /6;SEB M2 3组死亡率为 0 /6;即使SEB M 2 3剂量增至 2 0 0 μg ,小鼠仍无死亡。结论　获得了SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50 3种纯化蛋白 ,其中SEB突变体都保留了抗原性 ;SEB M 2 3与野生型SEB相比 ,毒力明显下降。为进一步研究其作为新型淋巴细胞激?

关键词：葡萄球菌肠毒素B 突变性纯化毒力抗原性

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E血清型沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位的预测

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生物医学工程学杂志 2008年第6期25卷 1397-1400页

作者：朱珊丽石朝辉王鹏飞李文姝张丽芳温州医学院微生物学与免疫学教研室温州325000

基于E血清型沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）氨基酸序列，采用Hopp-Woods的亲水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf抗原指数方案和Janin可及性方案等，辅以对MOMP蛋白的二级结构中的柔性区域及跨膜区域的分析，预测CTMOMP蛋白的B细胞表位。推测最有可能的B细胞表位位于MOMP蛋白N端第73～81区段、217～225区段、第377～386区段、第261～270区段和第161～175区段内或它们的附近。用多参数预测CTMOMP蛋白的B细胞表位，为进一步研究蛋白特性及表位疫苗研制奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白 B细胞表位

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CD70在肿瘤治疗中的研究进展

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肿瘤 2013年第2期33卷 197-201页

作者：吴瑗广东医学院微生物与免疫学教研室广东湛江524023

CD70是肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员之一,具有调控T细胞和B细胞活化、增殖及分化的能力,在维持机体免疫应答过程中起着重要的作用。同时,CD70在多种肿瘤组织中高水平表达,使其可能成为肿瘤免疫... 详细信息

CD70是肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员之一,具有调控T细胞和B细胞活化、增殖及分化的能力,在维持机体免疫应答过程中起着重要的作用。同时,CD70在多种肿瘤组织中高水平表达,使其可能成为肿瘤免疫治疗的一个有效的靶点分子。本文就CD70的生物学作用、在肿瘤组织中的表达情况及其在肿瘤免疫治疗中的作用作一综述,以期为CD70在临床上的应用提供一些有利的参考和研究依据。

关键词：肿瘤标记生物学肿瘤坏死因子类抗原 CD70 肿瘤治疗方案

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不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

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复旦学报（医学版） 2002年第6期29卷 437-439页

作者：张瑞华陈露秋储以微刘瑞梓王缨熊思东复旦大学医学院免疫学系上海200032 东京女子医科大学微生物学与免疫学教研室

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚... 详细信息

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果　Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　SEA单次刺激时Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3+ CD8+ 呈显著低反应性。

关键词： T细胞亚群超抗原SEA 反应性差异

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HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 942-948页

作者：石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物与免疫学教研室 325035

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对照组差异也有统计学意义（F=211.72,P＜0.05）;但IL-4和IL-10水平则各组间差异无统计学意义（F=0.97,P＞0.05;F=2.25,P＞0.05）.结论 pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA质粒可诱导BALB/c小鼠同时产生针对HPV6b L1蛋白和Ct MOMP多表位蛋白特异性的细胞免疫效应;真核密码子优化的HPV6b L1能显著增强Ct MOMP 多表位基因诱导的小鼠特异性细胞免疫效应.

关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白细胞毒T细胞表位

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瘦素作用于人乳腺癌SK-BR-3细胞的可能机制

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中国老年学杂志 2013年第8期33卷 1845-1847页

作者：曾繁余刘菁黄颖骆耐香桂林医学院附属医院普外二科广西桂林541001 桂林医学院微生物与免疫学教研室

目的观察瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对VEGF表达的影响,探讨其可能机制。方法不同浓度瘦素与人乳腺癌SK-BR-3细胞共同培养后,CCK-8法检测其对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测VEGF mRNA及蛋白... 详细信息

目的观察瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对VEGF表达的影响,探讨其可能机制。方法不同浓度瘦素与人乳腺癌SK-BR-3细胞共同培养后,CCK-8法检测其对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测VEGF mRNA及蛋白表达情况。结果在一定范围内,瘦素呈时间、剂量依赖性促进SK-BR-3细胞的生长(P<0.05);细胞受不同浓度瘦素作用后VEGF mRNA及蛋白表达量明显增加并具有剂量依赖性(P<0.05)。结论在体外瘦素对人乳腺癌SK-BR-3细胞有明显增殖作用,通过促进VEGF的表达,在促进血管的生成及肿瘤转移机制中可能发挥一定作用。

关键词：瘦素人乳腺癌细胞株增殖血管内皮生长因子

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表面活性素杀螺活性实验研究

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第4期35卷 394-397页

作者：杨成汤兴丽潘中武皖南医学院微生物学与免疫学教研室安徽芜湖241002

目的观察表面活性素对钉螺的影响,以期为应用芽胞杆菌杀灭钉螺提供实验基础。方法 2022年9月,于芜湖市血吸虫病流行区现场采集钉螺。剔除血吸虫感染阳性钉螺后,采用室内浸杀法,以2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL和0.062 5 mg/mL表面活性... 详细信息

目的观察表面活性素对钉螺的影响,以期为应用芽胞杆菌杀灭钉螺提供实验基础。方法 2022年9月,于芜湖市血吸虫病流行区现场采集钉螺。剔除血吸虫感染阳性钉螺后,采用室内浸杀法,以2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL和0.062 5 mg/mL表面活性素于26℃分别浸泡60只钉螺24、48 h和72 h,同时设超纯水对照组,观察表面活性素杀螺效果,计算钉螺半数致死浓度(LC_(50))。参考上述浸泡杀螺活性实验结果选择表面活性素实验浓度,分别以0.5 mg/mL浓度表面活性素(实验组)和超纯水(对照组)浸泡处理钉螺,采用碘化丙啶(PI)荧光法于荧光显微镜下观察钉螺血淋巴细胞PI摄取情况。结果经0.062 5 mg/mL表面活性素浸杀24 h,钉螺死亡率为5.0%(3/60);2 mg/mL表面活性素浸杀72 h,钉螺死亡率为100.0%(60/60);而对照组未发现钉螺死亡,不同组间钉螺死亡率差异有统计学意义(χ^(2)_(24h)=180.150,χ^(2)_(48h)=176.786,χ^(2)_(72h)=216.487,P均<0.05)。浸杀24、48 h和72 h后,钉螺平均死亡率分别为38.9%(140/360)、62.2%(224/360)和83.3%(300/360),差异有统计学意义(χ^(2)=150.264,P<0.05)。表面活性素浸杀钉螺24、48 h和72 h LC_(50)值分别为0.591、0.191 mg/mL和0.054 mg/mL。荧光显微镜下可见,经0.5 mg/mL表面活性素浸杀24 h后,实验组钉螺摄入PI染料的血淋巴细胞数显著高于对照组(χ^(2)=6.690,P<0.05)。结论表面活性素具有杀灭钉螺活性,可能与其改变钉螺血淋巴细胞膜完整性有关。

关键词：钉螺表面活性素杀螺活性血淋巴细胞

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CRT_H2在特发性血小板减少性紫癜T细胞亚群表达的检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第9期24卷 755-758页

作者：刘仿杨小猛陈群赵丹蔡康荣肖红广东医学院微生物学免疫学教研室湛江524023

目的　研究CRTH2在特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患儿外周血T淋巴细胞亚群的表达及其意义。方法　收集ITP患儿及健康儿童外周抗凝静脉血 ,分离纯化T细胞 ,以PE标记的抗CRTH2单抗和Cy5标记的抗CD4、CD8单抗作双色流式细胞术 ,分析CRTH2在... 详细信息

目的　研究CRTH2在特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患儿外周血T淋巴细胞亚群的表达及其意义。方法　收集ITP患儿及健康儿童外周抗凝静脉血 ,分离纯化T细胞 ,以PE标记的抗CRTH2单抗和Cy5标记的抗CD4、CD8单抗作双色流式细胞术 ,分析CRTH2在ITP患儿CD4 + 、CD8+ T细胞表达的水平。结果　ITP患儿外周血T细胞与健康儿童相比 ,CD4 + 细胞百分率及CD4 + /CD8+ 比例明显下降 (P <0 .0 5 ) ,CD8+ 细胞百分率无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;CD4 + CRTH2 -及CD4 + CRTH2 + 细胞百分率明显下降 (P <0 .0 5 ) ,CD8+ CRTH2 -及CD8+ CRTH2 + 细胞百分率无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,CD4 +CRTH2 -/CD4 + CRTH2 + 及CD8+ CRTH2 -/CD8+ CRTH2 + 比例明显升高 (P <0 .0 5 )。结论　ITP患儿外周血存在T细胞亚群比例失衡 ,呈明显TH1类细胞优势 ,T细胞亚群比例失衡与该病的免疫发病机制有关。

关键词： ITP CD4^+ CD8^+ T细胞亚群特发性血小板减少性紫癜患儿细胞表达分离纯化百分率变化

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