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高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化的机制研究

中华骨科杂志 2024年第15期44卷 1025-1033页

作者：袁术杰唐浩朱世达陈凯梁春涛黎源鑫王洪凯桂林医学院第二附属医院骨科桂林541199 广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室桂林541199

目的探讨高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化的影响及分子机制。方法采用50 ng/ml核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导破骨细胞前体细胞(osteoc... 详细信息

目的探讨高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化的影响及分子机制。方法采用50 ng/ml核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导破骨细胞前体细胞(osteoclast precursor cells,OCPs),建立破骨细胞分化模型。将高浓度IL-17A(100 ng/ml)作用于破骨细胞分化模型,将RAW264.7细胞分为阴性对照组及加入RANKL的阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组;破骨细胞原代细胞(bone marrow derived macrophages,BMMs)分为加入巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony stimulating factor,M-CSF)的阴性对照组及加入M-CSF与RANKL的阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组。通过IL-17A作用OCPs,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察破骨细胞分化的数量;透射电镜观察自噬小体的数量;通过IL-17A作用RAW264.7,Western blot检测p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-PI3K/PI3K、p-ULK1/ULK1、Cleaved-caspase3/caspase3、Beclin1/β-Actin的相对表达量;通过IL-17A作用RAW264.7,流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率;通过IL-17A与PI3K抑制剂LY294002作用OCPs,TRAP染色观察破骨细胞分化的数量。结果TRAP染色示RAW264.7细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组阳性细胞比例分别为1.33%±0.58%、100%±3.01%、51.11%±4.02%,IL-17A组低于阳性对照组,差异有统计学意(t=16.970,P<0.05);BMMs细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组阳性细胞比例分别为1.67%±0.58%、100%±1.01%、50.33%±2.52%,IL-17A组低于阳性对照组,差异有统计学意义(t=31.770,P<0.05)。透射电镜示RAW264.7细胞阳性对照组自噬小体数量为3.67±1.53,高于IL-17A组的0.67±0.58,差异有统计学意义(t=3.182,P<0.001);BMMs细胞阳性对照组自噬小体数量为3.00±1.00,高于IL-17A组的0.33±0.58,差异有统计学意义(t=4.000,P<0.001)。Western blot结果示RAW264.7细胞阳性对照组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-PI3K/PI3K、p-ULK1/ULK1、Cleaved-caspase3/caspase3、Beclin1/β-Actin分别为0.69±0.03、0.69±0.13、1.47±0.13、0.78±0.04、0.66±0.10、0.82±0.03,IL-17A组分别为0.89±0.04、1.14±0.18、1.87±0.04、0.53±0.09、0.93±0.02、0.54±0.03,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测示RAW264.7细胞阳性对照组细胞凋亡率为6.92%±0.62%,低于IL-17A组的12.12%±0.69%,差异有统计学意义(t=9.747,P<0.001)。使用LY294002后的TRAP染色示RAW264.7细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组阳性细胞比例分别为9.00%±2.00%、158.33%±3.51%、100%±2.65%、128.99%±4.01%,IL-17A+LY294002组高于IL-17A组,差异有统计学意义(t=10.470,P<0.001);BMMs细胞阴性对照组、阳性对照组、IL-17A组、IL-17A+LY294002组阳性比例分别为8.01%±0.99%、151.67%±4.51%、100%±3.61%,IL-17A+LY294002组高于IL-17A组,差异有统计学意义(t=6.535,P<0.001)。结论高浓度IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制破骨细胞前体细胞自噬抑制破骨细胞分化。

关键词：破骨细胞自噬白细胞介素17 PI3K/Akt通路

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单细胞RNA测序技术在自身免疫性疾病研究中的应用进展

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现代免疫学 2025年第02期 190-197页

作者：侯显良刘珍玉胡子鹏徐玉娇廖松柏北京中医药大学深圳医院(龙岗)中心实验室桂林医学院第二附属医院广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室中心实验室广西壮族自治区南溪山医院泌尿外科

单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing, scRNA-seq)技术是一种对整个转录组进行高通量测序分析以揭示单个细胞基因状态的新技术。作为细胞异质性研究的重要工具，可以帮助识别细胞异质性的复杂机制，发现新的细胞亚群，并有助于揭... 详细信息

单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing, scRNA-seq)技术是一种对整个转录组进行高通量测序分析以揭示单个细胞基因状态的新技术。作为细胞异质性研究的重要工具，可以帮助识别细胞异质性的复杂机制，发现新的细胞亚群，并有助于揭示疾病致病机制、演进及耐药性的分子机制。近年来该技术发展迅速，积累了大量的研究数据。文章主要对scRNA-seq技术的发展现状及其在自身免疫性疾病研究中的应用作一综述，以期为该项技术在免疫学等相关领域的应用研究提供理论参考，并将有助于相应疾病的诊断和治疗。

关键词：单细胞核糖核酸测序技术细胞异质性系统性硬化症系统性红斑狼疮自身免疫性疾病

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2020-2022年1501例地中海贫血疑似病例基因检测结果分析

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中国实验血液学杂志 2024年第6期32卷 1848-1851页

作者：杨雪丽刘珍玉张俊宁王广宇李继明李春洪侯显良桂林医学院第二附属医院中心实验室广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室广西桂林541199

目的:探讨桂林市临桂区的地贫基因类型和频率分布,为该地区地贫防控工作提供参考。方法:对在桂林医学院第二附属医院进行地中海贫血基因检测的1501例疑似病例的检测结果进行回顾性分析。采用跨越断裂点PCR(gap-PCR)技术检测缺失型α地... 详细信息

目的:探讨桂林市临桂区的地贫基因类型和频率分布,为该地区地贫防控工作提供参考。方法:对在桂林医学院第二附属医院进行地中海贫血基因检测的1501例疑似病例的检测结果进行回顾性分析。采用跨越断裂点PCR(gap-PCR)技术检测缺失型α地中海贫血基因,PCR-反向点杂交(PCR-RDB)技术检测非缺失型α地中海贫血基因和β地中海贫血基因。结果:在1501例被检者中,共检出地贫基因携带者678例,检出率为45.17%,其中α地贫(包括缺失型α地贫和非缺失型α地贫)379例,检出率为25.25%,以基因型--SEA/αα(227例,15.12%)为主,其次为-α^(3.7)/αα(53例,3.53%);β地贫270例,检出率为17.99%,以基因型β^(CD41-42)/β^(N)(144例,9.59%)为主,其次为β^(CD17)/β^(N)(66例,4.40%);α地贫复合β地贫29例,检出率为1.93%,以基因型--SEA/αα复合β^(CD41-42)/β^(N)(5例,0.33%)最为常见。结论:桂林市临桂区属于地中海贫血高发区,携带者基因型复杂多样,具有遗传异质性。本研究结果为该地区的遗传咨询和产前诊断提供了科学依据。

关键词：桂林市临桂区地中海贫血基因型频率

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高通量测序揭示原发性胆汁性胆管炎患者的T细胞受体图谱特征

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中国肝脏病杂志（电子版） 2024年第1期16卷 38-44页

作者：刘珍玉张俊宁杨雪丽王广宇侯显良桂林医学院第二附属医院广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室中心实验室广西桂林541199

目的揭示原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者T细胞受体(T cell receptor,TCR)图谱特征,并揭示大肠埃希菌(Escherichia coli,***)的丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)抗原在PBC疾病的分子模拟机制。方法采用多重聚合酶链反应和免疫组库测序技术分析PBC患者和健康对照者的CD4^(+)和CD8^(+)记忆性TCRβ链互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)序列的多样性、氨基酸组成及疏水性、共有CDR3序列。体外诱导和扩增人PDC-E2_(163-176)(人PDC-E2)抗原相关T细胞和*** PDC-E2_(31-44/134-147/235-248)(*** PDC-E2)抗原相关T细胞,通过免疫组库测序技术鉴定人(和***)PDC-E2抗原相关TCRβCDR3图谱,并分析其丰度变化。结果PBC患者组和健康对照组间的CD4^(+)记忆性T细胞、CD8^(+)记忆性T细胞TCRβCDR3免疫图谱多样性相似,D50指数[CD4^(+)记忆性T细胞:0.028±0.019比0.034±0.015;CD8^(+)记忆性T细胞:(1.86±2.70)×10^(-3)比(4.62±3.89)×10^(-4)]、Shannon指数(CD4^(+)记忆性T细胞:9.473±1.346比9.734±0.933;CD8^(+)记忆性T细胞:6.197±1.519比5.436±1.629)、Gini指数(CD4^(+)记忆性T细胞:0.786±0.048比0.760±0.036;CD8^(+)记忆性T细胞:0.920±0.047比0.939±0.025)等差异均无统计学意义(P均>0.05)。PBC组和健康对照组CD4^(+)记忆性T细胞和CD8^(+)记忆性T细胞间共有CDR3序列百分比差异无统计学意义[(6.47±1.43)%比(6.21±3.18)%;t=-0.21,P=0.84]。健康对照组和PBC组中序列长度为13、14、15的CDR3分子第6位和第7位氨基酸的组成频率中部分存在显著差异,疏水氨基酸组成频率近似。通过细胞培养和免疫组库测序鉴定了一系列人PDC-E2和*** PDC-E2抗原刺激后丰度显著上升的TCR序列。结论该研究鉴定出PBC疾病的TCR图谱特征,从TCR这个新视角阐述了***在PBC疾病中的分子模拟机制。

关键词：原发性胆汁性胆管炎 T细胞受体高通量测序丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基

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APOE基因多态性与糖脂代谢病的相关研究进展

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华夏医学 2024年第6期37卷 18-24页

作者：刘学欧明林桂林医学院第二附属医院中心实验室桂林541199 广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室桂林541199

糖脂代谢病(GLMD)是一种复杂的代谢紊乱疾病,主要表现为糖类和脂质的代谢异常,同时常伴随着多种靶器官的损伤。随着全球GLMD发病率的逐年上升,能够对其实行早期、有效干预的需求也日益凸显。载脂蛋白E(APOE)在脂质代谢中起着关键作用,与... 详细信息

糖脂代谢病(GLMD)是一种复杂的代谢紊乱疾病,主要表现为糖类和脂质的代谢异常,同时常伴随着多种靶器官的损伤。随着全球GLMD发病率的逐年上升,能够对其实行早期、有效干预的需求也日益凸显。载脂蛋白E(APOE)在脂质代谢中起着关键作用,与GLMD的发生和发展密切相关。本文旨在通过深入探讨GLMD的发病机制,特别是关注APOE的基因多态性在其中的遗传学基础,详细阐述APOE基因多态性与GLMD之间的内在联系及机制,并进一步探讨如何利用这一关系来预测和诊断GLMD,期望能够为GLMD的预防、诊断和治疗提供更为全面和深入的理解。

关键词：糖脂代谢病载脂蛋白E 基因多态性

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发育早期肝脏的细胞类型及空间分布

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中国科技期刊数据库医药 2024年第9期 0214-0218页

作者：唐誉函陈芯蕊何玉清何基源侯显良桂林医学院第二附属医院·广西慢性病代谢重塑与智能医学工程重点实验室中心实验室广西桂林541199

肝脏是人体内最大的腺体,具有代谢维生素、激素、分泌和排泄胆汁和解毒等的功能,对维持人体内的生理稳态具有重要的作用。但肝脏的发育过程尚未完全阐明,本研究旨在揭示胚胎肝脏的早期发育图谱。方法采用空间转录组技术和单细胞测序技... 详细信息

肝脏是人体内最大的腺体,具有代谢维生素、激素、分泌和排泄胆汁和解毒等的功能,对维持人体内的生理稳态具有重要的作用。但肝脏的发育过程尚未完全阐明,本研究旨在揭示胚胎肝脏的早期发育图谱。方法采用空间转录组技术和单细胞测序技术全面系统的研究8孕周和17孕周胚胎肝组织的基因表达图谱、信号网络调控以及细胞空间分布特征。结果本文鉴定了不同细胞群的高表达基因,并通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析鉴定了不同细胞群差异表达基因所富集的信号通路。此外,本文鉴定了不同胚胎时期肝实质细胞,红系细胞的空间分布差异。结论 8孕周与17孕周胚胎肝脏中基因表达水平、信号通路以及细胞类型存在差异,这为肝脏移植,类器官以及肝脏疾病的研究与治疗提供新的思路。

关键词：胚胎肝组织空间转录组技术单细胞测序基因表达图谱

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