检索结果-内蒙古大学图书馆

中华神经医学杂志 2022年第4期21卷 325-332页

作者：彭彩霞罗汉将杨帆刘承伟陈敏桂林医学院附属医院神经科学实验室广西神经系统疾病临床医学研究中心广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541001

目的探讨帕金森病(PD)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体的稳定性。方法收集自2020年6月至2020年12月于桂林医学院附属医院神经内科确诊的10例PD患者外周血液样本及同期10例健康体检人员外周血液样本,用140μL 0.01 mol/L ... 详细信息

目的探讨帕金森病(PD)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体的稳定性。方法收集自2020年6月至2020年12月于桂林医学院附属医院神经内科确诊的10例PD患者外周血液样本及同期10例健康体检人员外周血液样本,用140μL 0.01 mol/L PBS将1 mg重组人α-Syn溶解后分别与70μL健康人员、PD患者血浆及PBS于37℃环境下恒温振荡孵育7 d(依次命名为HC、PD及PBS组);预成型原纤维(PFF)组采用10μgα-Syn PFF用于后续实验。利用不同浓度胰蛋白酶(胰蛋白酶:α-Syn浓度比分别为1∶80、1∶40、1∶20)、不同浓度蛋白酶K(PK)(1.0、1.5、2.0μg/mL)消化各组蛋白后采用Western blotting法检测消化前后α-Syn水平的差异。结果(1)胰蛋白酶对PFF的消化作用:随着胰蛋白酶浓度的增加,PFF逐渐减少,当胰蛋白酶与α-Syn PFF蛋白浓度比提高至1∶20时,相对分子质量>35000处的α-Syn聚集体基本被消化,与其他浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)胰蛋白酶对α-Syn聚集体的消化作用:在相对分子质量<25000处,当胰蛋白酶与蛋白浓度比为1∶20时,与HC和PD组比较,PBS组α-Syn表达水平降低更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量35000~40000处,3种胰蛋白酶浓度下3组α-Syn表达水平均明显降低;与HC和PD组相比,PBS组降低均更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量>40000处,当浓度升高到1∶20时,PD组α-Syn才出现明显减少,被消化程度表现为PBS组>HC组>PD组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)PK对PFF的消化作用:当PK浓度为1.0、1.5及2.0μg/mL时,相对分子质量>35000处蛋白均已被基本消化,相对分子质量<25000处α-Syn单体明显减少并出现小分子片段;与阴性对照(PK浓度为0μg/mL)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)PK对α-Syn聚集体的消化作用:在相对分子质量<25000处,PBS组α-Syn单体被消化成更小的片段,而HC和PD组α-Syn单体未见明显消化,同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量35000~40000处,随着PK浓度增加,PBS组α-Syn二聚体被消化程度明显增加;HC组α-Syn二聚体的量随着PK浓度增加而增加;而PD组α-Syn二聚体的量随PK浓度的增加变化不明显;同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。在相对分子质量>40000处,随着PK浓度增加,PBS、HC及PD组α-Syn均出现一定程度减少,同一浓度下组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体的稳定性高于HC血浆及PBS孵育形成的α-Syn聚集体。

关键词：帕金森病 α-突触核蛋白聚集体消化稳定性

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帕金森病及多系统萎缩患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体细胞膜破坏能力的研究

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中华神经医学杂志 2023年第2期22卷 109-116页

作者：胡勇罗汉将陈敏桂林医学院附属医院神经科学实验室桂林医学院附属医院神经内科广西神经系统疾病临床医学研究中心广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541001

目的通过观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞膜的破坏能力,进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法收集桂林医学院附属医院神经内科自2018年1月至2022年1月确诊的5例PD... 详细信息

目的通过观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞膜的破坏能力,进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法收集桂林医学院附属医院神经内科自2018年1月至2022年1月确诊的5例PD患者、5例MSA患者外周血液样本,以及同时期5例健康体检人员外周血液样本;采用0.01 mol/L PBS溶解α-Syn后分别与PBS、健康人员、PD患者及MSA患者血浆在37℃条件下恒温振荡孵育4 d(依次命名为PBS组、HC组、PD组和MSA组)。以酸性磷脂1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(POPS)为原料,采用薄膜分散-超声法制备包裹钙黄绿素的小单室脂质体(SUVs),采用马尔文纳米粒度电位仪及透射电镜分析SUVs粒径大小及形态。采用各组不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μmol/L)的α-Syn聚集体分别处理SUVs及人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),通过测定透析后钙黄绿素相对释放量及细胞内钙黄绿素荧光值评估不同条件下形成的α-Syn聚集体对脂质体及细胞膜的破坏能力。结果(1)各组α-Syn聚集体对SUVs的破坏作用:各组α-Syn聚集体诱导释放的钙黄绿素随着蛋白浓度的升高而增多。当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,PD组和MSA组诱导释放的钙黄绿素均明显多于PBS和HC组,MSA组诱导释放的钙黄绿素进一步多于PD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞膜的破坏作用:各组细胞内钙黄绿素荧光值随蛋白浓度的升高而降低。当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,PD组和MSA组细胞内钙黄绿素荧光值均显著低于PBS组和HC组,MSA组细胞内钙黄绿素荧光值进一步低于PD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞存活的影响:当α-Syn蛋白浓度为8μmol/L时,各组SH-SY5Y细胞活力均明显下降,与PBS和HC组相比,PD组和MSA组细胞活力均显著下降,其中MSA组细胞活力又较PD组进一步下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PD患者血浆和MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体对细胞膜的破坏能力大于正常人群血浆,尤以MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体为著。

关键词：帕金森病多系统萎缩 α-突触核蛋白聚集体细胞膜

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小胶质细胞在金花茶多糖保护脑出血中的作用

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中国药理学通报 2020年第2期36卷 231-237页

作者：田宁向文静周紫贤蒋艳林陆美莲文剑廖儒佳桂林医学院附属医院神经科学实验室广西桂林541004 桂林医学院附属医院广西神经系统疾病临床医学研究中心广西桂林541004 桂林医学院附属医院广西脑与认知重点实验室广西桂林541004 桂林医学院附属医院神经内科广西桂林541004 桂林医学院附属医院药学部广西桂林541004

目的探讨金花茶多糖(camellia nitidissima polysaccharides,CNP)在脑出血中的作用及机制。方法C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、脑出血组和金花茶多糖组,脑出血后即刻灌胃金花茶多糖并连续给药3 d。神经功能缺陷评分评价整体功能,旷场... 详细信息

目的探讨金花茶多糖(camellia nitidissima polysaccharides,CNP)在脑出血中的作用及机制。方法C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、脑出血组和金花茶多糖组,脑出血后即刻灌胃金花茶多糖并连续给药3 d。神经功能缺陷评分评价整体功能,旷场与粘附移除实验检测运动与感觉功能。伊文思蓝染色和水肿实验检测血脑屏障损伤程度;免疫荧光检测小胶质细胞激活情况;ELISA检测炎症因子水平;定量PCR及免疫荧光检测小胶质细胞极化水平。结果金花茶多糖可提高小鼠神经功能评分,改善运动功能而对感觉功能无影响;减轻脑水肿与保护血脑屏障;抑制小胶质细胞的激活、抑制炎症因子表达,同时促进小胶质细胞从M1型转化为M2型。结论金花茶多糖促进小胶质细胞M1型转化为M2型减轻炎症、脑水肿与血脑屏障损伤,从而改善脑出血后损伤。

关键词：脑出血金花茶多糖小胶质细胞极化继发性脑损伤神经保护

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miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生

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中华神经医学杂志 2024年第7期23卷 649-658页

作者：罗汉将吴城荔朱金勇陈敏桂林医学院附属医院神经科学实验室广西神经系统疾病临床医学研究中心广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541001

目的探讨miR-15b-5p参与PD中抑郁样行为发生的机制。方法(1)将18只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为PD组、干预组及对照组,每组6只。PD组小鼠通过脑立体定位仪将0.25 mg/kg鱼藤酮注射至右侧纹状体以制备PD模型,干预组小鼠接受0.25 mg/kg... 详细信息

目的探讨miR-15b-5p参与PD中抑郁样行为发生的机制。方法(1)将18只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为PD组、干预组及对照组,每组6只。PD组小鼠通过脑立体定位仪将0.25 mg/kg鱼藤酮注射至右侧纹状体以制备PD模型,干预组小鼠接受0.25 mg/kg鱼藤酮及miR-15b-5p抑制物慢病毒注射,对照组小鼠注射等体积PBS。4周后进行旷场实验及转棒实验评价小鼠的运动能力,进行糖水偏好实验及强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为表现,然后提取小鼠黑质及纹状体中相关蛋白及miRNAs,进行Western blotting实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验以及免疫荧光染色实验检测相关指标[miR-15b-5p、酪氨酸羟化酶(TH)、脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)、突触后密度蛋白95(PSD95)]。(2)将100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列分别转染至6孔板上SH-SY5Y细胞中(分别命名为miR-15b-5p模拟物组、miR-15b-5p模拟物对照组及miR-15b-5p抑制物组、miR-15b-5p抑制物对照组),48 h后进行Western blotting实验及qRT-PCR实验,以检测BDNF、TrkB、PSD95蛋白及miR-15b-5p表达改变。(3)将100 ng BDNF 3'端非编码区(3'-UTR)野生型或突变型荧光素酶报告载体质粒以及100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列共转染至24孔板上SH-SY5Y细胞中,得到相应8组细胞,48 h后进行荧光素酶报告载体活性检测实验,以检测各组细胞的荧光素酶活性。结果(1)与对照组相比,PD组小鼠的运动速度明显减慢、落棒潜伏期明显缩短、糖水偏好百分比明显降低、不动时间明显增加;与PD组相比,干预组小鼠的运动速度明显提高、落棒潜伏期明显延长、糖水偏好百分比明显升高,不动时间明显减少;差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与miR-15b-5p模拟物对照组比较,miR-15b-5p模拟物组细胞中miR-15b-5p表达明显升高,BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±5.75 vs.66.79±5.90;100.00±5.95 vs.84.46±5.77;100.00±7.02 vs.80.43±3.25);与miR-15b-5p抑制物对照组比较,miR-15b-5p抑制物组细胞中miR-15b-5p表达明显降低,BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(100.00±6.81 vs.119.90±5.66;100.00±2.88 vs.110.10±4.15;100.00±2.19 vs.124.60±11.69);差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PD组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显增加,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±9.20 vs.63.60±12.80;100.00±9.88 vs.71.95±10.00;100.00±5.16 vs.70.37±8.43;100.00±7.01 vs.68.12±10.22),BDNF荧光强度明显降低(100.00±12.99 vs.48.23±12.58);与PD组相比,干预组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显降低,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(63.60±12.80 vs.90.69±9.84;71.95±10.00 vs.93.31±4.50;70.37±8.43 vs.88.11±4.10;68.12±10.22 vs.89.59±5.93),BDNF荧光强度明显升高(48.23±12.58 vs.83.65±10.52);差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物组细胞中荧光素酶活性明显降低(100.00±5.07 vs.90.59±1.75);与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物组细胞中荧光素酶活性明显升高(100.00±5.08 vs.152.20±31.87);差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生。

关键词：帕金森病抑郁 miR-15b-5p 脑源性神经营养因子突触可塑性

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帕金森病及多系统萎缩患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体对细胞线粒体及溶酶体功能的影响

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中华神经医学杂志 2024年第12期23卷 1195-1204页

作者：罗玉吴城荔胡勇陈敏罗汉将广西神经系统疾病临床医学研究中心桂林医学院附属医院神经科学实验室广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541001

目的观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞线粒体及溶酶体功能的影响,以进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法将10μg/mL经磷酸盐缓冲液(PBS)及健康对照者(HC)、PD患者、... 详细信息

目的观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞线粒体及溶酶体功能的影响,以进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法将10μg/mL经磷酸盐缓冲液(PBS)及健康对照者(HC)、PD患者、MSA患者血浆孵育后形成的α-Syn聚集体分别处理人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(分别为PBS组、HC组、PD组、MSA组),以未经处理的SH-SY5Y细胞为对照组。采用线粒体红色荧光探针荧光染色实验检测各组细胞线粒体膜电位,Western blotting实验检测线粒体及细胞质中细胞色素C(Cyt C)的表达,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测细胞内ATP水平,从而评价不同α-Syn聚集体对细胞线粒体功能的影响。采用Western blotting实验检测各组细胞中溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)的表达,魔力红荧光染色实验检测溶酶体中组织蛋白酶B活性,从而评价不同α-Syn聚集体对细胞溶酶体功能的影响。结果(1)不同α-Syn聚集体对线粒体功能的影响:与对照组相比,PBS组、HC组、PD组及MSA组SH-SY5Y细胞内线粒体红色荧光探针荧光染色相对强度明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组和HC组相比,PD组和MSA组SH-SY5Y细胞内线粒体红色荧光探针荧光染色相对强度明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与PD组(60.05%±4.24%)相比,MSA组SH-SY5Y细胞内线粒体红色荧光探针荧光染色相对强度(41.27%±5.97%)明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,HC组、PD组及MSA组SH-SY5Y细胞线粒体中Cyt C蛋白表达明显降低,PBS组、HC组、PD组及MSA组SH-SY5Y细胞浆中Cyt C蛋白表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组和HC组相比,PD组和MSA组SH-SY5Y细胞线粒体中Cyt C蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组相比,MSA组SH-SY5Y细胞浆中Cyt C蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与PD组(线粒体Cyt C蛋白:65.52%±2.18%,细胞浆Cyt C蛋白:174.00%±16.18%)相比,MSA组SH-SY5Y细胞线粒体中Cyt C蛋白(51.50%±4.22%)表达明显降低,细胞浆中Cyt C蛋白(199.40%±6.73%)表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PBS组、HC组、PD组及MSA组SH-SY5Y细胞内ATP水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组和HC组相比,PD组和MSA组SH-SY5Y细胞内ATP水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与PD组[(2.96±0.29)nmol/mg]相比,MSA组SH-SY5Y细胞内ATP水平[(1.81±0.13)nmol/mg]明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)不同α-Syn聚集体对溶酶体功能的影响:与对照组相比,PD组及MSA组SH-SY5Y细胞中LAMP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组、HC组及PD组(79.70%±4.34%)相比,MSA组SH-SY5Y细胞中LAMP1蛋白(60.74%±7.94%)表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PBS组、HC组、PD组及MSA组SH-SY5Y细胞溶酶体中组织蛋白酶B魔力红荧光染色相对强度明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与PBS组和HC组相比,PD组和MSA组SH-SY5Y细胞溶酶体中组织蛋白酶B魔力红荧光染色相对强度明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与PD组(305.90%±24.87%)相比,MSA组SH-SY5Y细胞溶酶体中组织蛋白酶B魔力红荧光染色相对强度(399.00%±35.54%)明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD患者和MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体均可严重损伤细胞线粒体及溶酶体功能,尤以后者为著。

关键词：帕金森病多系统萎缩 α-突触核蛋白聚集体线粒体溶酶体

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基于iTRAQ的蛋白质组学技术对Drp1基因过表达挽救帕金森病模型果蝇的机制研究

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中华神经医学杂志 2018年第11期17卷 1081-1088页

作者：朱金勇石芳文剑韦载娲李清华桂林医学院附属医院神经科学实验室桂林541001 广西神经系统疾病临床医学研究中心桂林医学院广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541004

目的应用iTRAQ技术探讨线粒体动力相关蛋白1（Drp1）基因过表达挽救PD模型果蝇的蛋白质组学变化以及挽救效应的分子机制。方法将各果蝇品系分别杂交构建出不同实验果蝇：正常组、PD模型组（PINK1B9转基因疾病果蝇）和PD挽救组（Drp1基... 详细信息

目的应用iTRAQ技术探讨线粒体动力相关蛋白1（Drp1）基因过表达挽救PD模型果蝇的蛋白质组学变化以及挽救效应的分子机制。方法将各果蝇品系分别杂交构建出不同实验果蝇：正常组、PD模型组（PINK1B9转基因疾病果蝇）和PD挽救组（Drp1基因过表达PD模型果蝇），并观察果蝇翅膀形态、运动能力及计算异翅率、飞行率。提取果蝇蛋白组分，以iTRAQ技术联用串联质谱分析蛋白质组的整体变化情况，并将各组果蝇蛋白鉴定结果分别两两比较获得差异蛋白，最后将鉴定得到的差异蛋白进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果PD挽救组的异翅率与PD模型组相比明显降低（2.60%±0.47% vs. 82.40%±12.47%），飞行率与PD模型组相比明显提高（89.70%±7.76% vs. 3.30%±1.69%），差异均有统计学意义（P〈0.05）。蛋白质组学分析结果共鉴定得到3630个蛋白，其中PD模型组与正常组间鉴定得到的差异蛋白共282个，主要是铁离子相关蛋白；PD挽救组与PD模型组间鉴定得到的差异蛋白共170个，主要是锌离子相关蛋白。共同差异蛋白的信息显示Drp1基因过表达后逆转了绝大多数PD模型中相对正常果蝇异常表达的蛋白，其中21%的蛋白具有金属离子结合功能，且主要是锌离子结合功能。结论金属离子代谢可能在PD发病及Drp1基因过表达挽救PD过程中有重要作用，尤其是锌离子代谢可能在挽救效应中起主要作用。

关键词：帕金森病线粒体动力相关蛋白1 iTRAQ技术蛋白质组学金属离子代谢转基因果蝇

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小分子热休克蛋白与肿瘤凋亡关系的研究进展

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国际医药卫生导报 2023年第3期29卷 297-301页

作者：王怡民李清华桂林医学院附属医院神经内科、广西神经系统疾病临床医学研究中心、桂林医学院广西脑与认知神经科学重点实验室桂林541001

小分子热休克蛋白(small heat shock proteins,sHSPs)是众多热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)中的一大类,包括HSPB1、HSPB5、HSPB6、HSPB8等。近来研究表明,它们在许多信号通路扮演关键角色,这些信号通路与肿瘤的发生、抗放疗和凋... 详细信息

小分子热休克蛋白(small heat shock proteins,sHSPs)是众多热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)中的一大类,包括HSPB1、HSPB5、HSPB6、HSPB8等。近来研究表明,它们在许多信号通路扮演关键角色,这些信号通路与肿瘤的发生、抗放疗和凋亡的抑制有着许多联系,尤其是在肿瘤凋亡方面。本文对sHSPs在肿瘤凋亡途径方面予以综述。

关键词：小分子热休克蛋白肿瘤凋亡热诱导

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