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细菌学方法和HOOF-Prints技术在绵羊种布鲁氏菌019株鉴定中的比较研究

微生物学报 2007年第2期47卷 240-243页

作者：王远志陈创夫崔步云柳建新新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室石河子大学动物科技学院石河子832003 中国疾病预防与控制中心传染病预防控制研究所北京100050

应用细菌学常规方法和分子生物学检测方法对绵羊种布鲁氏菌非典型株019进行分类研究。利用高变8聚核苷酸DNA指纹技术(HOOF-Prints)对绵羊种布鲁氏菌019株可变数目重复片段(VNTR)的8个位点进行PCR扩增和序列测定,将测定结果与GenBank数... 详细信息

应用细菌学常规方法和分子生物学检测方法对绵羊种布鲁氏菌非典型株019进行分类研究。利用高变8聚核苷酸DNA指纹技术(HOOF-Prints)对绵羊种布鲁氏菌019株可变数目重复片段(VNTR)的8个位点进行PCR扩增和序列测定,将测定结果与GenBank数据库比较分析,应用DNAMAN进行同源性分析,并构建系统进化树。结果表明,绵羊种布鲁氏菌019株和绵羊种布鲁氏菌参考株63/290的亲缘关系高于绵羊种布鲁氏菌019株与其他参考株的亲缘关系,该结论与细菌学常规鉴定结果一致。应用HOOF-Prints技术可以对绵羊种布鲁氏菌非典型株019进行鉴定,该技术有望弥补传统分类方法的不足。

关键词：绵羊种布鲁氏菌019株细菌鉴定常规方法 HOOF—Prints

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重组耻垢分枝杆菌制剂预防幽门螺杆菌感染的作用机理的初步探讨

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第11期27卷 1032-1036页

作者：向廷秀谯敏姜政黄爱龙陶小红王丕龙赖国旗重庆医科大学附属第一医院实验研究中心 400016 重庆医科大学附属第一医院消化内科 400016 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学实验动物中心

目的探讨重组耻垢分枝杆菌实验制剂（recombinant Mycobacterium smegmatis，rMs）预防幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染的作用机理。方法实验制剂免疫BLAB／c小鼠4周，用Hp攻击后4周，取血清、胃、脾组织，RT-PCR检测小鼠胃... 详细信息

目的探讨重组耻垢分枝杆菌实验制剂（recombinant Mycobacterium smegmatis，rMs）预防幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染的作用机理。方法实验制剂免疫BLAB／c小鼠4周，用Hp攻击后4周，取血清、胃、脾组织，RT-PCR检测小鼠胃黏膜和脾组织的TH1型细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-12）与TH2型细胞因子（IL-4、IL-6、IL-10）；用ELISA检测针对唧的特异性血清IgG、IgG1、IgG2a和IgA水平；用免疫组化方法检测胃黏膜固有层IgA表达；用MTT检测脾淋巴细胞增殖。结果免疫后BALB／c小鼠特异性抗体显示rMs制剂诱导Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高，以IgG2a占优势。用Hp抗原刺激后各免疫组小鼠脾淋巴细胞均有明显增殖。免疫组化显示各免疫组小鼠胃黏膜固有层IgA阳性标记腺体数明显高于对照组。RT-PCR证实，跏攻击之前，各免疫组胃和脾组织已出现了IFN-γ、IL-12、IL-2表达而无IL-4、IL-6、IL-10表达。PBS对照组和单纯耻垢分枝杆菌（Ms）组胃黏膜和脾组织各细胞因子均无表达；Hp攻击后，PBS和单纯Ms组胃组织出现以TH1细胞IFN-γ为主的增生，IFN-γ水平显著高于rMs组（P〈0．05）；而3个rMs制剂组脾脏则出现以TH2细胞（IL-4）为主的增生，IL-4水平显著高于对照组（P〈0．05）。提示该制剂的作用机制是诱导TH1，TH2平衡型免疫应答。结论成功地建立了BALB／c小鼠的Hp感染模型，对rMs制荆的免疫保护机理研究结果显示，rMs能产生以TH1细胞和TH2细胞协同作用的保护性免疫应答。

关键词：幽门螺杆菌重组耻垢分枝杆菌制剂作用机理

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水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性

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复旦学报（医学版） 2007年第5期34卷 662-668页

作者：陆一涵宋建根葛胜祥姜庆五王法弟郭清顺董晓莲朱连华范建良高眉扬夏宁邵郑英杰复旦大学公共卫生学院流行病学教研室-公共卫生安全教育部重点实验室上海200032 浙江省德清县疾病预防控制中心德清313200 厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的通过检测浙江省德清县水系上下游地区农村人群血清戊型肝炎病毒抗体水平,以评价非爆发状态下水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性。方法通过统一的调查表收集1 720人的一般资料及可能危险因素,并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HE... 详细信息

目的通过检测浙江省德清县水系上下游地区农村人群血清戊型肝炎病毒抗体水平,以评价非爆发状态下水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性。方法通过统一的调查表收集1 720人的一般资料及可能危险因素,并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HEV-IgG抗体。结果总标化抗体阳性率为48.79%。其中,上游地区人群标化抗体阳性率为43.52%,下游标化阳性率为51.26%。将两地人群不同的构成特征调整后,下游抗体阳性率仍显著高于上游。同时发现,男性抗体阳性率高于女性;各年龄组阳性率随年龄升高而增加;家庭养猪、喜食猪肝、主要饲养动物和饮酒皆与戊肝感染有统计学关联。结论浙江农村地区戊型肝炎病毒感染情况与当地水源因素有较为显著的关联;猪可能是戊型肝炎病毒的自然宿主之一。

关键词：肝炎病毒抗戊型肝炎-IgG抗体经水传播人畜共患病

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预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗的研制及免疫学特性

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1163-1166页

作者：李文生刘红莉张盈涛杨筱风王一理司履生陕西省人民医院西安交通大学医学院第三附属医院陕西西安710068 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基... 详细信息

目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株。Western blot检测HPV58L1蛋白表达。用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数。结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白。豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病。免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体。ELISPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高。结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。

关键词： HPV58 减毒志贺氏杆菌疫苗同源重组

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pcDNA3-HERG转染抑制苯肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的动物实验

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中华心律失常学杂志 2007年第1期11卷 53-57页

作者：赵永辉李宇薛小临杨海涛张爱峰孙超峰王东琦黄辰崔长琮西安交通大学第一医院心内科离子通道病研究室 710061 环境与疾病相关基因教育部重点实验室

目的探讨HERG基因真核表达质粒pcDNA3-HERG（编码人快激活延迟整流钾通道α亚单位）转染抑制α1肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素（phenylephrine，PE）诱导的乳兔心室肌细胞肥大的电生理机制。方法培养乳兔心室肌细胞，观察10μmol／... 详细信息

目的探讨HERG基因真核表达质粒pcDNA3-HERG（编码人快激活延迟整流钾通道α亚单位）转染抑制α1肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素（phenylephrine，PE）诱导的乳兔心室肌细胞肥大的电生理机制。方法培养乳兔心室肌细胞，观察10μmol／LPE作用6h和48h心肌肥大指标（细胞体积、总蛋白含量及膜电容）、动作电位时限（APD）及钙调神经磷酸酶（CaN）活性的变化；以真核表达质粒pcDNA3-HERG转染心室肌细胞，观察转染细胞经PE诱导48h后上述指标的变化。结果 PE作用6h，心室肌细胞动作电位复极达90％时限（APD90）延长14．3％（P〈0．05），而此时并无心肌肥大和CaN活性增加。PE作用48h，心室肌细胞APD90延长18．8％（P〈0．05），细胞体积、总蛋白含量、膜电容以及CaN活性分别增加40．0％、41．8％、36．4％、124．1％（P〈0．01）；pcDNA3-HERG转染可过度表达ⅠHERG，其尾电流密度约为未转染HERG组快激活延迟整流钾电流（ⅠKr）尾电流密度的4倍（P〈0．05），可促进复极，明显缩短PE引起的APD90延长（P〈0．05），显著抑制PE诱导心肌肥大和CaN活性增加。结论 PE诱导乳兔心室肌细胞肥大过程中，APD延长并非继发于而是早于心肌肥大。APD延长，继而导致Ca^2＋内流和胞内Ca^2＋增加，激活CaN信号通路可能在PE诱导心肌肥大中起重要作用。

关键词：苯肾上腺素 HERG基因真核表达质粒心肌细胞肥大兔

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α-HNP-1转基因细胞系的建立

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生物技术通报 2007年第6期23卷 113-116页

作者：高其双黄海军欧阳静萍吴建英陶弼菲杨悦张德玲蒋思文武汉市畜牧兽医科学研究所武汉430065 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室&农业部猪遗传育种重点开放实验室武汉430070 武汉大学医学院过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉430071

目的构建稳定表达人α-HNP-1的转基因细胞系,为稳定生产α-HNP-1并将其应用于医药开发提供生产细胞源。方法真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNP-1经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染昆明白小鼠胚胎干细胞来源的上皮细胞,通过不同浓度的G41... 详细信息

目的构建稳定表达人α-HNP-1的转基因细胞系,为稳定生产α-HNP-1并将其应用于医药开发提供生产细胞源。方法真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNP-1经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染昆明白小鼠胚胎干细胞来源的上皮细胞,通过不同浓度的G418加压筛选,建立稳定转染的胚胎干细胞来源的上皮细胞系,用RT-PCR及抑菌试验检测α-HNP-1的表达。结果建立了稳定转染的ES来源的上皮细胞系,成功地表达目的基因,其培养上清液及细胞冻融液具有抑菌作用,结论真核表达载体稳定转染胚胎干细胞来源的上皮细胞系,为进一步研究α-HNP-1的功能奠定了基础。

关键词：人α-防御素-1 真核表达载体 ES细胞上皮细胞系稳定转染基因表达

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利用激光共聚焦研究金黄地鼠与小鼠科间妊娠中MHCⅡ和Gal-α-Gal的表达(英文)

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激光生物学报 2007年第4期16卷 394-399页

作者：王希朝段恩奎华南师范大学激光生命科学研究所暨激光生命科学教育部重点实验室广东广州510631 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

目的:种间胚胎移植是挽救濒危动物的一个有效手段。以往的研究主要集中于对种间、同种妊娠之间微观结构和解剖学差异的描述上,而对导致这些现象产生的分子机制的研究却所见甚少。本研究的目的是阐明同种妊娠和科间妊娠之间免疫反应的差... 详细信息

目的:种间胚胎移植是挽救濒危动物的一个有效手段。以往的研究主要集中于对种间、同种妊娠之间微观结构和解剖学差异的描述上,而对导致这些现象产生的分子机制的研究却所见甚少。本研究的目的是阐明同种妊娠和科间妊娠之间免疫反应的差异,并初步探讨科间妊娠中流产的可能原因。方法:以科间妊娠第4天、第8天、第12天的孕体为实验组,小鼠同种移植妊娠第4天、第8天、第12天的子宫孕体和相应时间假孕小鼠的子宫为阳性和阴性对照。结果:采用间接免疫荧光和激光共聚焦扫描的方法对冰冻切片显色的结果表明:妊娠第8天时,MHCⅡ分子和Gal-α-Gal抗原决定簇的表达位置和表达密度在科间妊娠、阳性、阴性对照之间均不相同。妊娠第八天时,MHCⅡ分子在科间妊娠中的表达弱于同种妊娠,其表达模式在第12天时也不相同。Gal-α-Gal抗原决定簇在科间妊娠第8天时不表达,但在同种妊娠中却有一定水平的表达。在妊娠第12天,科间妊娠中有一定量的表达,但与同种妊娠的表达模式不同。结论:科间妊娠和同种妊娠的免疫反应有差异,这些差异可能是造成科间妊娠失败的原因之一。

关键词：金黄地鼠小鼠科间妊娠 MHCⅡ Gal-α-Gal抗原决定簇

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尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的T淋巴细胞浸润

尼古丁抑制6-羟基多巴胺损伤诱导的T淋巴细胞浸润

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第三届全国脑与认知科学学术研讨会暨脑与认知科学国际研讨会

作者：周明徐胜利陈彪首都医科大学宣武医院北京市老年病研究所神经生物学研究室教育部神经退行性疾病重点实验室

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种目前病因不明且无有效治疗手段的疾病。流行病学调查显示,吸烟与 PD 发病之间存在明显的负相关关系。临床和动物实验研究证明尼古丁可保护多巴胺能神经元。后续的研究表明尼古丁通过α4烟硷样...

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种目前病因不明且无有效治疗手段的疾病。流行病学调查显示,吸烟与 PD 发病之间存在明显的负相关关系。临床和动物实验研究证明尼古丁可保护多巴胺能神经元。后续的研究表明尼古丁通过α4烟硷样乙酰胆硷受体 (nAChR),抑制多巴胺能神经元摄取神经毒素,促进具有保护作用的神经营养因子表

关键词：

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siRNA腺病毒抑制Survivin基因表达诱导肝癌细胞凋亡

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中国病原生物学杂志 2007年第5期2卷 321-325页

作者：段瑞红闫歌公茂庆王怀位孙传红蒲丹唐霓黄爱龙山东省济宁市第一人民医院内科山东济宁272111 山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

目的为改进质粒siRNA载体的不足,建立siRNA的病毒性载体系统,并探讨凋亡抑制因子Survivin基因在肝癌细胞中的作用。方法通过已建立的Survivin质粒siRNA,构建Survivin的腺病毒siRNA载体系统,筛选重组病毒并感染肝癌细胞HepG2细胞,应用Wes... 详细信息

目的为改进质粒siRNA载体的不足,建立siRNA的病毒性载体系统,并探讨凋亡抑制因子Survivin基因在肝癌细胞中的作用。方法通过已建立的Survivin质粒siRNA,构建Survivin的腺病毒siRNA载体系统,筛选重组病毒并感染肝癌细胞HepG2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测Survivin基因表达变化,用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡。结果成功构建Survivin基因的腺病毒siRNA载体及重组腺病毒,感染肝癌细胞明显抑制Survivin蛋白表达,抑制率66.32%;降低Survivin基因的mRNA转录水平达72.04%;应用流式细胞仪观察肿瘤细胞凋亡明显增加。结论腺病毒siRNA载体系统可作为抑制目的基因,进而研究其功能和作用的技术平台,并为其他基因的相关研究打下基础;抑制Survivin基因表达可诱导肿瘤细胞HepG2的凋亡,为今后腺病毒siRNA载体应用于肿瘤动物实验和肿瘤基因治疗提供实验资料。

关键词：腺病毒siRNA survivin 肝癌凋亡

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Hyper-IL-6融合基因的构建及在真核细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 141-143,147页

作者：郄春花秦波黄爱龙刘杞陈国民重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400010

目的:构建融合基因Hyper-IL-6并在真核细胞中进行表达。方法:采用基因拼接(GeneSOEing)法将人类可溶性白细胞介素6受体和白细胞介素6的编码基因用一富含甘氨酸序列的接头经PCR扩增融合,并定向克隆至pIRES2-EGFP,构建与绿色荧光蛋白(GFP... 详细信息

目的:构建融合基因Hyper-IL-6并在真核细胞中进行表达。方法:采用基因拼接(GeneSOEing)法将人类可溶性白细胞介素6受体和白细胞介素6的编码基因用一富含甘氨酸序列的接头经PCR扩增融合,并定向克隆至pIRES2-EGFP,构建与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的融合重组质粒,转染哺乳动物细胞,通过绿色荧光蛋白、RT-PCR和免疫组化检测Hyper-IL-6蛋白的表达。结果:PCR扩增出1224bp的Hyper-IL-6编码序列并成功构建重组质粒pIRES-HIL-6,重组质粒转染真核细胞后经检测证实Hyper-IL-6能在真核细胞中表达。结论:人类Hyper-IL-6重组表达质粒的成功构建与真核表达为以后对其进行活性分析和生物学功能的研究提供了基础。

关键词： Hyper-IL-6 绿色荧光蛋白真核细胞表达

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