目的:探讨酸敏感离子通道1(acid-sensing ion channel 1,ASIC1)通过细胞外信号调节激酶5(extracellular-signalregulated protein kinase 5,ERK5)信号通路和线粒体紊乱途径介导髓核细胞凋亡的相关机制。方法:自2020年1月至2022年12月收...
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目的:探讨酸敏感离子通道1(acid-sensing ion channel 1,ASIC1)通过细胞外信号调节激酶5(extracellular-signalregulated protein kinase 5,ERK5)信号通路和线粒体紊乱途径介导髓核细胞凋亡的相关机制。方法:自2020年1月至2022年12月收治34例退行性腰椎间盘突出症患者作为研究对象,男21例,女13例;年龄29~52(37.43±4.75)岁;按照Pfirrmann腰椎间盘退变分级标准,Ⅱ级22例,Ⅳ级12例;L4,515例,L5S119例。取术中获得的LDH患者髓核组织进行免疫组织化学染色,检测ASIC1表达水平。通过原代培养法培养髓核细胞,通过甲苯胺蓝染色和免疫组织化学染色法进行鉴定,免疫荧光染色定位ASIC1蛋白表达。根据是否加入siRNA-ASIC1,ASIC1过表达质粒,以及ERK5的抑制剂对髓核细胞进行分组,即siRNA沉默组、过表达组和抑制剂组,每组3例。干预72 h后收集各组细胞,采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ASIC1,ERK5及B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(BCL-xL/BCL-2-associated death promoter,Bad),B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 Associated X,Bax)和抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达,钙离子试剂盒检测细胞内钙离子水平,JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位,AV-PI试剂盒检测细胞的凋亡。结果:Ⅳ级LDH患者术中取出的髓核组织弹性较差,呈白色,延展性差,免疫组织化学结果显示ASIC1表达升高。siRNA沉默组ASIC1的mRNA相对表达量(0.31±0.03)与抑制剂组(0.39±0.05)比较,差异无统计学意义(P>0.05);siRNA沉默组ERK5的mRNA相对表达量(0.32±0.05)与抑制剂组(0.15±0.04)比较,差异有统计学意义(P<0.05),提示ERK5为ASIC1的下游分子。siRNA沉默组和抑制剂组凋亡促进因子Bad,Bax的mRNA相对表达量低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05),抗凋亡因子Bcl-2的mRNA的相对表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);过表达组细胞中钙离子含量高于siRNA沉默组和抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.05),过表达组细胞中线粒体膜电位正常比例低于siRNA沉默组和抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.05),过表达组细胞凋亡率高于siRNA沉默组和抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ASIC1通道蛋白激活后,钙离子进入细胞,作为第二信使分子,通过ERK5信号通路和线粒体紊乱途径,调控髓核细胞的凋亡。
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