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武汉大学学报（医学版） 2007年第3期28卷 265-269页

作者：曹俊于皆平刘超红刘启胜齐元玲于红刚武汉大学人民医院消化内科湖北武汉430060 中国科学院武汉病毒学研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430061

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用... 详细信息

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。

关键词： FRNK 基因治疗腺病毒载体

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C组轮状病毒主要基因全片段扩增及武汉地方株Wu82的VP6和VP7编码基因序列分析

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中国人兽共患病学报 2007年第12期23卷 1167-1171页

作者：王远虹周璇小林宣道朱泽荣刘满清杨占秋武汉市疾病预防控制中心武汉430022 日本札幌医科大学卫生系武汉大学医学院病毒研究所病毒学国家重点实验室

目的建立C组轮状病毒VP6、VP7、VP4和NSP4基因全片段扩增方法;明确武汉地方株Wu82与其他毒株的系统发生关系。腹泻患者大便。方法PAGE筛查病毒;设计9对引物RT-PCR扩增VP6、VP7、VP4和NSP4基因;VP6、VP7序列及亲水位点分析。结果Wu82VP6... 详细信息

目的建立C组轮状病毒VP6、VP7、VP4和NSP4基因全片段扩增方法;明确武汉地方株Wu82与其他毒株的系统发生关系。腹泻患者大便。方法PAGE筛查病毒;设计9对引物RT-PCR扩增VP6、VP7、VP4和NSP4基因;VP6、VP7序列及亲水位点分析。结果Wu82VP6和VP7基因核酸序列与其它人C组轮状病毒相比同源性分别为98.45%～97.12%和99.34%～94.83%。结论C组轮状病毒基因非常保守,进化缓慢。2001年武汉地方株Wu82与1995年武汉地方株208株相比,VP7和VP6抗原表位存在差异。

关键词：轮状病毒 C组基因序列测定进化分析亲水性分析

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夏桑菊抗呼吸道合胞病毒的实验研究

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中国现代药物应用 2007年第8期1卷 11-14页

作者：黄孝军侯炜赵颖岚罗凡杨占秋武汉大学医学病毒学研究所/病毒学国家重点实验室恩施湖北民族学院微生物教研室 430071 武汉大学医学病毒学研究所/病毒学国家重点实验室 430071

目的评价夏桑菊抗呼吸道合胞病毒(RSV)的疗效。方法以病毒唑为对照,通过体外观察病毒致细胞病变效应(CPE)、病毒滴度、抗病毒指数;在体内观察其对染毒小鼠的死亡保护作用以及对小鼠心、脑、肺内病毒增殖的影响,从而判定夏桑菊抗RSV作用... 详细信息

目的评价夏桑菊抗呼吸道合胞病毒(RSV)的疗效。方法以病毒唑为对照,通过体外观察病毒致细胞病变效应(CPE)、病毒滴度、抗病毒指数;在体内观察其对染毒小鼠的死亡保护作用以及对小鼠心、脑、肺内病毒增殖的影响,从而判定夏桑菊抗RSV作用。结果夏桑菊能抑制RSV的增殖,其有效浓度为544.59μg/ml,并显示出病毒的感染性滴度随药物浓度的增加而下降;治疗RSV感染鼠结果发现夏桑菊对RSV感染鼠有保护作用,10g/(kg·d)时,RSV感染鼠的存活率为50%,平均存活天数为(10.9±2.3)d,随着药物剂量增加,疗效增强,该药物还能降低组织内病毒滴度,阻止体内病毒复制,抗RSV作用类似于同剂量的病毒唑。结论夏桑菊是一种抗呼吸道合胞病毒的有效药物。

关键词：呼吸道合胞病毒抗病毒活性夏桑菊

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猪脾细胞干扰素在细胞中对疱疹病毒的抑制作用

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武汉大学学报（医学版） 2007年第2期28卷 162-165页

作者：杨光徐芳玲胡远扬蒋文玲刘建军武汉大学医学院病毒学研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071 武汉大学生命科学学院湖北武汉430072 广东省人民医院医学研究中心广东广州510080

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)... 详细信息

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的抑制作用。结果:猪脾细胞干扰素对HeLa细胞的半数毒性浓度(TC50)为535.3 IU/ml,对HSV-1和HSV-2的半数有效浓度(IC50)分别为24.6×103IU/L和25.9×103IU/L,治疗指数(TI)为21.8和20.7;其抗病毒效果与人白细胞干扰素及喷昔洛韦一致。结论:猪脾细胞干扰素具有很好的体外抗疱疹病毒作用。

关键词：猪脾细胞干扰素单纯疱疹病毒 HeLa细胞

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视网膜色素上皮细胞蛋白质组学研究中二维电泳条件的优化

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武汉大学学报（医学版） 2007年第3期28卷 279-281,291页

作者：李颖邢怡桥喻红陈长征侯炜杜磊李猛魏礼清武汉大学人民医院眼科/武汉大学医学院眼科研究所湖北武汉430060 武汉大学医学院生物化学与分子生物学系湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室/病毒学研究所湖北武汉430071

目的:优化并确立一套适合视网膜色素上皮细胞二维电泳的实验方法。方法:提取视网膜色素上皮细胞可溶性蛋白,改进条件以确立对视网膜色素上皮细胞蛋白进行二维电泳的实验流程。结果:该实验条件对视网膜色素上皮细胞蛋白达到了良好的分离... 详细信息

目的:优化并确立一套适合视网膜色素上皮细胞二维电泳的实验方法。方法:提取视网膜色素上皮细胞可溶性蛋白,改进条件以确立对视网膜色素上皮细胞蛋白进行二维电泳的实验流程。结果:该实验条件对视网膜色素上皮细胞蛋白达到了良好的分离效果,并能通过分析找出正常与病变细胞蛋白表达差异。结论:该优化的实验流程能有效分离视网膜色素上皮细胞蛋白质,并为进一步的差异蛋白质组研究奠定基础。

关键词：视网膜色素上皮细胞二维电泳蛋白质组

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向近敏—病毒学工作者的楷模

向近敏—病毒学工作者的楷模

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：杨占秋病毒学国家重点实验室武汉大学医学病毒学研究所

我国著名的病毒学家和分子生态学家、医学病毒学的奠基人之一,向近敏教授1914年1月出生于湖北省汉川县,1954年5月参加工作,1988年5月退休。 2006年12月31日在武昌逝世。

关键词：病毒学向近敏中华预防医学会

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携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备

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武汉大学学报（医学版） 2007年第4期28卷 409-412,425页

作者：何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜武汉大学中南医院麻醉科湖北武汉430071 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rH... 详细信息

目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1。用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度。结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015v.g/L。结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础。

关键词：血红素加氧酶1 腺相关病毒斑点杂交

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人3型腺病毒广州分离株基因组的进化分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第1期27卷 14-17页

作者：周荣苏晓波张其威曾其毅朱冰张楚瑜吴后波吴灶和龚四堂广州医学院附属广州市儿童医院 510120 中国科学院南海海洋研究所中国科学院研究生院武汉大学病毒学国家重点实验室

目的研究人3型腺病毒（human adenovirus type 3，HAdV-3）全基因组序列的基本特征并进行基因组的进化分析。方法取患儿鼻咽分泌物进行病毒分离，用中和试验和PCR进一步鉴定分型；克隆酶切片段并测序，利用软件对腺病毒基因组蛋白进行... 详细信息

目的研究人3型腺病毒（human adenovirus type 3，HAdV-3）全基因组序列的基本特征并进行基因组的进化分析。方法取患儿鼻咽分泌物进行病毒分离，用中和试验和PCR进一步鉴定分型；克隆酶切片段并测序，利用软件对腺病毒基因组蛋白进行进化树分析。结果分离得到2株HAdV-3，基因组全长分别为35273bp和35269bp，2株均含有39个DNA编码序列和2个RNA编码序列。非编码区均保守，存在回文序列和反转重复序列。进化分析表明HAdV-3及其他B组腺病毒与猿腺病毒21型具有更近的进化关系。结论获得广州地区分离的2株HAdV-3，基因组全长35273bp和35269bp；人B组腺病毒与猿腺病毒存在一定的进化关系。

关键词：人3型腺病毒(HAdV-3) 基因组序列分析

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免疫荧光及双抗体夹心ELISA在人狂犬病检测中的应用

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法医学杂志 2007年第6期23卷 411-413页

作者：孙来晶徐葛林王华林吴杰胡志红周亦武华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030 武汉生物制品研究所基因工程室湖北武汉430060 中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的探讨免疫荧光和双抗体夹心ELISA在人狂犬病检测中的应用。方法4例临床诊断狂犬病死亡患者的大脑、小脑、脑干、海马,分别于冰箱和甲醛固定后保存,用上述方法检测。感染狂犬病毒CVS株的鼠脑组织和急性胰腺炎死者脑组织分别作为阳性... 详细信息

目的探讨免疫荧光和双抗体夹心ELISA在人狂犬病检测中的应用。方法4例临床诊断狂犬病死亡患者的大脑、小脑、脑干、海马,分别于冰箱和甲醛固定后保存,用上述方法检测。感染狂犬病毒CVS株的鼠脑组织和急性胰腺炎死者脑组织分别作为阳性和阴性对照。结果-70℃保存的人脑和阳性对照狂犬病毒均为阳性,甲醛固定的人脑和阴性对照均为阴性。结论免疫荧光和双抗体夹心ELISA可用于人狂犬病检测,但脑组织要低温保存,不能用甲醛固定。

关键词：人狂犬病法医学鉴定免疫荧光双抗体夹心ELISA

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HIV-1缺损慢病毒载体的高滴度制备及其介导的高效基因转移

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微生物学报 2007年第6期47卷 1060-1065页

作者：曾令兵张林孟彦 Yuanan Lu 叶林柏中国水产科学研究院长江水产研究所荆州434000 Retrovirology Research Laboratory Pacific Biosciences Research Center University of Hawaii at Manoa Honolulu Hawaii 96822 USA 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

近来,慢病毒载体引起了极大关注,己成为转基因操作中重要的工具。用编码病毒组份的三质粒系统共转染293T包装细胞系,建立了大量制备HIV-1缺损慢病毒载体的方法,病毒载体的度可达到1.1×107IU/mL,离心浓缩可将载体滴度提高100倍以上... 详细信息

近来,慢病毒载体引起了极大关注,己成为转基因操作中重要的工具。用编码病毒组份的三质粒系统共转染293T包装细胞系,建立了大量制备HIV-1缺损慢病毒载体的方法,病毒载体的度可达到1.1×107IU/mL,离心浓缩可将载体滴度提高100倍以上。HIV-1缺损慢病毒载体可以高效转导人淋巴瘤等多种来源的细胞,RT-PCR检测显示外源基因GFP稳定表达达18个月以上,长期传代观测未检出p24抗原蛋白或可复制病毒。

关键词： HIV-1慢病毒载体制备高滴度基因转移效率

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