检索结果-内蒙古大学图书馆

武汉大学学报（医学版） 2005年第3期26卷 333-335页

作者：郭龙华董长垣高婧郭淑芳陈晓刘文惠武汉大学医学院病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:建立一种快速提取血清标本中HBVDNA的方法,即裂解液煮沸法。方法:以碱裂解法和经典的苯酚法为对照,比较3种方法提取的HBVDNA纯度和半巢式PCR后的阳性率。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA进行半巢式PCR的阳性率最高,与两种对照方... 详细信息

目的:建立一种快速提取血清标本中HBVDNA的方法,即裂解液煮沸法。方法:以碱裂解法和经典的苯酚法为对照,比较3种方法提取的HBVDNA纯度和半巢式PCR后的阳性率。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA进行半巢式PCR的阳性率最高,与两种对照方法之间的差异有极显著意义(P<0.01)。结论:裂解液煮沸法是一种快速、简单、高效的提取血清中HBVDNA的方法。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA提取半巢式PCR

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琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒HbC_3

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武汉大学学报（理学版） 2005年第2期51卷 223-226页

作者：刘文培董长垣刘文惠郭淑芳卢莉莉王海琪武汉大学医学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背... 详细信息

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背景清晰, HPLC解析出纯化物仅单一病毒峰.本纯化体系用于提纯BTV HbC3 效果显著,操作简便,具备高通量高活性纯化病毒的潜能,为建立大量纯制高活性蓝舌病毒用于实验室靶向性抗癌研究和生产实践奠定技术平台.

关键词：病毒纯化反向免疫共沉淀蓝舌病毒

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空心莲子草微乳体外抗柯萨奇病毒B3的实验研究

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武汉大学学报（医学版） 2005年第6期26卷 700-703页

作者：王薇陈寒梅杨占秋邱国福胡先明武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室武汉430071 武汉大学药学院武汉430072

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳... 详细信息

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳的稳定性,通过细胞实验评价药物的抗病毒作用。结果:微乳的平均粒径为32 nm,具有很好的稳定性,有明显抑制CVB3的作用,治疗指数27.31。结论:空心莲子草微乳有显著的抗CVB3的作用,微乳化的空心莲子草安全性比未经微乳化的高。

关键词：微乳空心莲子草柯萨奇病毒B3 抗病毒作用

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腺相关病毒rAAV-LacZ转导体外培养的骨髓内皮祖细胞

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武汉大学学报（医学版） 2005年第6期26卷 800-803,F0003页

作者：陈锋谭最董长垣陈晓郭淑芳武汉大学中南医院血管外科武汉430071 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:研究表达β-半乳糖苷酶的重组腺相关病毒(rAAV-LacZ)对于体外培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs)的转导效率.方法:将pAAV-LacZ、pAAV-helper、pAAV-RC用磷酸钙法共转染HEK293细胞,得到rAAV-LacZ;用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提法浓缩... 详细信息

目的:研究表达β-半乳糖苷酶的重组腺相关病毒(rAAV-LacZ)对于体外培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs)的转导效率.方法:将pAAV-LacZ、pAAV-helper、pAAV-RC用磷酸钙法共转染HEK293细胞,得到rAAV-LacZ;用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提法浓缩纯化病毒;用AVSachTM ELISA法rAAV2颗粒滴度测定试剂盒测定rAAV-LacZ的滴度;用不同MOI值(1.0×104 ～1.0×106v·g/cell)的病毒感染EPCs,48 h后,用β-Gal ELISA试剂盒测定β-半乳糖苷酶的表达,原位β-gal染色试剂盒染色,根据蓝染的阳性细胞占细胞总数的比率来估计rAAV-LacZ对于EPCs的转导效率.结果:rAAV-LacZ的滴度为9.6×1012v·g·ml-1;rAAV-LacZ对于EPCs的转导率约为60%,当MOI增加到106v·g/cell时,β-Gal的表达量增至(31.40±2.51)ng·mg· protein-1.结论:rAAV-LacZ能够有效的转导EPCs,这为AAV载体应用于细胞生长因子与EPCs联合治疗缺血性血管疾病提供实验基础.

关键词：腺相关病毒内皮祖细胞 β-半乳糖苷酶

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液相芯片MASA技术用于儿童呼吸道感染病原学研究

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中国病毒学 2005年第6期20卷 586-589页

作者：夏骏邓菲金润铭王琳王丽娜胡志红刘芳王华林中国科学院武汉病毒所病毒学国家重点实验室中国科学院分子病毒学重点实验室无脊椎动物病毒学联合开放实验室湖北武汉430071 华中科技大学同济医学院协和医院儿科湖北武汉430022 武汉大学病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

利用多靶点液相芯片(Multi-Analyte Suspension Array,MASA)技术对引起儿童呼吸道感染(respiratory tract infections,RTI)的病原,包括人类呼吸道合胞病毒A型和B型(Human respiratory syncytial virus A and B, RSVA、RSVB)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)、流行性感冒病毒A型和B型(Influenza A virus and Influenza B virus,INFa,INFb)、副流感病毒1型和3型(Parain- fluenza virus 1 and 3,PIV1,PIV3)、衣原体(***,CPN)和支原体(***,MPN)进行了病原学研究。我们采集并分析了140例患典型呼吸道感染症状儿童的咽拭子,发现在这些标本中至少被前述的一种病原感染的标本有95例,阳性率为67．86％。结果显示这些标本中上述病原感染的情况分别为:RSVB感染的患儿占35．71％、PIV3感染的占4．29％、INFa感染的占28．57％、INFb感染的占2．14％、MPN感染的占3．57％、CPN 感染的占17．86％,被两种以上病原混合感染的患儿有17．14％。这些标本中都没有检测到RSVA、PIV1和SARS- CoV病原的感染。RSVB病原的感染率在3岁以下的患儿中明显高于3岁以上的患儿,而INFa的感染情况则相反;在上呼吸道感染患儿中检测到INFa病原感染的比例明显高于下呼吸道感染,而RSVB病原感染的情况相反。此外,我们发现在2005年3月-5月中造成武汉地区儿童呼吸道感染的主要病原是以RSVB、INFa、CPN为主,而 RSVB感染则又是引起儿童下呼吸道感染和引起低龄儿童呼吸道感染的重要病原。

关键词：液相芯片呼吸道感染病原儿童

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蓝舌病毒HbC_3株和蓝舌病毒10型感染小鼠的毒性试验

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数理医药学杂志 2005年第5期18卷 429-432页

作者：伍景平张蔚英高平陈冬峨董长垣武汉大学医学院病毒学国家重点实验室武汉大学医学院病毒研究所分子病毒与癌研究室武汉430071

为研究蓝舌病毒作为异源溶癌病毒的安全性,选择生理状态良好的小鼠作为受试对象,研究BTV-HbC3、BTV-10接种小鼠的半数致死量,并检测小鼠体内产生抗体的效价及各组织中病毒的含量。实验结果表明,BTV-HbC3、BTV-10不能在小鼠正常组织中增... 详细信息

为研究蓝舌病毒作为异源溶癌病毒的安全性,选择生理状态良好的小鼠作为受试对象,研究BTV-HbC3、BTV-10接种小鼠的半数致死量,并检测小鼠体内产生抗体的效价及各组织中病毒的含量。实验结果表明,BTV-HbC3、BTV-10不能在小鼠正常组织中增殖,并且小鼠体内能产生抗BTV的特异性抗体,抗体在注射病毒后的第17天左右效价最高,两型病毒之间无显著性差异。

关键词：溶癌病毒 BTV-HbC3 BTV-10 毒性试验

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肝癌患者肝组织中2.2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体结构及功能的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第1期16卷 11-15页

作者：林旭闻玉梅万大方钱耕荪顾健人复旦大学医学院卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室

目的　研究肝癌患者肝组织中 2 2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体的结构和功能。方法　PCR扩增 12对肝癌组织及癌旁肝组织中的乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)全基因组。克隆 3 2kb全长HBV基因组及 2 2kb剪接变异体基因组 ,测序... 详细信息

目的　研究肝癌患者肝组织中 2 2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体的结构和功能。方法　PCR扩增 12对肝癌组织及癌旁肝组织中的乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)全基因组。克隆 3 2kb全长HBV基因组及 2 2kb剪接变异体基因组 ,测序并比较它们基因结构的差异。将 2 2kbHBV剪接体基因组与全长基因组共同转染HepG2 细胞 ,分别以HBV全长基因组特异性引物及剪接变异体特异性引物对转染后细胞内HBV核心颗粒进行PCR检测 ,以判定 2 2kbHBV剪接变异体对全长HBV复制功能的影响。结果　 2 2kbHBV基因组剪接变异体见于所有的癌组织及癌旁组织。相同模板量获得的扩增产物进行图象扫描分析 ,发现癌组织中 2 2kbHBV基因组剪接变异体与全长HBV的比值高于癌旁组织。序列分析表明 ,2 2kbHBV剪接变异体保留 5′端包装信号以及与完整的X基因、C及preC基因。细胞转染结果显示 ,加入 2 2kb剪接变异体共转染 ,细胞中 3 2kb全长HBV基因组的复制量可增强 3～ 7倍。结论　肝组织内普遍存在 2 2kbHBV基因组剪接变异体 ,该变异体在癌组织中的相对量高于癌旁组织。 2 2kbHBV基因组剪接变异体可使全长HBV基因组复制增强 ,提示可能与肝癌的发生。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接聚合酶链反应肝癌

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用点突变PCR方法去除人IL－2cDNA表达克隆终止密码及其鉴定

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衡阳医学院学报 1995年第2期23卷 81-84页

作者：陈章国万艳平马大龙宋泉声狄春辉肖波张颖姝衡阳医学院分子病毒学实验室北京医科大学医学免疫学国家重点实验室

在重组人ＩＬ－２（ｈＩＬ－２）大肠杆菌高效表达的基础上，为了构建ｈＩＬ－２与别的目的蛋白的嵌合分子，我们利用点突变ＰＣＲ方法去除ＩＬ－２ｃＤＮＡ表达克隆的终止密码，并构建成ｈＩＬ－２嵌合重组蛋白表达克隆，在大肠杆菌中... 详细信息

在重组人ＩＬ－２（ｈＩＬ－２）大肠杆菌高效表达的基础上，为了构建ｈＩＬ－２与别的目的蛋白的嵌合分子，我们利用点突变ＰＣＲ方法去除ＩＬ－２ｃＤＮＡ表达克隆的终止密码，并构建成ｈＩＬ－２嵌合重组蛋白表达克隆，在大肠杆菌中表达的ＩＬ－２嵌合重组蛋白具有天然ＩＬ－２分子的生物活性。本文结果表明点突变ＰＣＲ去除ｃＤＮＡ终止密码的方法效率高、快速、简便。

关键词： hIL-2 终止密码位定突变 PCR 鉴定

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