检索结果-内蒙古大学图书馆

武汉大学学报（医学版） 2005年第3期26卷 333-335页

作者：郭龙华董长垣高婧郭淑芳陈晓刘文惠武汉大学医学院病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:建立一种快速提取血清标本中HBVDNA的方法,即裂解液煮沸法。方法:以碱裂解法和经典的苯酚法为对照,比较3种方法提取的HBVDNA纯度和半巢式PCR后的阳性率。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA进行半巢式PCR的阳性率最高,与两种对照方... 详细信息

目的:建立一种快速提取血清标本中HBVDNA的方法,即裂解液煮沸法。方法:以碱裂解法和经典的苯酚法为对照,比较3种方法提取的HBVDNA纯度和半巢式PCR后的阳性率。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA进行半巢式PCR的阳性率最高,与两种对照方法之间的差异有极显著意义(P<0.01)。结论:裂解液煮沸法是一种快速、简单、高效的提取血清中HBVDNA的方法。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA提取半巢式PCR

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琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒HbC_3

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武汉大学学报（理学版） 2005年第2期51卷 223-226页

作者：刘文培董长垣刘文惠郭淑芳卢莉莉王海琪武汉大学医学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背... 详细信息

用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背景清晰, HPLC解析出纯化物仅单一病毒峰.本纯化体系用于提纯BTV HbC3 效果显著,操作简便,具备高通量高活性纯化病毒的潜能,为建立大量纯制高活性蓝舌病毒用于实验室靶向性抗癌研究和生产实践奠定技术平台.

关键词：病毒纯化反向免疫共沉淀蓝舌病毒

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乙型肝炎病毒X基因真核表达的载体构建及鉴定

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武汉大学学报（医学版） 2007年第1期28卷 1-3,15页

作者：朱珺刘军董长垣郭淑芳陈杰武汉大学医学院病毒学研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、... 详细信息

目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物序列分析等,鉴定所构建的真核表达载体。结果:以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知HBV X基因大小相同,酶切也得到目的基因片段,测序结果也显示与已知X基因序列相同。结论:成功构建了HBV X基因的真核表达载体,为进一步研究HBVX基因及其产物的功能奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒 X基因真核表达载体 pCDNA3.1

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湖北省武汉地区啮齿动物汉坦病毒S基因的特征分析

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中华流行病学杂志 2012年第8期33卷 828-831页

作者：刘东瀛刘婧李金林陈文罗凡李晴杨占秋武汉大学医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室430071 武汉大学医学病毒学研究所医学微生物学教研室430071 南通大学医学院厦门大学医学院基础医学部

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检... 详细信息

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本，采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列，构建系统发生树并进行基因分型。结果2000--2003年捕获啮齿类动物437只，HV抗原阳性鼠肺标本24份，病毒携带率为5．49％。2009--2011年捕获啮齿类动物173只，HV抗原阳性鼠肺标本7份，病毒携带率为4．05％。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠，4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt588-1147），分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615～1141），分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV，并发现新的基因亚型，SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。

关键词：汉坦病毒啮齿动物基因系统发生分析

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L-ficolin对A型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用

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武汉大学学报（医学版） 2009年第6期30卷 701-704,709,F0002页

作者：潘勤侯炜 Victor Tunje Jeza 章晓联武汉大学医学院免疫学系湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒学研究所湖北武汉430071

目的:探讨L-ficolin分子与A型H1N1流感病毒的相互作用机制。方法:将pcDNA3.1-L-ficolin真核表达质粒以及对照质粒分别肌注小鼠后感染A型H1N1流感病毒,观察感染小鼠的体重变化、肺内病毒血凝滴度,并通过肺指数以及肺组织HE染色判断感染... 详细信息

目的:探讨L-ficolin分子与A型H1N1流感病毒的相互作用机制。方法:将pcDNA3.1-L-ficolin真核表达质粒以及对照质粒分别肌注小鼠后感染A型H1N1流感病毒,观察感染小鼠的体重变化、肺内病毒血凝滴度,并通过肺指数以及肺组织HE染色判断感染小鼠的肺部病变情况,ELISA检测肺组织IFN-γ和IL-4的水平。结果:A型H1N1流感病毒感染后,与对照组相比,注射了pcDNA3.1-L-ficolin质粒的小鼠体重无明显下降,肺内病毒血凝滴度较低,肺组织病变较轻,并且肺内IFN-γ和IL-4的水平增高。结论:pcDNA3.1-L-ficolin对小鼠抵御A型H1N1流感病毒感染有一定的保护作用,该质粒可作为抗流感病毒的新型候选制剂。

关键词：纤维胶凝蛋白 A型H1N1流感病毒感染

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新型干扰素——IFN-λ抗HIV-1感染

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第9期29卷 827-831页

作者：赵颖岚孙黎王旭侯炜霍文哲武汉大学基础医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室 430071 美国宾夕法尼亚大学医学院费城儿童医院免疫系

目的研究干扰素λ（IFN-λ）是否对HIV-1感染人巨噬细胞有抑制作用，并对可能介导IFN-λHIV-1作用的受体和辅助受体表达水平进行研究，初步探讨其抗HIV-1感染的机制。方法HIV-1毒株感染人巨噬细胞前用IFN-λ理细胞24h，感染后第4天、第... 详细信息

目的研究干扰素λ（IFN-λ）是否对HIV-1感染人巨噬细胞有抑制作用，并对可能介导IFN-λHIV-1作用的受体和辅助受体表达水平进行研究，初步探讨其抗HIV-1感染的机制。方法HIV-1毒株感染人巨噬细胞前用IFN-λ理细胞24h，感染后第4天、第8天以及第12天分别检测感染细胞上清中HIV-1逆转录酶（RT）活性和p24蛋白水平，并用实时定量PCR检测细胞上IFN-λ体、CD4、CCR5、CXCR4的表达。结果IFN-λHIV-1感染人巨噬细胞具有明显抑制作用，且此作用与乓剂量及作用时间呈正相关。但IFN-λCD4、CCR5、CXCR4的表达影响无统计学意义。结论IFN-入能有效抑制HIV-1感染人臣噬细胞，并证实这一作用是通过其受体发挥功能的。但IFN-λ介导的抗HIV-1作用不是通过CD4、CCR5、CXCR4起作用而是存在有其他的抗病毒机制。

关键词：人免疫缺陷病毒干扰素抗病毒

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空心莲子草微乳体外抗柯萨奇病毒B3的实验研究

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武汉大学学报（医学版） 2005年第6期26卷 700-703页

作者：王薇陈寒梅杨占秋邱国福胡先明武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室武汉430071 武汉大学药学院武汉430072

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳... 详细信息

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳的稳定性,通过细胞实验评价药物的抗病毒作用。结果:微乳的平均粒径为32 nm,具有很好的稳定性,有明显抑制CVB3的作用,治疗指数27.31。结论:空心莲子草微乳有显著的抗CVB3的作用,微乳化的空心莲子草安全性比未经微乳化的高。

关键词：微乳空心莲子草柯萨奇病毒B3 抗病毒作用

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腺相关病毒介导的血管内皮生长因子基因与内皮祖细胞联合治疗肢体缺血

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中华实验外科杂志 2007年第2期24卷 156-158页

作者：陈锋谭最董长垣陈晓郭淑芳武汉大学中南医院血管外科 430071 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室

目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染的兔骨髓内皮祖细胞（EPCs）自体移植对于移植细胞存活率和缺血肢体血管再生的影响。方法构建、制备携带hVEGF165基因或β-半乳糖苷酶（β-gal）基因的AAV载... 详细信息

目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染的兔骨髓内皮祖细胞（EPCs）自体移植对于移植细胞存活率和缺血肢体血管再生的影响。方法构建、制备携带hVEGF165基因或β-半乳糖苷酶（β-gal）基因的AAV载体AAV-hVEGF165和AAV-LacZ；用AAV-hVEGF165和AAV-LacZ分别转染体外培养的EPCs，得到AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC，用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术检测外源基因的表达。分别用AAV／VEGF-EPC、AAV／LacZ-EPC和PBS自体移植于兔右下肢缺血的肌组织，28d后行双侧肢体血流和免疫组织化学检测。结果AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC内可检测到外源基因的表达。AAV／VEGF-EPC、AAV／LacZ-EPC和PBS组患／健侧血流比值、毛细血管密度分别为0．73±0．21、0.64±0．13、0．45±0．10；（962±291）、（557±132）、（361±69）／mm^2。AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC组移植成活的EPCs密度分别为（330±81）／mm^2和（204±55）／mm^2。结论AAV能够高效将外源基因转入EPCs，对其进行基因修饰。自体移植从V-hVEGF165酤转染的EPCs可提高其移植存活率和增强其促进缺血肢体血管再生能力。

关键词：腺相关病毒内皮细胞血管内皮生长因子移植缺血

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BRCA1及BRCA1△11b在P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中的选择性剪接

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武汉大学学报（医学版） 2012年第2期33卷 158-161页

作者：彭敏张力徐斌李娜伍欣星宋启斌武汉大学人民医院肿瘤科湖北武汉430060 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室分子病毒室湖北武汉430071

目的:检测BRCA1及其剪接异构体BRCA1△11b在P19及人胚胎干细胞分化过程中的表达。方法:全反式维甲酸诱导P19细胞的分化,提取不同时间点RNA,运用RT-PCR,Real-time PCR分别检测P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中BRCA1及其剪接异构体BRCA1△... 详细信息

目的:检测BRCA1及其剪接异构体BRCA1△11b在P19及人胚胎干细胞分化过程中的表达。方法:全反式维甲酸诱导P19细胞的分化,提取不同时间点RNA,运用RT-PCR,Real-time PCR分别检测P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中BRCA1及其剪接异构体BRCA1△11b的表达。结果:未分化P19细胞在全反式维甲酸诱导下聚集形成拟胚体。在P19细胞拟胚体形成过程中,BRCA1△11b表达水平迅速降低,而BRCA1的表达则随P19细胞分化发生相反的变化,BRCA1表达水平迅速升高。在人胚胎细胞分化过程中,BRCA1基因同样发生选择性剪接的转换,由未分化时BRCA1△11b为主要剪接产物转换为拟胚体形成时BRCA1表达占优势。结论:BRCA1及其选择性剪接异构体BRCA1△11b在P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中均发生选择性剪接的转换,BRCA1基因的选择性剪接可能在胚胎干细胞的分化过程中发挥重要作用。

关键词：乳腺癌 BRCA1 选择性剪接干细胞分化

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湖北地区汉滩病毒与普马拉病毒及多布拉伐病毒的血清学交叉反应研究

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免疫学杂志 2008年第4期24卷 438-441页

作者：李晴罗凡杨占秋厦门大学医学院基础医学部福建厦门361005 武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室武汉430071

目的研究湖北地区汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)与普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多布拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)血清学交叉反应。方法以酵母菌表达的PUUV、DOBV、HTNV重组核衣壳蛋白(recombinant nucleocapsid protein,rNP)为包被抗原,ELISA法定性、定量分析湖北地区HTN型急性/恢复期血清中IgA、IgG、IgM抗体,比较疾病早晚期血清学交叉反应变化。结果DOB-rNP与HTN型血清中IgA、IgG、IgM抗体交叉反应性较高,PUU-rNp对HTN型血清交叉反应很低;IgA、IgG抗体交叉反应在恢复期血清中均增高,且IgA抗体交叉反应更多更强。结论湖北地区HTN型血清与DOBV存在广泛交叉反应,与PUUV交叉反应少。各交叉反应在恢复期增高对汉滩病毒血清学研究具重要意义。

关键词：汉滩病毒普马拉病毒多布拉伐病毒 ELISA 血清学交叉反应

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