检索结果-内蒙古大学图书馆

癌症 2002年第6期21卷 640-643页

作者：赵旻伍欣星武汉大学医学院病毒所分子生物学教研室湖北武汉430071

背景与目的:人乳头瘤病毒的感染以及细胞内的遗传性改变是宫颈癌的主要病因。本研究拟分析人宫颈癌组织部分染色体位点遗传不稳定性,以为宫颈癌相关基因的定位以及筛选宫颈癌诊断分子标志提供依据。方法:应用3、6、11和18号染色体上的8... 详细信息

背景与目的:人乳头瘤病毒的感染以及细胞内的遗传性改变是宫颈癌的主要病因。本研究拟分析人宫颈癌组织部分染色体位点遗传不稳定性,以为宫颈癌相关基因的定位以及筛选宫颈癌诊断分子标志提供依据。方法:应用3、6、11和18号染色体上的8个微卫星多态性位点,对50例原发性宫颈癌活检标本进行杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)和微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,MI)分析。结果:一个或多个位点发生LOH的样本占66%(33/50)。D18s474(18q21)位点的LOH率最高,达40.5%,其它位点的LOH频率为:D3s1478(3p21.3-21.2,31.7%)、D3s1766(18q21.32,15.0%)、D6s260(6p23,23.3%)、D11s925(11q22-23,17.9%)、D18s35(18q21.1-21.31,8.7%)、D18s64(18q21.32,16.7%)、D18s68(18q22.1,27.3%)。MI发生频率很低,仅为8%(4/50)。结论:宫颈癌染色体特定区域存在不同频率的LOH,而MI是宫颈癌中的低频事件。染色体3p和18q上的LOH高频区可能存在潜在的宫颈癌相关抑癌基因。

关键词：杂合性丢失微卫星不稳定染色体宫颈癌

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宫颈癌细胞中HMAT1基因的功能预测及其干扰小RNA的筛选

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肿瘤 2005年第2期25卷 113-117页

作者：欧璇赵旻左泽华李辉魏芸伍欣星武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室武汉430071

目的　预测宫颈癌细胞中人类与鼠同源乳腺转化基因(HMATI)的功能及筛选出能有效沉默该基因的干扰小RNA。方法　采用细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片对原发性宫颈癌标本进行筛选,通过生物信息学分析HMAT1 基因,针对HMAT1基因设计了三条... 详细信息

目的　预测宫颈癌细胞中人类与鼠同源乳腺转化基因(HMATI)的功能及筛选出能有效沉默该基因的干扰小RNA。方法　采用细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片对原发性宫颈癌标本进行筛选,通过生物信息学分析HMAT1 基因,针对HMAT1基因设计了三条特异性干扰小RNA,分别与pRNAU6.1 Hygro重组后,与含有该基因的重组体瞬时共转染B16F0细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测对HMAT1基因的干扰效果。结果　细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片筛选出表达量明显上调的基因共四条。对其中上调明显的HMAT1基因,通过生物信息学预测其为一个调节细胞生长的看家基因,其编码的蛋白质为一个Ⅰ型跨膜蛋白,且其酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点可能与HMAT1 蛋白功能活化有关。半定量检测结果表明其中第一条特异性干扰小RNA有显著性抑制效果(P<0.05)。结论　初步预测HMAT1 基因很可能是与宫颈癌相关的癌基因,其编码的蛋白质可能参与细胞的信号转导,设计出针对该基因的干扰小RNA可以有效沉默HMAT1基因。

关键词：宫颈肿瘤寡核苷类排列序列分析 HMATI基因 RNA干扰

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宫颈癌患者基因组遗传不稳定性分析

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肿瘤 2003年第3期23卷 190-193页

作者：伍欣星赵旻李晖邱小萍谭云戴天力武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室武汉430071

目的　研究中国宫颈癌高发区宫颈癌患者基因组遗传不稳定性改变 ,为寻找宫颈癌相关内源因子提供依据。方法　从GenBank中选取 8对微卫星DNA引物 ,采用PCR 变性PAGE 银染方法检测 5 0例宫颈癌 (来自高发区 )活检组织及其对照 (同病例血... 详细信息

目的　研究中国宫颈癌高发区宫颈癌患者基因组遗传不稳定性改变 ,为寻找宫颈癌相关内源因子提供依据。方法　从GenBank中选取 8对微卫星DNA引物 ,采用PCR 变性PAGE 银染方法检测 5 0例宫颈癌 (来自高发区 )活检组织及其对照 (同病例血液 )样品的杂合性丢失 (LOH)和微卫星不稳定 (MI)。结果　LOH总检出率为 6 6 % (33/5 0 ) ,其中 ,D18S4 74 (染色体18q2 1)LOH达 4 0 .5 % ;染色体 3p2 1.2 3p2 1.3中微卫星位点D3S14 78,LOH达 31.7% ;并且在原位癌与浸润癌中 ,LOH分布也有一定差异。MI在宫颈癌患者基因组中仅存在少数微卫星位点 ,总的发生率较低 ,为 8% (4/5 0 )。结论　除高危型人乳头瘤病毒 (HPVhr)感染外 ,细胞内源基因的改变在宫颈癌发生发展过程中也起着重要作用。高频LOH位点 18q2 1D18S4 74、3p2 1.2 3p2 1.3D3S14 78可能存在潜在的宫颈癌抑癌基因。

关键词：宫颈癌基因组遗传不稳定性微卫星不稳定杂合性丢失

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人宫颈癌组织染色体部分位点杂合性丢失

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基础医学与临床 2002年第6期22卷 512-516页

作者：赵旻伍欣星武汉大学医学院病毒所分子生物学教研室武汉430071

了解人宫颈癌组织中 3、6、11和 18号染色体部分位点杂合性丢失的分布状况 ,为宫颈癌相关基因的定位以及临床诊断分子标志的筛选提供依据。采用宫颈癌基因组中 3、6、11和 18号染色体上的 8个微卫星标志 ,对源自宫颈癌高发区的宫颈癌活... 详细信息

了解人宫颈癌组织中 3、6、11和 18号染色体部分位点杂合性丢失的分布状况 ,为宫颈癌相关基因的定位以及临床诊断分子标志的筛选提供依据。采用宫颈癌基因组中 3、6、11和 18号染色体上的 8个微卫星标志 ,对源自宫颈癌高发区的宫颈癌活检标本 ,以PCR 变性电泳银染的方法检测上述位点的杂合性丢失。其中在染色体 3p14、18q2 1等位点存在较高频率的杂合性丢失。结果表明杂合性丢失是宫颈癌癌变过程中常见的遗传性改变 ,宫颈癌中存在杂合性丢失的高频区 ,提示相应位点存在潜在的抑癌基因。

关键词：宫颈癌微卫星DNA 杂合性丢失

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人乳头瘤病毒16型E7抗原表达模型的构建

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武汉大学学报（医学版） 2004年第1期25卷 7-11页

作者：李辉伍欣星武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室武汉430071

目的 :构建pEGFP HPV1 6E7表达载体 ,并观察其在肝癌细胞中的瞬时和稳定表达及小鼠肝癌细胞皮下成瘤情况 ,为建立表达HPV1 6E7的实体瘤动物模型奠定基础。方法 :应用基因重组技术 ,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与HPV1 6E7的融合表达载体 ... 详细信息

目的 :构建pEGFP HPV1 6E7表达载体 ,并观察其在肝癌细胞中的瞬时和稳定表达及小鼠肝癌细胞皮下成瘤情况 ,为建立表达HPV1 6E7的实体瘤动物模型奠定基础。方法 :应用基因重组技术 ,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与HPV1 6E7的融合表达载体 ,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析 ,用脂质体转染技术将其转入小鼠肝癌细胞 ,2 4h后RT PCR检测HPV1 6E7mRNA的生成 ,荧光显微镜观察EGFP HPV1 6E7融合蛋白的表达 ,将转染细胞接种小鼠皮下 ,观察成瘤及成瘤后融合蛋白的表达情况。结果 :酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确 ,在转染的小鼠肝癌细胞中检测到HPV1 6E7mRNA的生成和绿色荧光蛋白的表达 ,接种的转染细胞在小鼠皮下可成瘤且可检测到HPV1 6E7mRNA的生成。结论 :pEGFP HPV1 6E7表达载体便于观察转染细胞中EGFP HPV1 6E7融合蛋白的表达情况 ,小鼠肝癌细胞接种小鼠皮下可成瘤 ,成瘤后可检测到HPV1

关键词：人乳头瘤病毒表达载体基因转染 HPV16E7 动物模型基因重组抗原

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人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化

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武汉大学学报（医学版） 2006年第4期27卷 415-420,432页

作者：许蓓妮刘金花彭敏解庭波朱丽琴伍欣星吴承龙武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室武汉430071 贵阳医学院微生物学教研室贵阳550004

目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内... 详细信息

目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌***21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。

关键词： HPV16 E7基因重组原核表达优化

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pEGFP-HPV16 E7重组融合蛋白质粒的构建及其表达

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中国病毒学 2003年第4期18卷 344-347页

作者：左泽华李辉伍欣星武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室湖北武汉430071

应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)的重组融合表达质粒,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析后,用基因转染技术将其导入小鼠肝癌细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。酶切鉴定和PCR分析证实重... 详细信息

应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)的重组融合表达质粒,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析后,用基因转染技术将其导入小鼠肝癌细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入目的基因片段的大小、方向和插入位点均正确,在转染的小鼠肝癌细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。构建的pEGFP-HPV16E7融合表达质粒能直观地反映转染细胞中EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达。由于转化率与表达率融为一体,故有利于对转染细胞的筛选,缩短转染细胞在体外的筛选的时间适用于对HPV16E7分子生物学特性、致瘤机理及APC提呈等的研究。为建立表达HPV16E7的实体瘤动物模型奠定了基础。

关键词：人乳头瘤病毒表达载体基因转染真核表达

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不同地区HPV16 E7基因的克隆及序列差异分析

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中国病毒学 2002年第3期17卷 211-215页

作者：熊金虎伍欣星谭云武汉大学医学院病毒学研究所分子生物学研究室湖北武汉430071

采用PCR扩增、pGEM T载体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例武汉地区及两例五峰县高发区宫颈癌患者体内HPV16型的E7基因编码区进行序列分析并与野生型 (德国标准株 )及已发表的HPV16湖北株 (HPVHB)进行了比较。结果发现武汉地区HPV16型E... 详细信息

采用PCR扩增、pGEM T载体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例武汉地区及两例五峰县高发区宫颈癌患者体内HPV16型的E7基因编码区进行序列分析并与野生型 (德国标准株 )及已发表的HPV16湖北株 (HPVHB)进行了比较。结果发现武汉地区HPV16型E7基因仅第 5 4位出现一个同义突变 ,而高发区HPV16型E7基因存在差异 ,第 77位氨基酸由精氨酸 (Arg)变为半胱氨酸 (Cys) ,第 96位由谷氨酰氨酸 (Gln)变为精氨酸 (Arg) ,E7蛋白的二级结构及亲、疏水性也相应改变。

关键词： HPV16 E7基因克隆序列差异分析人乳头瘤病毒16型序列比较分析点突变

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小鼠2.5s神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

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中华劳动卫生职业病杂志 2006年第3期24卷 154-156页

作者：孙凌聪夏腊菊孟祥平刘莉高兴华杨国成武汉生物制品研究所病毒疫苗研究室 430060 武汉大学医学院生物化学与分子生物学系

目的建立神经生长因子(NGF)对2,5己二酮(HD)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂... 详细信息

目的建立神经生长因子(NGF)对2,5己二酮(HD)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白表达,比较各组间的差异。结果随NGF浓度增加,细胞存活率升高,差异有统计学意义(P<0.01);DNA断裂减少;细胞凋亡率减小(P<0.01);p53表达量下降(P<0.05)。结论NGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护PC12细胞免于2,5HD诱导的损伤以及具有抗凋亡作用。

关键词：神经生长因子 PC12细胞凋亡 2,5-己二酮

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PI法和Annexin V/PI法检测蓝舌病毒HbC_3诱导人肝癌细胞的凋亡

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中国病毒学 2006年第3期21卷 253-256页

作者：汪艳刘春新易有荣崔冶建朱珺董长垣武汉大学医学结构生物学研究中心湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒研究所分子病毒与癌研究室湖北武汉430071

利用流式细胞仪比较PI法和AnnexinV/PI法检测不同时间人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC3的凋亡率分析。结果:PI法在24h、36h、48h的凋亡率分别为10.8±3.05、21.7±6.28、28.3±10.6;AnnexinV/PI法的凋亡率分别为20.42±3.70... 详细信息

利用流式细胞仪比较PI法和AnnexinV/PI法检测不同时间人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC3的凋亡率分析。结果:PI法在24h、36h、48h的凋亡率分别为10.8±3.05、21.7±6.28、28.3±10.6;AnnexinV/PI法的凋亡率分别为20.42±3.70、49.3±8.11、79.6±11.5。二种方法及不同时间感染病毒细胞的凋亡率之间有显著差异(P<0.01)。证明了AnnexinV/PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞,BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞凋亡是致肿瘤细胞病变、死亡的重要表现形式之一。

关键词： Propidium iodide(PI) Annexin V/PI 凋亡流式细胞仪

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