检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生化药物杂志 2017年第1期37卷 6-12页

作者：王昱斌卞文秀刘敏章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系

目的探讨丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）核心抗原core基因上的G4-四链体（core G4）RNA结构对机体特异性免疫应答的影响。方法圆二色谱（circular dichroism,CD）检测寡核苷酸链RNA G4（命名为G4R）和突变体G4M（命名为G4RM,... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）核心抗原core基因上的G4-四链体（core G4）RNA结构对机体特异性免疫应答的影响。方法圆二色谱（circular dichroism,CD）检测寡核苷酸链RNA G4（命名为G4R）和突变体G4M（命名为G4RM,在不改变氨基酸密码子的情况下）的G-四链体空间结构;在不改变密码子的情况下采用PCR定点突变的方法把HCV野生型G4-core（DNA）突变为G4Mcore,然后将G4-core和G4M-core基因构建至真核表达质粒pc DNA3.1上（分别称为p G4和pG4M）,免疫印迹（Western blot）分析core基因上G4结构突变后Core蛋白的表达水平。将p G4及pG4M质粒分别用基因导入仪免疫小鼠,检测免疫后小鼠的细胞免疫以及体液免疫水平。结果 CD结果显示寡核苷酸链RNA G4M相比野生型RNA G4结构发生改变,熔解曲线表明G4RM熔解温度低于野生型RNA G4R。Western blot显示在细胞水平及动物水平,pG4M比p G4的Core蛋白表达水平更高（P〈0.05）。动物免疫实验结果表明pG4M免疫后小鼠总IgG及IFN-γ的释放水平增高（P〈0.05）。其中,pG4M免疫组小鼠的IgG水平是p G4组的1.61倍。酶联免疫斑点（Enzyme-linked immunospot,ELISpot）实验中,pG4M免疫后小鼠脾脏细胞IFN-γ的释放水平是p G4的1.39倍。流式实验显示pG4M免疫后小鼠脾脏CD4＋T细胞中IFN-γ产生水平是p G4的1.79倍。结论本研究首次报道HCV核心抗原core上G-四链体可能抑制其蛋白翻译和免疫应答,core上G-四链体碱基突变可增强翻译水平,并增强其Th1型的细胞免疫应答。核心抗原G-四链体碱基突变可增强HCV疫苗的免疫原性,为研制增强免疫原性的HCV疫苗提供了一种新的策略。

关键词：核心抗原Core G-四链体点突变免疫应答细胞免疫

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22990例儿童急性呼吸道感染的病原学及流行病学调查

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武汉大学学报（医学版） 2016年第6期37卷 1018-1022,1030页

作者：姚婷艾洪武余星孙红伍仕敏章晓联武汉市妇女儿童医疗保健中心检验科湖北武汉430016 武汉市临床检验中心/华中科技大学同济医学院附属普爱医院湖北武汉430033 武汉大学基础医学院免疫学系/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的:对2015年本院收治的22 990例儿童急性呼吸道感染患儿进行9种病原体的病原学及流行病学调查分析。方法:采用间接免疫荧光法检测血清肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(INFB)、腺病毒(ADV)、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型... 详细信息

目的:对2015年本院收治的22 990例儿童急性呼吸道感染患儿进行9种病原体的病原学及流行病学调查分析。方法:采用间接免疫荧光法检测血清肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(INFB)、腺病毒(ADV)、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)、肺炎衣原体(CP)、肺炎军团菌血清Ⅰ型(LP)以及Q热立克次体(RB)等9种呼吸道病原体的IgM抗体。结果:2015年武汉地区9种呼吸道病原体总检出率为36.95%,其检出率由高到低依次为:MP 20.34%、INFB 6.84%、ADV 5.37%、RSV 1.87%、PIV 1.55%、LP 0.55%、INFA0.29%、CP 0.07%、RB 0.07%;两种以上病原体混合感染率为20.94%,其中MP和INFB混合感染最为常见,构成比为30.97%。MP在2015年全年都维持较高的流行水平,在2月、6月和9月出现三次流行高峰;IFNB在冬春出现两个发病高峰期,其中1月份发病率最高,10月份次之;ADV在春季出现了流行高峰,然后呈逐渐下降趋势,其中3月份发病率最高,4月份次之。急性呼吸道感染患儿年龄集中于1岁以内儿童,并且随着年龄的增加发病率逐渐降低;男女患儿人数之比为2.02∶1,婴幼儿人数明显多于幼托儿童和学生。结论:2015年武汉地区儿童急性呼吸道感染病原体以MP最为多见,其次为INFB和ADV,并且混合感染情况严重,不同病原体存在季节流行的趋势,了解本地区急性呼吸道感染患儿的病原学和流行病学特征对今后呼吸道疾病的防治有重要意义。

关键词：急性呼吸道感染病原学流行病学儿童

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结核分枝杆菌对巨噬细胞岩藻糖转移酶家族基因表达的影响

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中国生化药物杂志 2016年第3期36卷 19-22页

作者：胡锋潘勤章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系湖北武汉430071

目的研究结核分枝杆菌标准株H37Rv(inactivated H37Rv,i H37Rv)刺激巨噬细胞RAW264.7细胞后,对岩藻糖转移酶家族中的10个糖基转移酶表达的影响。方法用热灭活的i H37Rv刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,用qRT-PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction)检测i H37Rv分别刺激RAW264.7细胞0 h、4 h、8 h、12 h后对巨噬细胞中10个岩藻糖基转移酶的mRNA表达水平的影响。凝集素染色和流式细胞术检测岩藻糖转移酶对应的糖苷的表达变化。结果 i H37Rv分别刺激RAW264.7细胞0 h、4 h、8 h、12 h后,岩藻糖转移酶1(FUT1)基因的表达随着刺激时间的延长而逐步下调。凝集素染色和流式细胞术检测显示特异性结合岩藻糖转移酶-FUT1对应糖苷的小扁豆凝集素(lens culinaris agglutinin,LCA)在i H37Rv刺激巨噬细胞12 h后结合巨噬细胞上对应的糖苷的能力下降了4.6%。结论 FUT1糖基转移酶在i H37Rv刺激巨噬细胞后发生下调,其有可能作为结核分枝杆菌感染的诊断分子标志和治疗新靶点。

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞糖基转移酶

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全细菌SELEX技术筛选鸟分枝杆菌的适配子

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中国病原生物学杂志 2015年第2期10卷 113-117,179页

作者：王培培刘焰罗凤玲章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室湖北武汉430071

目的应用指数级富集配体系统进化技术(system evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选与鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)特异性结合的ssDNA适配子,建立酶联寡聚核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)检测鸟分枝杆菌的方法。方法设计并合成随机序列ssDNA文库,以鸟分枝杆菌为靶标,利用SELEX技术筛选特异性的ssDNA适配子,将亲和力最高的适配子进行克隆、测序;用DNAMAN软件分析适配子的二级结构,并检测其特异性。结果单适配子N1与鸟分枝杆菌结合的Kd为(246±21.87)nmol/L,即亲和力最高,而对结核分枝杆菌等其他分枝杆菌亲和力较低。结论应用SELEX筛选的鸟分枝杆菌ssDNA适配子N1具有较高亲和力和特异性,可作为鸟分枝杆菌检测及艾滋病合并鸟分枝杆菌感染的特异性诊断制剂。

关键词：鸟分枝杆菌 SELEX 适配子

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应用CS-SELEX技术筛选特异性结合丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B适配子的研究

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中国病原生物学杂志 2015年第2期10卷 97-101页

作者：曾德钰潘勤章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室湖北武汉430071

目的应用CS-SELEX(cell surface-system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)非结构蛋白4B(non protein 4B,NS4B)特异性结合的ssDNA适配子,建立检测HCV NS4B的酶联寡聚核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)方法。方法构建pDisplay-NS4B质粒,并转染至HepG2细胞中,在G418存在情况下连续筛选1个月,得到单克隆细胞群,经过Western blot以及流式细胞术验证,获得稳定表达NS4B的HepG2细胞。设计并合成随机序列ssDNA文库,以稳定表达NS4B的细胞为正向筛选靶细胞,以HepG2细胞为反筛细胞进行CS-SELEX技术筛选。每轮筛选获得的具有结合NS4B能力的ssDNA适配子,通过PCR扩增得到富集,随后通过不对称PCR获得下一轮筛选的ssDNA文库。经过16轮筛选,将亲和力最高的筛选产物克隆并测序,用ELONA方法检测适配子的亲和力。结果成功构建表面展示表达重组质粒pDisplay-NS4B。分别将该质粒转入HepG2细胞,通过G418筛选获得稳定表达HCV-NS4B的细胞系NS4B-HepG2。对CS-SELEX筛选的各轮适配子库进行亲和力测定,其中第14轮库适配子与NS4B的亲合力最高。分别对第14轮库中的单个适配子进行亲和力测定,以适配子ZN1和ZN5与NS4B的亲合力最高。ZN1和ZN5不仅能结合展示在细胞表面的NS4B蛋白,还能结合丙型肝炎病毒感染细胞(HCV cell culture,HCVcc)中的HCV-NS4B蛋白。结论适配子ZN1和ZN5对NS4B有高亲和力,这对研究HCV-NS4B致癌机制、HCV诊断以及治疗方面有潜在的应用价值。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白-NS4B CS-SELEX 适配子

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丙型肝炎病毒感染人肝细胞系对多种唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶表达的影响

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中国生化药物杂志 2015年第10期35卷 5-10页

作者：刘晓宇章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系湖北武汉430071

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人肝癌细胞系Huh7.5.1细胞后与肿瘤相关的唾液酸转移酶家族和半乳糖基转移酶家族的35个糖基转移酶的表达变化。方法利用HCV感染的Huh7.5.1肝细胞模型,采用Western blot检测HCV感染后HC... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人肝癌细胞系Huh7.5.1细胞后与肿瘤相关的唾液酸转移酶家族和半乳糖基转移酶家族的35个糖基转移酶的表达变化。方法利用HCV感染的Huh7.5.1肝细胞模型,采用Western blot检测HCV感染后HCV非结构蛋白NS3的表达,定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HCV感染后HCV-RNA的表达及HCV感染对Huh7.5.1细胞中35个糖基转移酶mRNA表达水平的影响。凝集素染色实验测定HCV感染对Huh7.5.1细胞中糖苷表达水平的影响。结果在HCV感染后的Huh7.5.1细胞中,发现4个唾液酸转移酶(ST3Gal III、ST6Gal NAC III、ST8Sia III和ST8Sia IV)和5个半乳糖基转移酶(B3GALT 1、B3GALT 2、B3GALT 3、B3GALT 4和B4GALNT 2)的mRNA水平明显升高11~45倍,其中变化最大的是B3GALT 1,上升45倍,其次是ST8Sia III和ST8Sia IV,分别上升37倍和39倍。进一步采用凝集素染色实验验证,发现结合末端唾液酸糖苷Neu5Acα6Gal的接骨木凝集素(elderberry lectin,EBL)在HCV感染后升高1.97倍,结合末端半乳糖苷Galβ1,3Gal NAc的尾穗苋凝集素(amaranthus caudatus agglutinin,ACA)和结合Galβ1,4Gal NAc的鸡冠刺桐凝集素(erythrina cristagalli agglutinin,ECA)分别升高3倍和4.3倍。结论 HCV感染导致人肝细胞中特定唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶及其相应糖苷表达水平呈现明显上升。这些结果对研究HCV感染的治疗靶点和诊断标志物具有一定参考价值。

关键词：丙型肝炎病毒唾液酸转移酶半乳糖基转移酶 HCV感染糖苷标志物

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结核菌新型分子标识ManLAM脂糖及其应用基础研究

结核菌新型分子标识ManLAM脂糖及其应用基础研究

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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：章晓联湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室国家病毒学重点实验室武汉大学基础医学院免疫学系

＜正＞结核病目前仍然严重威胁人类的健康,控制疫情的蔓延已成为当务之急。甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖（mannose-capped lipoarabinomanan,ManLAM）是结核分枝杆菌表面主要的糖腊成份。我们的研究发现不同分枝杆菌ManLAM具有不同

关键词：

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天然免疫分子ficolin结合病原微生物表面糖复合物并介导抗感染免疫功能

天然免疫分子ficolin结合病原微生物表面糖复合物并介导抗感染免...

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第九届全国免疫学学术大会

作者：章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室

背景:纤维胶凝蛋白(ficolins)是一种新近发现的人体血清中的补体凝集素,然而其在病毒方面的研究却少见报道。目的与结果:我们的研究发现,L-ficolin能在感染早期抑制丙型肝炎病毒HCVcc(cell-cultured produced HCV)和HCVpp(HCV-pseudotyp... 详细信息

背景:纤维胶凝蛋白(ficolins)是一种新近发现的人体血清中的补体凝集素,然而其在病毒方面的研究却少见报道。目的与结果:我们的研究发现,L-ficolin能在感染早期抑制丙型肝炎病毒HCVcc(cell-cultured produced HCV)和HCVpp(HCV-pseudotyped particles)感染,抑制HCVcc与LDLR、SR-B1受体结合,从而阻碍病毒粘附、进入靶细胞。HCV病毒颗粒中含有丰富的ApoE3。我们发现ApoE3能增加病毒的感染性,逆转L-ficolin的抗病毒作用,恢复HCV与其靶细胞表面受体的结合。结论:本研究首次发现补体凝集素分子L-ficolin在抗丙肝病毒感染中的作用,并且证实L-ficolin能与HCV包膜糖蛋白上的N-糖苷结合,抑制病毒与细胞受体LDLR和SR-B1的结合,从而抑制病毒侵入肝细胞,中和病毒的感染。ApoE3这种载脂蛋白除了能在病毒组装、释放和抗感染中发挥作用外,我们发现ApoE3能竞争性抑制HCV与L-ficolin的结合,抑制L-ficolin的抗病毒作用,介导慢性丙肝感染中病毒的免疫逃逸。

关键词：天然免疫 ficolin N-糖苷抗感染免疫

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天然免疫分子ficolin结合病原微生物表面糖复合物并介导抗感染免疫功能

天然免疫分子ficolin结合病原微生物表面糖复合物并介导抗感染免...

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室

背景:纤维胶凝蛋白(ficolins)是一种新近发现的人体血清中的补体凝集素,然而其在病毒方面的研究却少见报道.目的与结果:我们的研究发现,L-ficolin能在感染早期抑制丙型肝炎病毒HCVcc (cell-cultured produced HCV)和HCVpp (HCV-pseudoty... 详细信息

背景:纤维胶凝蛋白(ficolins)是一种新近发现的人体血清中的补体凝集素,然而其在病毒方面的研究却少见报道.目的与结果:我们的研究发现,L-ficolin能在感染早期抑制丙型肝炎病毒HCVcc (cell-cultured produced HCV)和HCVpp (HCV-pseudotyped particles)感染,抑制HCVcc与LDLR、SR-B1受体结合,从而阻碍病毒粘附、进入靶细胞.HCV病毒颗粒中含有丰富的ApoE3.我们发现ApoE3能增加病毒的感染性,逆转L-ficolin 的抗病毒作用,恢复HCV与其靶细胞表面受体的结合.

关键词：天然免疫 ficolin N-糖苷抗感染免疫

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丙型肝炎病毒的包膜糖蛋白糖基化突变体及其中和性单克隆抗体作为治疗性HCV候选疫苗

丙型肝炎病毒的包膜糖蛋白糖基化突变体及其中和性单克隆抗体作为...

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第九届全国免疫学学术大会

作者：章晓联任玉珊闵远琴林苗武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室

背景:丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是导致肝细胞疾病的重要病毒,目前尚无有效疫苗。HCV包膜糖蛋白E1-E2的免疫原性弱,E1E2上含有丰富的N-糖基化修饰的糖链,研究显示糖链可能遮盖病毒抗原表位,从而抑制和影响病毒的免疫原性,导... 详细信息

背景:丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是导致肝细胞疾病的重要病毒,目前尚无有效疫苗。HCV包膜糖蛋白E1-E2的免疫原性弱,E1E2上含有丰富的N-糖基化修饰的糖链,研究显示糖链可能遮盖病毒抗原表位,从而抑制和影响病毒的免疫原性,导致病毒免疫逃逸。目的:本研究拟改造E1E2的N-糖链,筛选出能比野生型的免疫原性增强的糖基化突变体;并通过B细胞表面的CD19分子将HCV-E2靶向递呈到B细胞,研究这种靶向性抗原是否能够通过激活B细胞诱导丙肝特异性中和抗体和细胞毒性T细胞免疫反应,为研制新型免疫原性增强的治疗性HCV疫苗提供新的策略。结果:1.筛选获得两个HCV包膜糖蛋白N-糖基化突变体,其能诱导比野生型更强且最强的中和性抗体水平和细胞免疫应答;并且用糖基化突变体制备的单克隆抗体能显著抑制HCVcc感染Huh7.5.1细胞。2.构建的sE2-scFV融合蛋白能够将sE2抗原靶向B细胞,并改善E2蛋白的弱免疫原性,可作为B细胞靶向性HCV疫苗,增强抗HCV免疫保护反应。sE2-scFV制备的单克隆抗体能显著抑制HCVcc感染Huh7.5.1细胞。结论:获得两个HCV包膜糖蛋白N-糖基化突变体均诱导显著的中和性抗体水平和细胞免疫应答,均可以能作为新型的免疫原性增强的HCV候选治疗性疫苗。获得的HCV包膜糖蛋白N-糖基化突变体的单抗能显著抑制和中和HCV病毒颗粒的感染,具有作为治疗性中和性抗体的潜在应用价值。

关键词： HCV Vaccine envelope glycoprotein N-glycosylation therapeutic vaccine

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