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科学通报 2019年第30期64卷 3123-3141页

作者：徐在超赵凯涛江应安夏宇尘武汉大学基础医学院医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉430071 武汉大学人民医院感染科武汉430071

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在世界范围内流行,能够引起急、慢性肝炎,其中长期慢性感染可增加肝硬化及肝癌的发病风险.抗病毒药物治疗是控制HBV慢性感染的有效方法.目前应用于临床的抗HBV药物主要有两类:α干扰素和核苷(酸)类... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在世界范围内流行,能够引起急、慢性肝炎,其中长期慢性感染可增加肝硬化及肝癌的发病风险.抗病毒药物治疗是控制HBV慢性感染的有效方法.目前应用于临床的抗HBV药物主要有两类:α干扰素和核苷(酸)类似物.这两种药物虽然可以抑制病毒复制,减轻或消除肝脏病理损害并有效阻止病情向肝硬化和肝癌发展,但并不能有效地达到HBV表面抗原(HBV surface antigen,HBsAg)使其转阴并清除病毒共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),所以HBV慢性感染很难治愈.近年来,随着人们对HBV研究的深入,针对其复杂的感染机制及病毒与宿主免疫系统之间相互作用的不同靶点药物被相继开发出来.本文对近年来在病毒直接靶向和宿主靶向药物(一些目前正处于临床试验阶段),以及免疫治疗药物研发方面所取得的进展进行综述.此外,还对高通量筛选技术(unbiased high-throughput screens)寻找新的抗病毒化合物,以及老药新用的策略用于抑制HBV进行了探讨.

关键词：乙型肝炎病毒药物直接抗病毒药物免疫疗法药物筛选

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2016-2018年武汉地区手足口病病原学和流行病学调查

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武汉大学学报（医学版） 2019年第3期40卷 429-434页

作者：吴志强熊焰刘(王亭) 伍仕敏章晓联武汉市金银潭医院检验科湖北武汉430023 华中科技大学同济医学院附属普爱医院/武汉市临床检验中心湖北武汉430033 武汉大学基础医学院免疫学系/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的:对2016年1月-2018年5月武汉地区手足口病进行持续性病原学和流行病学调查,为本地区手足口病的预防、控制和治疗提供科学依据。方法:采集手足口病患儿咽拭子标本,同时收集患儿的病例信息,运用实时荧光定量方法完成临床样本的检测,... 详细信息

目的:对2016年1月-2018年5月武汉地区手足口病进行持续性病原学和流行病学调查,为本地区手足口病的预防、控制和治疗提供科学依据。方法:采集手足口病患儿咽拭子标本,同时收集患儿的病例信息,运用实时荧光定量方法完成临床样本的检测,结合病例信息对患儿进行病原学和流行病学综合分析及统计。结果:研究期间共收集手足口病咽拭子标本6 802例,实时荧光定量方法检测肠道病毒阳性5 683例,阳性率为83. 5%(5 383/6 802);其中CVA6阳性2 215例,阳性率为32. 6%(2 215/6 802);EV71阳性1 925例,阳性率为28. 3%(1 925/6 802);CVA16阳性691例,阳性率为10. 2%(691/6 802);CVA10阳性570例,阳性率为8. 4%(570/6 802);另282份检测为其它肠道病毒阳性,阳性率为4. 1%(282/6 802)。统计分析发现:病例收集期间武汉地区手足口病发病的高峰期为5-6月,而在气温最低1-2月发病人数最少;在所有手足口病患儿中,1～3岁儿童最多,且在1～6岁之间,随年龄增长患儿人数均呈递减趋势;男女比例均为2∶1左右;患儿以散居儿童为主。结论:2016年1月-2018年5月武汉地区主要流行的病原体是CVA6和EV71,其次是CVA16和CVA10。本研究首次发现本地区出现CVA6和CVA10的持续性流行。

关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A6 柯萨奇病毒A16 柯萨奇病毒A10

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靶向B细胞并特异结合其分泌IL-10的重组融合蛋白的构建、表达和初步鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第2期38卷 1-6页

作者：赵荣陈含宇黄春章晓联潘勤武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室

目的：CD19单链抗体可变区（single-chain fragment variable）sc Fv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子,白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）是调节性B细胞（Breg）的主要特征之一。旨在构建CD19sc Fv和IL-10受体1（IL-10R1）胞外段的重组融合蛋白,拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法：CD19sc Fv和IL-10R1胞外段克隆到p ET-28a原核质粒上,*** BL21（DE3）工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定,Pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果：成功表达CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。结论：CD19sc Fv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子,具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。

关键词： IL-10 调节性B细胞 IL-10受体1 CD19单链抗体可变区

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两种结核分枝杆菌培养法在结核小鼠感染模型实验中的应用对比

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中国比较医学杂志 2019年第5期29卷 104-108页

作者：刘志昊穆大业占玲俊章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院武汉430071 中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法... 详细信息

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法实验分为BACTEC MGIT 960培养组与L-J培养组,经尾静脉注射1.0×10~6 CFU/mL H37Rv菌液感染36只C57BL/6雌性小鼠,感染一周后18只小鼠采用利福平治疗四周,18只小鼠注射等量磷酸缓冲液(PBS)作为对照,用BACTEC MGIT 960快速培养与罗氏培养法对36只小鼠肺、脾及肝组织匀浆液进行培养。结果采用BACTEC MGIT 960培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织培养物的报阳时间分别为(187.11±10.20) h、(347.22±12.70) h、(276.39±13.09) h,对照组为(142.50±11.70) h、(251.67±16.63) h、(230.28±7.22) h,组间对比差异有显著性(P<0.001);罗氏培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织荷菌量分别为(5.15±0.15) log_(10) CFU、(3.30±0.23) log_(10) CFU、(3.40±0.25) log_(10) CFU,对照组荷菌量分别为(5.90±0.25) log_(10) CFU、(3.88±0.31) log_(10) CFU、(4.15±0.30) log_(10) CFU,组间对比差异有显著性(P<0.001)。结论采用BACTEC MGIT 960培养法和罗氏培养法进行荷菌量检测,其培养结果相符,但是前者检测出阳性结果时间平均缩短一半,并且区分度也较高,说明BACTEC MGIT 960培养法在动物模型的荷菌量检测中更有优势,可运用于结核感染动物模型中荷菌量的检测。

关键词：结核分枝杆菌 BACTEC MGIT 960 罗氏培养法小鼠模型

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结核分枝杆菌H37Rv刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA分析及鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第5期38卷 1-9页

作者：谭杨刘胜罗凤玲章晓联武汉大学基础医学院病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院

分析毒性结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定*** H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析,然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证;进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示,表达谱芯片中4 730条lncRNA的表达水平上调,9 558条lncRNA的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA,其染色体定位于附近蛋白质编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠,mRNA功能注释显示差异表达的mRNA主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-q PCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNA,其中上调的有3条,下调的有1条。研究中异常表达的lncRNA可为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索,为后续的研究奠定基础,进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。

关键词：结核分枝杆菌(M.tb) 巨噬细胞长链非编码RNA mRNA 芯片分析

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结核分枝杆菌Rv1773c促进细菌侵入巨噬细胞的研究

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中国病原生物学杂志 2018年第4期13卷 330-335页

作者：刘伟香章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院湖北武汉430071

目的筛选出能促进分枝杆菌对巨噬细胞侵入的功能性结核基因并进行验证。方法将H37Rv RD10-16区的18个结核分枝杆菌(MTB)基因构建到pMV261载体上,然后将重组pMV261质粒电转至耻垢分枝杆菌***(Ms)中,并将各重组菌株命名为rMs::Rvs。运用... 详细信息

目的筛选出能促进分枝杆菌对巨噬细胞侵入的功能性结核基因并进行验证。方法将H37Rv RD10-16区的18个结核分枝杆菌(MTB)基因构建到pMV261载体上,然后将重组pMV261质粒电转至耻垢分枝杆菌***(Ms)中,并将各重组菌株命名为rMs::Rvs。运用菌落计数法筛选功能性基因;采用流式细胞术Flow cytometry(FCM),动物实验验证该基因的功能。结果菌落计数显示rMs::Rv1773c组菌落数最多,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);FCM验证Rv1773c促进Ms入侵巨噬细胞能力较强,rMs::Rv1773c组感染小鼠脾脏菌落数增多。结论筛选的RD14区功能性结核基因Rv1773c可能作为结核菌毒力因子,具备促进分枝杆菌入侵巨噬细胞的功能。

关键词：结核分枝杆菌入侵巨噬细胞 RD区菌落计数实验 Rv1773c

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Rv1508c调节和促进分枝杆菌对链霉素药物敏感性的研究

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中国病原生物学杂志 2018年第6期13卷 562-566页

作者：左睿琪章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院湖北武汉430071

目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核... 详细信息

目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核分枝杆菌RD6、RD9和RD15区基因与穿梭质粒pMV261连接,连接产物电转化耻垢分枝杆菌中。分别将对数生长期的耻垢分枝杆菌以及重组耻垢分枝杆菌中加入浓度倍比稀释的异烟肼(0.031 25~4μg/ml)、利福平(0.031 25~4μg/ml)和链霉素(0.031 25~4μg/ml)100μl,37℃培养2d后,用酶标仪测A600值。用Graphpad Prism5计算IC50值并进行统计学分析。结果成功构建RD6、RD9和RD15区基因重组质粒,电转化入耻垢分枝杆菌后通过检测利福平、异烟肼以及链霉素对以上RD区基因的IC50值,成功筛选出对链霉素敏感的RD6区基因Rv1508c。同时对Rv1508c在分枝杆菌(毒性结核分枝杆菌H37Rv、减毒结核分枝杆菌H37Ra、BCG、耻垢分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌以及海洋分枝杆菌)中的分布做了鉴定,确定其只存在于H37Rv和H37Ra中。结论结核分枝杆菌RD6区基因Rv1508c能促进分枝杆菌对链霉素的敏感,使链霉素杀伤分枝杆菌作用增强,Rv1508c作为链霉素一个靶点,在今后研究中,Rv1508c可作为抗结核药物增敏剂的应用。

关键词：结核分枝杆菌(H37Rv) RD区链霉素

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病毒与宿主细胞的糖基化修饰及相关功能

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生物化学与生物物理进展 2017年第10期44卷 898-907页

作者：向田章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉大学医学研究院武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从... 详细信息

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从病毒方面来看,由于病毒自身缺乏糖基化修饰系统,病毒的糖基化过程是借宿主细胞内的合成系统对自身进行糖基化修饰.病毒的糖基化过程对病毒蛋白的折叠与稳定、病毒的感染和入侵、参与识别宿主细胞受体和参与病毒的免疫逃逸等过程起着重要的作用.随着糖基化研究技术的发展,以糖基化为基础的功能应用也越来越深入:如新型病毒疫苗和新型抗病毒药物的研制,以糖蛋白质组学研究为基础的质谱技术和生物信息学方法的发展,以及利用糖基化对病毒性疾病的诊断和治疗等,这些均为糖基化深入研究发展奠定了基础.本文就病毒与宿主细胞糖基化过程、相关功能以及研究应用等进展作一综述.

关键词：糖基化修饰病毒宿主

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结核分枝杆菌Rv2645刺激ISG15的表达上升促进体外丙型肝炎病毒的增殖

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病毒学报 2017年第3期33卷 372-379页

作者：卢芳芳谭杨付忠晓刘鹏章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉大学医学研究院武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

为研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染之间的相关关系,本文研究毒性毒株*** H37Rv的RD13区中的Rv2645基因对免疫细胞中干扰素刺激基因(Interferonstimulated gene 15,ISG15)表达的影响,进而探讨ISG15的表达与HCV感染之间的相关性。利用携带Rv2645基因的无毒牛结核分枝杆菌卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)(即rBCG::Rv2645,rBCG)与亲本BCG分别感染小鼠或刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,运用RT-qPCR以及蛋白印迹的方法检测,比较rBCG与BCG感染对小鼠CD4+T细胞及RAW264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白质表达的影响。同时克隆ISG15真核表达质粒和ISG15的沉默表达质粒-ISG15-shRNA,运用RT-qPCR及蛋白印迹分别检测ISG15过表达及沉默后,对HCV感染的人肝癌细胞系Huh7.5.1中HCV的mRNA、HCV非结构蛋白NS3及核心蛋白Core的表达。我们发现相对于BCG,携带Rv2645的BCG感染之后脾脏CD4+T细胞及体外RAW264.7中ISG15的mRNA及蛋白质的水平明显升高。此外,ISG15过表达导致Huh7.5.1中HCV的mRNA、NS3蛋白及Core蛋白的水平明显升高,而ISG15沉默后ISG15和HCV的mRNA的水平明显下调。本研究首次发现*** Rv2645能上调小鼠CD4+T细胞及巨噬细胞中ISG15的表达;而ISG15能促进Huh7.5.1中HCV增殖。本研究对阐明***毒性菌株H37Rv的Rv2645基因的功能,以及为研究MTB感染与HCV感染的分子机制提供参考依据。

关键词：结核分枝杆菌-M.tb Rv2645 丙型肝炎病毒(HCV) BCG::Rv2645 ISG15

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HCV感染人肝癌Huh7.5.1细胞后差异表达的lncRNA及其对细胞增殖的影响

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病毒学报 2017年第2期33卷 192-199页

作者：付忠晓李舒向田谢焱章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少。本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少。本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.1后差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),并研究相关lncRNA对细胞增殖及周期相关基因表达的影响。首先,分析HCV感染Huh7.5.1细胞72h前后lncRNA芯片表达谱;然后采用实时荧光定量PCR(Reverse tanscription-quantitative real time PCR,RT-qPCR)的方法对芯片中差异表达明显的17条lncRNA进行细胞水平验证;进一步采用CCK8以及ki67细胞增殖实验研究差异表达最明显的lncRNA对细胞增殖的影响;最后采用RT-qPCR探讨lncRNA对细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的mRNA表达的影响。lncRNA芯片检测结果与RT-qPCR验证的相符的lncRNA中,发现HCV感染Huh7.5.1细胞后上调和下调最明显的两条lncRNA分别是RP11-288L9.1与ADAM20P1,而沉默RP11-288L9.1能抑制细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的表达水平,并抑制Huh7.5.1细胞增殖。首次发现HCV感染后上调的RP11-288L9.1能促进细胞周期蛋白基因的表达水平和Huh7.5.1细胞增殖,另一种下调的ADAM20P1对细胞增殖影响不大。研究结果为HCV感染及肝癌细胞增殖提供了潜在的诊断标志物和治疗的新型靶点,具有一定的参考价值。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV) 长链非编码RNA 细胞增殖细胞周期相关基因

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