检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2017年第10期44卷 898-907页

作者：向田章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉大学医学研究院武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从... 详细信息

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从病毒方面来看,由于病毒自身缺乏糖基化修饰系统,病毒的糖基化过程是借宿主细胞内的合成系统对自身进行糖基化修饰.病毒的糖基化过程对病毒蛋白的折叠与稳定、病毒的感染和入侵、参与识别宿主细胞受体和参与病毒的免疫逃逸等过程起着重要的作用.随着糖基化研究技术的发展,以糖基化为基础的功能应用也越来越深入:如新型病毒疫苗和新型抗病毒药物的研制,以糖蛋白质组学研究为基础的质谱技术和生物信息学方法的发展,以及利用糖基化对病毒性疾病的诊断和治疗等,这些均为糖基化深入研究发展奠定了基础.本文就病毒与宿主细胞糖基化过程、相关功能以及研究应用等进展作一综述.

关键词：糖基化修饰病毒宿主

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结核分枝杆菌H37Rv刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA分析及鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第5期38卷 1-9页

作者：谭杨刘胜罗凤玲章晓联武汉大学基础医学院病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院

分析毒性结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定*** H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析,然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证;进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示,表达谱芯片中4 730条lncRNA的表达水平上调,9 558条lncRNA的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA,其染色体定位于附近蛋白质编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠,mRNA功能注释显示差异表达的mRNA主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-q PCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNA,其中上调的有3条,下调的有1条。研究中异常表达的lncRNA可为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索,为后续的研究奠定基础,进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。

关键词：结核分枝杆菌(M.tb) 巨噬细胞长链非编码RNA mRNA 芯片分析

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结核分枝杆菌Rv2645刺激ISG15的表达上升促进体外丙型肝炎病毒的增殖

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病毒学报 2017年第3期33卷 372-379页

作者：卢芳芳谭杨付忠晓刘鹏章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室武汉大学医学研究院武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

为研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)与丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染之间的相关关系,本文研究毒性毒株*** H37Rv的RD13区中的Rv2645基因对免疫细胞中干扰素刺激基因(Interferonstimulated gene 15,ISG15)表达的影响,进而探讨ISG15的表达与HCV感染之间的相关性。利用携带Rv2645基因的无毒牛结核分枝杆菌卡介苗(Bacille calmette guerin,BCG)(即rBCG::Rv2645,rBCG)与亲本BCG分别感染小鼠或刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,运用RT-qPCR以及蛋白印迹的方法检测,比较rBCG与BCG感染对小鼠CD4+T细胞及RAW264.7细胞中ISG15的mRNA及蛋白质表达的影响。同时克隆ISG15真核表达质粒和ISG15的沉默表达质粒-ISG15-shRNA,运用RT-qPCR及蛋白印迹分别检测ISG15过表达及沉默后,对HCV感染的人肝癌细胞系Huh7.5.1中HCV的mRNA、HCV非结构蛋白NS3及核心蛋白Core的表达。我们发现相对于BCG,携带Rv2645的BCG感染之后脾脏CD4+T细胞及体外RAW264.7中ISG15的mRNA及蛋白质的水平明显升高。此外,ISG15过表达导致Huh7.5.1中HCV的mRNA、NS3蛋白及Core蛋白的水平明显升高,而ISG15沉默后ISG15和HCV的mRNA的水平明显下调。本研究首次发现*** Rv2645能上调小鼠CD4+T细胞及巨噬细胞中ISG15的表达;而ISG15能促进Huh7.5.1中HCV增殖。本研究对阐明***毒性菌株H37Rv的Rv2645基因的功能,以及为研究MTB感染与HCV感染的分子机制提供参考依据。

关键词：结核分枝杆菌-M.tb Rv2645 丙型肝炎病毒(HCV) BCG::Rv2645 ISG15

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HCV感染人肝癌Huh7.5.1细胞后差异表达的lncRNA及其对细胞增殖的影响

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病毒学报 2017年第2期33卷 192-199页

作者：付忠晓李舒向田谢焱章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系武汉430071

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少。本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少。本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.1后差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),并研究相关lncRNA对细胞增殖及周期相关基因表达的影响。首先,分析HCV感染Huh7.5.1细胞72h前后lncRNA芯片表达谱;然后采用实时荧光定量PCR(Reverse tanscription-quantitative real time PCR,RT-qPCR)的方法对芯片中差异表达明显的17条lncRNA进行细胞水平验证;进一步采用CCK8以及ki67细胞增殖实验研究差异表达最明显的lncRNA对细胞增殖的影响;最后采用RT-qPCR探讨lncRNA对细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的mRNA表达的影响。lncRNA芯片检测结果与RT-qPCR验证的相符的lncRNA中,发现HCV感染Huh7.5.1细胞后上调和下调最明显的两条lncRNA分别是RP11-288L9.1与ADAM20P1,而沉默RP11-288L9.1能抑制细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的表达水平,并抑制Huh7.5.1细胞增殖。首次发现HCV感染后上调的RP11-288L9.1能促进细胞周期蛋白基因的表达水平和Huh7.5.1细胞增殖,另一种下调的ADAM20P1对细胞增殖影响不大。研究结果为HCV感染及肝癌细胞增殖提供了潜在的诊断标志物和治疗的新型靶点,具有一定的参考价值。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV) 长链非编码RNA 细胞增殖细胞周期相关基因

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结核分枝杆菌Rv1773c促进细菌侵入巨噬细胞的研究

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中国病原生物学杂志 2018年第4期13卷 330-335页

作者：刘伟香章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院湖北武汉430071

目的筛选出能促进分枝杆菌对巨噬细胞侵入的功能性结核基因并进行验证。方法将H37Rv RD10-16区的18个结核分枝杆菌(MTB)基因构建到pMV261载体上,然后将重组pMV261质粒电转至耻垢分枝杆菌***(Ms)中,并将各重组菌株命名为rMs::Rvs。运用... 详细信息

目的筛选出能促进分枝杆菌对巨噬细胞侵入的功能性结核基因并进行验证。方法将H37Rv RD10-16区的18个结核分枝杆菌(MTB)基因构建到pMV261载体上,然后将重组pMV261质粒电转至耻垢分枝杆菌***(Ms)中,并将各重组菌株命名为rMs::Rvs。运用菌落计数法筛选功能性基因;采用流式细胞术Flow cytometry(FCM),动物实验验证该基因的功能。结果菌落计数显示rMs::Rv1773c组菌落数最多,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);FCM验证Rv1773c促进Ms入侵巨噬细胞能力较强,rMs::Rv1773c组感染小鼠脾脏菌落数增多。结论筛选的RD14区功能性结核基因Rv1773c可能作为结核菌毒力因子,具备促进分枝杆菌入侵巨噬细胞的功能。

关键词：结核分枝杆菌入侵巨噬细胞 RD区菌落计数实验 Rv1773c

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Rv1508c调节和促进分枝杆菌对链霉素药物敏感性的研究

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中国病原生物学杂志 2018年第6期13卷 562-566页

作者：左睿琪章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院湖北武汉430071

目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核... 详细信息

目的通过检测抗结核药物-利福平、异烟肼以及链霉素对结核分枝杆菌RD区(Region of Differences,RD)基因的IC50(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选对3种抗结核药物敏感或耐药的毒性结核分枝杆菌RD区基因。方法将结核分枝杆菌RD6、RD9和RD15区基因与穿梭质粒pMV261连接,连接产物电转化耻垢分枝杆菌中。分别将对数生长期的耻垢分枝杆菌以及重组耻垢分枝杆菌中加入浓度倍比稀释的异烟肼(0.031 25~4μg/ml)、利福平(0.031 25~4μg/ml)和链霉素(0.031 25~4μg/ml)100μl,37℃培养2d后,用酶标仪测A600值。用Graphpad Prism5计算IC50值并进行统计学分析。结果成功构建RD6、RD9和RD15区基因重组质粒,电转化入耻垢分枝杆菌后通过检测利福平、异烟肼以及链霉素对以上RD区基因的IC50值,成功筛选出对链霉素敏感的RD6区基因Rv1508c。同时对Rv1508c在分枝杆菌(毒性结核分枝杆菌H37Rv、减毒结核分枝杆菌H37Ra、BCG、耻垢分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌以及海洋分枝杆菌)中的分布做了鉴定,确定其只存在于H37Rv和H37Ra中。结论结核分枝杆菌RD6区基因Rv1508c能促进分枝杆菌对链霉素的敏感,使链霉素杀伤分枝杆菌作用增强,Rv1508c作为链霉素一个靶点,在今后研究中,Rv1508c可作为抗结核药物增敏剂的应用。

关键词：结核分枝杆菌(H37Rv) RD区链霉素

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两种结核分枝杆菌培养法在结核小鼠感染模型实验中的应用对比

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中国比较医学杂志 2019年第5期29卷 104-108页

作者：刘志昊穆大业占玲俊章晓联武汉大学基础医学院免疫学系病毒学国家重点实验室湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室和医学研究院武汉430071 中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法... 详细信息

目的采用两种结核分枝杆菌培养法(BACTEC MGIT 960培养法与罗氏(L?wenstein-Jensen,L-J)培养法)同时验证利福平(rifampin,RIF)在结核感染小鼠模型中的治疗效果,探讨采用BACTEC MGIT 960培养系统在结核感染的小鼠模型中的应用价值。方法实验分为BACTEC MGIT 960培养组与L-J培养组,经尾静脉注射1.0×10~6 CFU/mL H37Rv菌液感染36只C57BL/6雌性小鼠,感染一周后18只小鼠采用利福平治疗四周,18只小鼠注射等量磷酸缓冲液(PBS)作为对照,用BACTEC MGIT 960快速培养与罗氏培养法对36只小鼠肺、脾及肝组织匀浆液进行培养。结果采用BACTEC MGIT 960培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织培养物的报阳时间分别为(187.11±10.20) h、(347.22±12.70) h、(276.39±13.09) h,对照组为(142.50±11.70) h、(251.67±16.63) h、(230.28±7.22) h,组间对比差异有显著性(P<0.001);罗氏培养法,RIF治疗组中肝、肺及脾组织荷菌量分别为(5.15±0.15) log_(10) CFU、(3.30±0.23) log_(10) CFU、(3.40±0.25) log_(10) CFU,对照组荷菌量分别为(5.90±0.25) log_(10) CFU、(3.88±0.31) log_(10) CFU、(4.15±0.30) log_(10) CFU,组间对比差异有显著性(P<0.001)。结论采用BACTEC MGIT 960培养法和罗氏培养法进行荷菌量检测,其培养结果相符,但是前者检测出阳性结果时间平均缩短一半,并且区分度也较高,说明BACTEC MGIT 960培养法在动物模型的荷菌量检测中更有优势,可运用于结核感染动物模型中荷菌量的检测。

关键词：结核分枝杆菌 BACTEC MGIT 960 罗氏培养法小鼠模型

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G-四链体碱基突变可增强丙型肝炎病毒DNA疫苗的免疫原性

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中国生化药物杂志 2017年第1期37卷 6-12页

作者：王昱斌卞文秀刘敏章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系

目的探讨丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）核心抗原core基因上的G4-四链体（core G4）RNA结构对机体特异性免疫应答的影响。方法圆二色谱（circular dichroism,CD）检测寡核苷酸链RNA G4（命名为G4R）和突变体G4M（命名为G4RM,... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）核心抗原core基因上的G4-四链体（core G4）RNA结构对机体特异性免疫应答的影响。方法圆二色谱（circular dichroism,CD）检测寡核苷酸链RNA G4（命名为G4R）和突变体G4M（命名为G4RM,在不改变氨基酸密码子的情况下）的G-四链体空间结构;在不改变密码子的情况下采用PCR定点突变的方法把HCV野生型G4-core（DNA）突变为G4Mcore,然后将G4-core和G4M-core基因构建至真核表达质粒pc DNA3.1上（分别称为p G4和pG4M）,免疫印迹（Western blot）分析core基因上G4结构突变后Core蛋白的表达水平。将p G4及pG4M质粒分别用基因导入仪免疫小鼠,检测免疫后小鼠的细胞免疫以及体液免疫水平。结果 CD结果显示寡核苷酸链RNA G4M相比野生型RNA G4结构发生改变,熔解曲线表明G4RM熔解温度低于野生型RNA G4R。Western blot显示在细胞水平及动物水平,pG4M比p G4的Core蛋白表达水平更高（P〈0.05）。动物免疫实验结果表明pG4M免疫后小鼠总IgG及IFN-γ的释放水平增高（P〈0.05）。其中,pG4M免疫组小鼠的IgG水平是p G4组的1.61倍。酶联免疫斑点（Enzyme-linked immunospot,ELISpot）实验中,pG4M免疫后小鼠脾脏细胞IFN-γ的释放水平是p G4的1.39倍。流式实验显示pG4M免疫后小鼠脾脏CD4＋T细胞中IFN-γ产生水平是p G4的1.79倍。结论本研究首次报道HCV核心抗原core上G-四链体可能抑制其蛋白翻译和免疫应答,core上G-四链体碱基突变可增强翻译水平,并增强其Th1型的细胞免疫应答。核心抗原G-四链体碱基突变可增强HCV疫苗的免疫原性,为研制增强免疫原性的HCV疫苗提供了一种新的策略。

关键词：核心抗原Core G-四链体点突变免疫应答细胞免疫

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丙型肝炎病毒感染人肝细胞系对多种唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶表达的影响

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中国生化药物杂志 2015年第10期35卷 5-10页

作者：刘晓宇章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系湖北武汉430071

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人肝癌细胞系Huh7.5.1细胞后与肿瘤相关的唾液酸转移酶家族和半乳糖基转移酶家族的35个糖基转移酶的表达变化。方法利用HCV感染的Huh7.5.1肝细胞模型,采用Western blot检测HCV感染后HC... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染人肝癌细胞系Huh7.5.1细胞后与肿瘤相关的唾液酸转移酶家族和半乳糖基转移酶家族的35个糖基转移酶的表达变化。方法利用HCV感染的Huh7.5.1肝细胞模型,采用Western blot检测HCV感染后HCV非结构蛋白NS3的表达,定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HCV感染后HCV-RNA的表达及HCV感染对Huh7.5.1细胞中35个糖基转移酶mRNA表达水平的影响。凝集素染色实验测定HCV感染对Huh7.5.1细胞中糖苷表达水平的影响。结果在HCV感染后的Huh7.5.1细胞中,发现4个唾液酸转移酶(ST3Gal III、ST6Gal NAC III、ST8Sia III和ST8Sia IV)和5个半乳糖基转移酶(B3GALT 1、B3GALT 2、B3GALT 3、B3GALT 4和B4GALNT 2)的mRNA水平明显升高11~45倍,其中变化最大的是B3GALT 1,上升45倍,其次是ST8Sia III和ST8Sia IV,分别上升37倍和39倍。进一步采用凝集素染色实验验证,发现结合末端唾液酸糖苷Neu5Acα6Gal的接骨木凝集素(elderberry lectin,EBL)在HCV感染后升高1.97倍,结合末端半乳糖苷Galβ1,3Gal NAc的尾穗苋凝集素(amaranthus caudatus agglutinin,ACA)和结合Galβ1,4Gal NAc的鸡冠刺桐凝集素(erythrina cristagalli agglutinin,ECA)分别升高3倍和4.3倍。结论 HCV感染导致人肝细胞中特定唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶及其相应糖苷表达水平呈现明显上升。这些结果对研究HCV感染的治疗靶点和诊断标志物具有一定参考价值。

关键词：丙型肝炎病毒唾液酸转移酶半乳糖基转移酶 HCV感染糖苷标志物

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结核分枝杆菌对巨噬细胞岩藻糖转移酶家族基因表达的影响

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中国生化药物杂志 2016年第3期36卷 19-22页

作者：胡锋潘勤章晓联武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系湖北武汉430071

目的研究结核分枝杆菌标准株H37Rv(inactivated H37Rv,i H37Rv)刺激巨噬细胞RAW264.7细胞后,对岩藻糖转移酶家族中的10个糖基转移酶表达的影响。方法用热灭活的i H37Rv刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,用qRT-PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction)检测i H37Rv分别刺激RAW264.7细胞0 h、4 h、8 h、12 h后对巨噬细胞中10个岩藻糖基转移酶的mRNA表达水平的影响。凝集素染色和流式细胞术检测岩藻糖转移酶对应的糖苷的表达变化。结果 i H37Rv分别刺激RAW264.7细胞0 h、4 h、8 h、12 h后,岩藻糖转移酶1(FUT1)基因的表达随着刺激时间的延长而逐步下调。凝集素染色和流式细胞术检测显示特异性结合岩藻糖转移酶-FUT1对应糖苷的小扁豆凝集素(lens culinaris agglutinin,LCA)在i H37Rv刺激巨噬细胞12 h后结合巨噬细胞上对应的糖苷的能力下降了4.6%。结论 FUT1糖基转移酶在i H37Rv刺激巨噬细胞后发生下调,其有可能作为结核分枝杆菌感染的诊断分子标志和治疗新靶点。

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞糖基转移酶

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