检索结果-内蒙古大学图书馆

武汉大学学报（医学版） 2005年第6期26卷 683-688页

作者：梁雨丁晓华杨占秋毛琳武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室武汉430071

目的:了解中国湖北地区汉坦病毒的遗传学特征.方法:采集2000～2001年肾综合征出血热(HFRS)患者的血液标本,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增汉坦病毒M片断基因.22例IgM阳性患者中,从 5例患者的血凝块中扩增得到特异性PCR产物.结果:对... 详细信息

目的:了解中国湖北地区汉坦病毒的遗传学特征.方法:采集2000～2001年肾综合征出血热(HFRS)患者的血液标本,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增汉坦病毒M片断基因.22例IgM阳性患者中,从 5例患者的血凝块中扩增得到特异性PCR产物.结果:对550bp和403bp扩增产物进行的系统进化分析揭示汉坦病毒至少存在3个不同分支.W613株和W1141株与原型株HTN76-118,CUMC-B11(韩国),cl-l和cl-2(日本)同一分支;W1219株和H8205同一分支;另外两株与A9和HV114同一分支.结论:首次发现湖北地区人类汉坦病毒株与韩国和日本的HTN型具有高度序列同源性.

关键词：肾综合征出血热汉坦病毒系统进化分析分子流行病学

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人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第10期25卷 924-926页

作者：唐洁孙平章晓联武汉大学基础医学院免疫系病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能。方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体。重组融合... 详细信息

目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能。方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体。重组融合蛋白GST-hsCD59由经IPTG诱导的大肠杆菌BL21表达后纯化并鉴定。用pVAX-1-hCD59质粒免疫家兔并用纯化的GST-hsCD59融合蛋白加强免疫制备兔抗人CD59多克隆抗体并测定其效价。结果:成功构建人CD59真核表达质粒pVAX-1-hCD59和原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59。融合蛋白GST-hsCD59在大肠杆菌中高效表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值一致。制备的兔抗人CD59多克隆抗体效价为1∶3200。结论:成功地构建了重组真核表达质粒pVAX-1-hCD59及原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59,获得了兔抗人CD59多克隆抗体,这将有助于我们深入研究CD59在人类疾病中的生物学功能。

关键词：人CD59 克隆多克隆抗体

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丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究

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生物工程学报 2007年第6期23卷 995-999页

作者：郭佳鄢然徐国东郑从义武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系(10株)。PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失。Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达。薄层层析(TLC)结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒真核表达稳定细胞系 UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶

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锌指基因ZNF268两个新的差异剪接本克隆及鉴定

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遗传 2006年第5期28卷 513-517页

作者：孙翀赵舟宙高立孙燕邵焕杰李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

ZNF268是一个典型的KRAB类锌指基因，含有24个C2H2型锌指基序和一个KRAB功能域，它在人胚胎发育早期表达，并与胚胎肝脏的发育相关。通过免疫组化的方法，发现ZNF268在3—5周龄人胚的造血干细胞中有表达；进一步通过RT—PCR的方法检测发... 详细信息

ZNF268是一个典型的KRAB类锌指基因，含有24个C2H2型锌指基序和一个KRAB功能域，它在人胚胎发育早期表达，并与胚胎肝脏的发育相关。通过免疫组化的方法，发现ZNF268在3—5周龄人胚的造血干细胞中有表达；进一步通过RT—PCR的方法检测发现ZNF268在健康成人全血细胞中也有表达，并且表达有4个差异剪接本，从中克隆得到两个新的ZNF268差异剪接本ZNF268c和ZNF268d。推测ZNF268和血细胞生长发育相关。

关键词： ZNF268 锌指基因血细胞差异剪接本

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东亚钳蝎毒素BmαTX14的基因组克隆、真核表达纯化及功能的初步研究

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生物工程学报 2005年第6期21卷 853-857页

作者：吕猛王昆曹志贱蒋达和毛歆李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。Tricine-SDS-PAGE和Westernblot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱... 详细信息

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。Tricine-SDS-PAGE和Westernblot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱导84h时的表达量达到高峰,约为120mgL。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白,经毒性实验表明,具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增,得到BmαTX14基因克隆,序列分析显示:BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子,其基因组织结构具有α型Na+通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na+通道毒素。

关键词：蝎毒素 BmαTX14 基因组织结构毕赤酵母真核表达

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薄荷脑-羟丙基-β-环糊精包合物的拉曼光谱分析

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药物分析杂志 2009年第9期29卷 1528-1532页

作者：陈勤郭鹏中国地质大学医院武汉430074 病毒学国家重点实验室武汉大学药学院武汉430072

目的:使用拉曼光谱分析鉴定羟丙基-β-环糊精对薄荷脑包合后的产物,确定薄荷脑-羟丙基-β-环糊精包合物形成并表述其分子结构信息。方法:采用RENISHAW RM-1000型激光共聚焦拉曼光谱仪和RENISHAW inVia Raman Micro-scope显微拉曼光谱仪... 详细信息

目的:使用拉曼光谱分析鉴定羟丙基-β-环糊精对薄荷脑包合后的产物,确定薄荷脑-羟丙基-β-环糊精包合物形成并表述其分子结构信息。方法:采用RENISHAW RM-1000型激光共聚焦拉曼光谱仪和RENISHAW inVia Raman Micro-scope显微拉曼光谱仪分别采集了薄荷脑、羟丙基-β-环糊精以及薄荷脑-羟丙基-β-环糊精包合物不同配比时制备的包合物的拉曼光谱并进行对照分析。结果:将薄荷脑与它的羟丙基-β-环糊精包合物的拉曼光谱互相对照,薄荷脑的许多特征峰在包合物中消失了,而另一些特征峰分别向高波数或低波数方向发生了位移;将羟丙基-β-环糊精与薄荷脑包合物的拉曼光谱相比较,可以看出虽然大多数峰的形状、数量和强度都很相似,但仍有明显差异。结论:拉曼光谱表征说明薄荷脑与羟丙基-β-环糊精分子间相互作用形成氢键,使薄荷脑嵌入羟丙基-β-环糊精的疏水空腔从而形成了包合物,增加了薄荷脑的极性从而增强了它的溶解度和吸收速率。

关键词：薄荷脑羟丙基-β-环糊精包合物拉曼光谱

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蓝舌病毒HbC_3株对小鼠乳腺癌MA-782细胞的感染特性

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中国病毒学 2006年第2期21卷 153-156页

作者：梁科董长垣胡俊张蔚英陈杰武汉大学医学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430071

体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对鼠乳腺癌细胞MA782的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶癌的机制。观察MA782细胞感染BTV-HbC3的病变效应(CPE);MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;免疫组化研... 详细信息

体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对鼠乳腺癌细胞MA782的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶癌的机制。观察MA782细胞感染BTV-HbC3的病变效应(CPE);MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;免疫组化研究病毒蛋白在细胞内的表达特点;凋亡染色(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对MA782细胞周期的影响。结果证明BTV-HbC3感染MA782细胞后有明显的细胞病变效应;病毒蛋白主要表达在细胞的胞膜及胞浆内;凋亡染色发现大量的凋亡细胞;流式细胞仪可见明显的亚二倍体峰。故认为BTV-HbC3在体外能有效的感染MA782细胞,并能诱导MA782细胞凋亡。

关键词：溶癌病毒蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3) MA782乳腺癌细胞凋亡

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毕赤酵母表达的HBV全长Pres蛋白的分离纯化

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生物工程学报 2005年第5期21卷 708-712页

作者：韩雪叶林柏李宝宗佘应龙叶力郑竑高博郜金荣吴正辉病毒学国家重点实验室武汉大学生命科学学院武汉430072

巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现... 详细信息

巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现蛋白质颗粒直径为30nm。发酵液经过脱盐、浓缩处理后,上清液经DEAESFF阴离子交换柱得到纯化的PreS蛋白;超速离心和蔗糖密度梯度离心得到蛋白颗粒。该颗粒的主要组分为全长PreS蛋白(PreS1+PreS2+S),还有少量的主蛋白(S)。ELISA检测证明全长PreS蛋白和蛋白颗粒有着良好的抗原性,PN显示蛋白颗粒的抗原性比PreS蛋白的抗原性高。

关键词： HBV全长PreS蛋白发酵分离纯化免疫原性

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盐酸阿比朵尔体外抗汉坦病毒药效学研究

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中国药学杂志 2009年第3期44卷 183-186页

作者：邓海英杨占秋石丽桥罗凡刘颖娟武汉科技大学医学院武汉430065 病毒学国家重点实验室武汉大学医学病毒学研究所武汉430071

目的探讨盐酸阿比朵尔体外抗汉坦病毒效果。方法采用流式细胞分析法、间接免疫荧光检测病毒抗原评价盐酸阿比朵尔对汉坦病毒感染的作用方式;流式细胞检测法、RT-PCR半定量法对5mg·L-1盐酸阿比朵尔在感染前24h(-24h)、12h(-12h)及... 详细信息

目的探讨盐酸阿比朵尔体外抗汉坦病毒效果。方法采用流式细胞分析法、间接免疫荧光检测病毒抗原评价盐酸阿比朵尔对汉坦病毒感染的作用方式;流式细胞检测法、RT-PCR半定量法对5mg·L-1盐酸阿比朵尔在感染前24h(-24h)、12h(-12h)及感染后0h、2h4个时间点作用后病毒抗原与核酸进行检测。结果感染前给药浓度组及感染后给药浓度组,病毒感染细胞阳性率、荧光强度随浓度增加下降,具有剂量效应,与病毒对照组比较,有统计学意义(P<0.05);5mg·L-1盐酸阿比朵尔在-24h,-12h,0h,2h4个时间点作用后,可明显降低病毒感染阳性率,具有时间效应;-24h、-12h作用后,病毒mRNA表达下降,与病毒对照组比较,有统计学意义(P<0.05)。结论盐酸阿比朵尔体外具有抗汉坦病毒效应,在病毒进入细胞前及细胞后均有抑制作用,不同时间用药以病毒进入细胞前作用更明显,其抗病毒机制有待进一步研究。

关键词：盐酸阿比朵尔汉坦病毒抗病毒作用

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实验性SARS-CoV灭活疫苗对恒河猴的免疫原性与安全性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第4期25卷 302-306页

作者：钟琼杨占秋周俊王薇侯炜朱润庆唐志娇王勇鲜巧阳武汉大学医学院病毒学研究所病毒学国家重点实验室 430071 武汉大学医学院病理学教研室武汉大学实验动物中心

目的　利用恒河猴评价实验性SARS冠状病毒灭活疫苗免疫原性与安全性。方法　动物免疫分3组,分别为肌肉注射0.5μg、5μg、50μg疫苗组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,同时设超大剂量(5000μg)观察疫苗安全性,并于初次免疫后7 d再次免疫,监... 详细信息

目的　利用恒河猴评价实验性SARS冠状病毒灭活疫苗免疫原性与安全性。方法　动物免疫分3组,分别为肌肉注射0.5μg、5μg、50μg疫苗组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,同时设超大剂量(5000μg)观察疫苗安全性,并于初次免疫后7 d再次免疫,监测免疫前后动物体液免疫、黏膜免疫及血清细胞因子变化,观察临床症状及生化指标。结果　0.5μg和5μg剂量组可诱导部分免疫应答,50μg剂量组则能诱导针对SARS CoV的特异性免疫应答,且各免疫组动物均未出现不良反应。结论SARS CoV灭活疫苗在恒河猴体内能有效诱导针对SARS CoV感染的体液和黏膜免疫应答并且安全性较好。

关键词：灭活疫苗恒河猴实验性安全性研究 SARS-CoV感染特异性免疫应答疫苗免疫原性磷酸盐缓冲液细胞因子变化黏膜免疫应答疫苗安全性 5μg 病毒灭活动物免疫肌肉注射超大剂量体液免疫免疫前后生化指标临床症状

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