检索结果-内蒙古大学图书馆

荧光实时定量PCR检测尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因方法的建立及初步应用

中山大学学报（自然科学版） 2009年第3期48卷 74-79页

作者：马细兰易诗白张勇李云黄卫人刘晓春林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室／／水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 惠州学院生命科学系广东惠州516007 上海海洋大学生命学院上海200090

为了准确分析尼罗罗非鱼生长激素(growth hormone,GH)、生长激素受体(growth hormone receptors,GHRs)和胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在早期发育阶段的作用,实验设计了尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因的特异性引物,提取垂体或肝脏总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了GH、GHR、IGF-Ⅰ基因荧光实时定量PCR检测方法。运用建立的荧光实时定量PCR检测了尼罗罗非鱼GH、GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化。结果表明在早期发育阶段,尼罗罗非鱼GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2的mRNA表达存在一定的互补关系;GH的表达与GHR1的表达呈显著正相关,提示GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2在尼罗罗非鱼早期发育的不同阶段起主导作用,且GH可能主要通过与GHR1的结合起作用。

关键词：尼罗罗非鱼荧光实时定量PCR GH GHR IGF-Ⅰ 发育性变化

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斑鳠血清促性腺激素的季节变化和埋植甲基睾酮对斑鳠促性腺激素分泌的影响

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中山大学学报（自然科学版） 2009年第5期48卷 103-107页

作者：周立斌刘晓春马细兰林浩然李大疆陈焜慈李恒颂邬国民中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室//水生经济动物研究所和广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 惠州学院生命科学系和生物技术研究所广东惠州516007 中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380

采用鲤鱼GtHβ-亚基(cGtHβ)的标准品和抗血清建立了斑鳠异源的促性腺激素(Gonadotropin,GtH)放射免疫测定技术,并对斑鳠性腺指数(Gonadosomatic index,GSI)和GtH分泌的季节变化,以及埋植甲基睾酮(17α-methyl-testosterone,MT)对斑鳠GtH分泌的影响进行了研究。结果表明:斑鳠雌雄鱼GSI值分别在5月份和6月份达到最高,与其他月份相比有显著性提高(P<0.05);斑鳠雌鱼血清GtH水平在6月份达到最高,与10月和12月相比有显著性提高(P<0.05),斑鳠雄鱼血清GtH水平在6月份达到最高,4月、10月和12月相比有显著性提高(P<0.05);雌雄鱼血清GtH水平表现出基本相同的变化趋势,并且血清GtH水平差异不显著(P>0.05);埋植MT对斑鳠雌雄鱼血清GtH水平有一定影响,在性腺发育初期能提高雌雄鱼血清GtH水平,而在性腺成熟和排卵期能降低雌雄鱼血清GtH水平。上述结果表明在斑鳠的人工繁殖中可以采用埋植MT的方法对斑鳠进行催熟和催产。

关键词：斑鳠促性腺激素季节变化 MT

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花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

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水生生物学报 2009年第2期33卷 214-221页

作者：黄海张勇刘晓春尹绍武杨丽萍朱培齐兴柱林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海口570228

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库... 详细信息

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。

关键词：花鳗鲡 cDNA文库促性腺激素释放激素克隆基因表达

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史氏鲟(Acipenser schrenckii)两种促性腺激素β亚基的原核表达

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中山大学学报（自然科学版） 2008年第2期47卷 89-92页

作者：胡红霞贝锦新刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所和广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET-22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)... 详细信息

采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET-22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)并诱导表达2个基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白相对分子质量分别为:GtHⅠβ亚基大约14 000,GtHⅡβ亚基15 000左右。分别用抗6个组氨酸融合标签的单克隆抗体及兔抗鲟鱼GTH多克隆抗体对2个表达蛋白进行Western-Blot分析,结果显示重组蛋白表达正确且有较高的免疫活性。GTHⅠβ重组蛋白在2 h就有明显的表达,6 h后随着时间增加表达量不再增加;25℃诱导重组蛋白产量比37℃诱导产量低。获得的重组蛋白质将可用于建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。

关键词：史氏鲟(Acipenser schrenckii) 促性腺激素 β-亚基蛋白质遗传工程

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赤点石斑鱼脑垂体超微结构的初步研究

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中山大学学报（自然科学版） 2008年第4期47卷 68-71页

作者：舒琥刘晓春张勇袁桃安林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 广州大学生命科学学院广东广州510006

应用透射电镜技术观察不同时期的性成熟赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)脑垂体的超微结构。结果表明,性成熟赤点石斑鱼脑垂体近椭圆形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。神经垂体主要由神经纤维、脑垂体细胞和微血管组成。其中神经分泌纤... 详细信息

应用透射电镜技术观察不同时期的性成熟赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)脑垂体的超微结构。结果表明,性成熟赤点石斑鱼脑垂体近椭圆形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。神经垂体主要由神经纤维、脑垂体细胞和微血管组成。其中神经分泌纤维存在A(A1、A2)和B型神经分泌纤维。腺垂体中外侧部(PPD)腺细胞由嗜酸性的GH细胞和嗜碱性的TSH细胞及GTH细胞3类细胞构成。在不同的时期,GTH细胞内的分泌颗粒明显不同。

关键词：赤点石斑鱼脑垂体超微结构

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斜带石斑鱼胸腺的显微和超微结构

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动物学报 2008年第2期54卷 342-355页

作者：吴金英林浩然中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

本文通过解剖及组织切片技术、光学显微镜、透射和扫描电子显微镜技术,对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)胸腺器官组织进行了观察研究。结果表明:斜带石斑鱼胸腺实质主要由胸腺细胞(淋巴细胞)和网状上皮细胞构成。鱼体从Ⅰ龄之后,其... 详细信息

本文通过解剖及组织切片技术、光学显微镜、透射和扫描电子显微镜技术,对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)胸腺器官组织进行了观察研究。结果表明:斜带石斑鱼胸腺实质主要由胸腺细胞(淋巴细胞)和网状上皮细胞构成。鱼体从Ⅰ龄之后,其胸腺发生明显的变化,与幼鱼有所不同,主要是胸腺可明显区分为三个区域:胸腺外皮质区、内皮质区和髓质区。外皮质区主要由网状上皮细胞、黏液细胞、成纤维细胞和少量淋巴细胞构成,细胞排列疏松;内皮质区主要由密集的淋巴细胞和网状上皮细胞组成,以含有大量的淋巴细胞为特征;髓质区主要由淋巴细胞和较多的网状上皮细胞构成,总体特征是淋巴细胞数量比内皮质区的少,且细胞排列较疏松。外皮质区、内皮质区相当于高等脊椎动物的皮质;髓质区相当于高等脊椎动物的髓质。髓质区之下有结缔组织,在Ⅱ龄以上的成体出现胸腺小体(Hassall's corpuscles)或类似胸腺小体的结构,而且随着年龄的增加,胸腺外皮质区增厚,结缔组织增加,还表现在内皮质区和髓质区组织逐渐萎缩变薄,胸腺的细胞组成类型和淋巴细胞数量上有所变化等等。这些现象在Ⅱ龄鱼开始出现,即胸腺呈现退化迹象,在Ⅲ龄以上鱼体呈现明显的退化和萎缩。胸腺表面扫描电镜结果表明:其上皮细胞表面具有微嵴以及由微嵴组成的指纹状结构,有一些微孔分布。透射和断面扫描电镜的结果进一步表明:胸腺组织内的细胞成分复杂,除了淋巴细胞和网状上皮细胞外,还具有巨噬细胞、肥大细胞、肌样细胞、浆细胞、指状镶嵌细胞和纤维细胞等。

关键词：斜带石斑鱼胸腺显微结构超微结构

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中国大鲵脑cDNA文库构建及促甲状腺激素β亚基基因cDNA的克隆和序列分析

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水产学报 2008年第4期32卷 507-516页

作者：杨丽萍杨慧荣张勇刘云黄海刘晓春蒙子宁黄俊海林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室珠海市斗门金鲵水产科技有限公司

以大鲵脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建技术构建了cDNA文库。经检测,文库初始滴度为5.0×***-1,重组率为91.70%,插入片断大小在0.35～3.9kb,平均插入片段大小为0.791kb,文库扩增后滴度为4.0×***-1。随机挑选... 详细信息

以大鲵脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建技术构建了cDNA文库。经检测,文库初始滴度为5.0×***-1,重组率为91.70%,插入片断大小在0.35～3.9kb,平均插入片段大小为0.791kb,文库扩增后滴度为4.0×***-1。随机挑选200个阳性克隆测序,经生物信息学分析,发现20个片段与已报道的基因有较高同源性,包括促甲状腺激素基因、生长激素基因及催乳素基因等,其中三个克隆为促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因。序列分析表明,TSHβcDNA全长序列为705bp,包含417bp开放读码框,编码138个氨基酸序列,其中前19个氨基酸为大鲵TSHβ亚基信号肽部分,后接119个氨基酸组成的TSHβ亚基成熟肽。同源性分析显示,大鲵TSHβ亚基与两栖类牛蛙、蟾蜍及爪蟾同一蛋白的同源性分别为53.6%、52.2%和60.3%。采用邻接法和最大简约法对部分脊椎动物TSHβ氨基酸序列构建分子系统树,结果显示有尾目大鲵为两栖动物中较早分化的一支,表明其进化地位较原始。RT-PCR组织分布分析发现,TSHβ基因除垂体有表达外,性腺也有少量表达。

关键词：中国大鲵 cDNA文库促甲状腺激素β亚基组织分布

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鲟鱼GtH放射免疫测定方法的建立及催产前后史氏鲟血清GtH含量的变化

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水产学报 2008年第6期32卷 817-824页

作者：胡红霞刘晓春朱华张勇国家淡水渔业工程技术研究中心(北京)暨北京市水产科学研究所中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

用蛋白质快速液相层析（FPLC）分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素（GtH）,共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白,用反相高效液相色谱（rpHPLC）分离出两个亚基,质谱测定α亚基分子量:15 603ku,两个β亚基分... 详细信息

用蛋白质快速液相层析（FPLC）分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素（GtH）,共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白,用反相高效液相色谱（rpHPLC）分离出两个亚基,质谱测定α亚基分子量:15 603ku,两个β亚基分子量分别为14 338ku和14 694ku。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体,采用氯胺T法用125I标记抗原,用羊抗兔γ球蛋白做二抗,建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化,统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12h和16h GtH分泌量升高显著,最高达到***-1;催产效应时间与催产后血清中GtH的含量紧密相关。

关键词：史氏鲟俄罗斯鲟促性腺激素放射免疫测定催产

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斜带石斑鱼生长激素释放激素(GHRH)及其受体的cDNA克隆、序列分析及表达分布

斜带石斑鱼生长激素释放激素(GHRH)及其受体的cDNA克隆、序列分析...

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第五届广东、湖南、江西、湖北四省动物学学术研讨会

作者：钱越华李文笙林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

生长激素释放激素(growth hormone release hormone)通过生长激素释放激素受体(GHRHR)在垂体水平对生长激素的合成和释放起重要调节作用。用RT-PCR的方法从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的下丘脑和垂体中分别克隆到编码GHRH和GHRHR... 详细信息

生长激素释放激素(growth hormone release hormone)通过生长激素释放激素受体(GHRHR)在垂体水平对生长激素的合成和释放起重要调节作用。用RT-PCR的方法从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的下丘脑和垂体中分别克隆到编码GHRH和GHRHR的cDNA。结果表明:1)斜带石斑鱼GHRH开放读码框长423bp,编码141个氨基酸,其中信号肽18个氨基酸,

关键词：斜带石斑鱼生长激素释放激素克隆组织分布胚胎发育期

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斜带石斑鱼垂体腺苷酸环化酶激活多肽在毕赤酵母中表达

斜带石斑鱼垂体腺苷酸环化酶激活多肽在毕赤酵母中表达

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第五届广东、湖南、江西、湖北四省动物学学术研讨会

作者：欧阳静李文笙林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide),简称PACAP,是38个氨基酸的小肽.自1989年被发现以来,随着对其越来越深入的研究,表叫PACAP作为一个神经肽类激素,对中枢神经系统和周围神经系统都有着重... 详细信息

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide),简称PACAP,是38个氨基酸的小肽.自1989年被发现以来,随着对其越来越深入的研究,表叫PACAP作为一个神经肽类激素,对中枢神经系统和周围神经系统都有着重要的调控作用.由于其广泛的生物活

关键词：斜带石斑鱼垂体腺苷酸环化酶激活多肽毕赤酵母表达

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