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动物学报 2006年第2期52卷 362-375页

作者：胡红霞张勇刘晓春贝锦新朱华林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室国家淡水渔业工程技术研究中心(北京)暨北京市水产科学研究所北京100068 海南大学海洋学院海口570228

从史氏鲟(Acipenserschrenkii)脑垂体中提取总RNA,利用GeneRacerTM技术,分别克隆得到促性腺激素Ⅰ(GTHⅠ)和Ⅱ(GTHⅡ)的β亚基cDNA全长。史氏鲟GTHⅠ-β亚基cDNA全长为1088bp,开放阅读框为384bp,编码128个氨基酸(Genbank序列登录号为:AY575920);GTHⅡ-β亚基cDNA全长为616bp,开放阅读框为408bp,编码136个氨基酸(Genbank序列登录号为:AY575921)。与其他脊椎动物进行了两种基因的氨基酸序列同源性比较表明:史氏鲟GTHⅠ-β与西伯利亚鲟相似性最高,为99·1%;与硬骨鱼类中鲈形目相似性最低,为34·5%。GTHⅡ-β与西伯利亚鲟相似性为98·3%,与其他硬骨鱼类除鲈形目外都超过60%,与鸟类的相似性最低,为42·8%。两个基因成熟肽构建的MP树显示:GTHⅠ与FSH的β亚基和GTHⅡ与LH的β亚基构成两个明显的聚类。用Mega2软件计算了所比对物种间开放读码框的核苷酸遗传距离并构建了NJ树和MP树,两个基因β亚基的NJ系统树和MP系统树拓扑结构相似,鲟鱼与真骨鱼类分别聚类,共同形成硬骨鱼纲聚类,与传统分类学一致。成熟肽相似性、遗传距离和系统树分支长度显示GTHⅠ-β亚基在真骨鱼类进化速率显著快于其他脊椎动物,而LH-β亚基在羊膜动物中进化比其他脊椎动物快。暗示这两种糖蛋白基因的进化伴随物种进化而显示其功能[动物学报52(2):362-375,2006]。

关键词：史氏鲟促性腺激素(GTH) cDNA克隆进化分析

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雄烯二酮对赤点石斑鱼内分泌及性腺发育的影响

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动物学报 2006年第2期52卷 316-327页

作者：舒琥张勇刘晓春李广丽林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所和广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州大学生命科学学院广州510405 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 海南大学海洋学院海口570228

采用腹部埋植法,应用连续组织切片技术、放射免疫测定方法和半定量RT-PCR技术,检测了间隔30d3次埋植不同剂量(高剂量H:100μg/g体重,低剂量L:10μg/g体重)的雄烯二酮(4-androstene-3,17-dine,ADSD)诱导2龄赤点石斑鱼性腺发育过程中血清... 详细信息

采用腹部埋植法,应用连续组织切片技术、放射免疫测定方法和半定量RT-PCR技术,检测了间隔30d3次埋植不同剂量(高剂量H:100μg/g体重,低剂量L:10μg/g体重)的雄烯二酮(4-androstene-3,17-dine,ADSD)诱导2龄赤点石斑鱼性腺发育过程中血清性类固醇激素含量、芳香化酶表达和活性的变化。结果显示:第1次埋植ADSD后30d即可诱导雌性赤点石斑鱼发生不同程度的性逆转,性腺成熟指数明显下降,性腺中卵细胞退化,精原细胞增殖,出现大量精母细胞和精子细胞,第1次埋植ADSD后30d经轻微挤压腹部有10%(低剂量组)和15%(高剂量组)的鱼可排精;第2次埋植后30d明显提高性逆转效果,排精率分别达到80%和86·7%,性逆转雄鱼的精巢在组织结构上与正常雄鱼精巢一样,精子活力与正常雄鱼相同,对照组鱼卵巢发育良好;第3次埋植后30d排精率分别为90%和80%,埋植ADSD后性腺芳香化酶(P450aromA)表达和活性显著降低,脑芳香化酶(P450aromB)表达显著升高,前脑芳香化酶活性显著升高,血清T,11-KT水平显著高于对照组,而血清E2水平先升高,然后逐渐降低。说明血清T,11-KT水平增加,性腺芳香化酶表达及活性降低在控制雌雄同体的赤点石斑鱼的性转化和精子发生中起重要作用[动物学报52(2):316-327,2006]。

关键词：赤点石斑鱼雄烯二酮性逆转性类固醇激素芳香化酶表达和活性

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LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

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Zoological Research 2005年第4期26卷 422-428页

作者：舒琥刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组(高、低剂量组和对照组),各25尾。高剂量组埋植促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)缓释剂,剂量为300μg/kg体重,低剂量组为100μg/kg体重,对照组埋植不含LHRHA的药丸。分别在实验开始和埋... 详细信息

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组(高、低剂量组和对照组),各25尾。高剂量组埋植促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)缓释剂,剂量为300μg/kg体重,低剂量组为100μg/kg体重,对照组埋植不含LHRHA的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素(E2、T);解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10—30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1.055%,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末(核偏位);低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1.858%,低剂量组为0.987%;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRHA缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRHA缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素(E2、T)只与卵黄生成有关,与排卵无关。

关键词：赤占石斑鱼:LHRH—A 缓释卵巢发育排卵性类固醇激素

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LHRH-A缓释剂促进雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精巢发育与排精的研究

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水产学报 2005年第4期29卷 433-440页

作者：舒琥刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275广州大学生物与化学工程学院生物系广东广州510405 广东广州510275

研究了促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)不同处理方式对雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精子生成及精子排放的影响。对照组在0、7d二次注射生理盐水(50μg·kg-1BW),注射组在0、7d二次注射LHRHA(50μg·kg-1BW),埋植组在0d... 详细信息

研究了促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)不同处理方式对雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精子生成及精子排放的影响。对照组在0、7d二次注射生理盐水(50μg·kg-1BW),注射组在0、7d二次注射LHRHA(50μg·kg-1BW),埋植组在0d埋植LHRHA缓释剂(100μg·kg-1BW)。结果表明,通过埋植LHRHA缓释剂,血清睾酮(T)和11-酮基睾酮(11-KT)水平快速增加,显示血清睾酮和11-酮基睾酮水平与赤点石斑鱼精子生成和精子排放有密切关系。组织学观察表明,在21d,对照组和注射组鱼精巢充满了精子细胞、精母细胞和精原细胞,而在同一时间,LHRHA埋植组鱼精巢含有大量精子,表明精子排放仍在进行。在40d期间采集精液总量为对照组<注射组<埋植组,差异显著。当注射组在处理14d后精液量逐渐回落到对照组水平时,埋植组仍然维持较高精液量水平。各组采集的精子的活力与采集的精液量呈正相关,而精子密度没有显著差异。数据显示,LHRHA缓释剂能显著增加赤点石斑鱼的精液量及延长精子排放时间而不改变精子的质量。

关键词：赤点石斑鱼促黄体生成素释放激素类似物性类固醇激素精巢发育缓释排精

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半胱胺盐酸盐和LHRH-A对黄鳍鲷IGF-Ⅰ基因表达和生长的影响

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动物学报 2005年第1期51卷 108-116页

作者：石和荣张勇张为民刘晓春柯浩林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 广东省农科院兽医研究所广州510640

本文以黄鳍鲷 (Sparuslatus)为研究对象 ,利用GeneRaceTM 技术 ,从其肝组织中克隆出类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )cDNA ,并应用半定量RT PCR方法研究了半胱胺盐酸盐 (Cysteaminehydrochloride)和LHRH A对其肝组织IGF Ⅰ基因表达的影响。... 详细信息

本文以黄鳍鲷 (Sparuslatus)为研究对象 ,利用GeneRaceTM 技术 ,从其肝组织中克隆出类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )cDNA ,并应用半定量RT PCR方法研究了半胱胺盐酸盐 (Cysteaminehydrochloride)和LHRH A对其肝组织IGF Ⅰ基因表达的影响。黄鳍鲷IGF ⅠcDNA全长为 84 0bp ,编码 185aa多肽 ;序列分析表明 ,黄鳍鲷IGF Ⅰ基因编码的氨基酸序列与金鱼的同源性为 75 8% ,与牙鲆的同源性为 86 5 % ,与同属鲷科的黑鲷同源性高达 10 0 % ,证明鱼类类胰岛素生长因子是非常保守的 ,E区域分析结果表明黄鳍鲷IGF Ⅰ属Ea 4型。在饲料中投喂CSH、LHRH A等添加剂 ,实验组黄鳍鲷鱼种的相对生长率、垂体GH含量、肝脏IGF ⅠmRNA水平均显著高于对照组。以上结果提示 :CSH、LHRH A能促进黄鳍鲷生长激素的合成和IGF Ⅰ基因的表达。

关键词： IGF-Ⅰ LHRH CSH 肝组织基因表达对照组影响黄鳍鲷半胱胺生长

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外源生长激素基因在蓝太阳鱼中的整合、表达和遗传

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动物学报 2005年第2期51卷 299-307页

作者：曹运长李文笙叶卫林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广东省番禺国家级罗非鱼良种场广州511453

通过基因重组, 将石斑鱼生长激素基因编码序列克隆到鲤鱼βactin基因启动子下游, 构建了“全鱼”生长激素基因表达载体pCAecGHc。采用显微注射法, 研制出转“全鱼”生长激素基因蓝太阳鱼。经过PCR、PCR Southern杂交、RT PCR等技术对转... 详细信息

通过基因重组, 将石斑鱼生长激素基因编码序列克隆到鲤鱼βactin基因启动子下游, 构建了“全鱼”生长激素基因表达载体pCAecGHc。采用显微注射法, 研制出转“全鱼”生长激素基因蓝太阳鱼。经过PCR、PCR Southern杂交、RT PCR等技术对转植基因在转基因蓝太阳鱼中的整合和表达情况进行了检测。结果表明:转植基因在两批次P0 转基因蓝太阳鱼中的整合率为5 .60%和12. 26%, 并在转基因鱼中得到了正确表达, 表现为嵌合性表达。对转基因蓝太阳实验鱼进行了对照养殖实验, 初步显示转基因蓝太阳鱼具有较快的生长表型效应, 比对照组生长速度快20%-40%左右。应用近交策略培育出了两个转基因蓝太阳鱼F1 品系, 检测表明, 转植基因在两个品系的整合率分别为22 .03%和40 .8%。结果表明: 转植基因通过性腺传递给了子代, 同时也证实转基因P0 代的生殖腺为转植基因的嵌合体。

关键词：外源生长激素基因蓝太阳鱼基因整合基因表达转基因性腺

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赤点石斑鱼精子发生和形成的超微结构研究

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中山大学学报（自然科学版） 2005年第4期44卷 103-106页

作者：舒琥刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所//广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州大学生物与化学工程学院生物系广东广州510405

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinepheluskaara精子发生和精子形成过程。结果表明,赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原... 详细信息

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinepheluskaara精子发生和精子形成过程。结果表明,赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原细胞、次级精原细胞阶段,细胞核释放出拟染色体。拟染色体分布于精原细胞和前期Ⅰ的初级精母细胞的细胞质中。初级精母细胞减数分裂早期同源染色体配对明显可见,并形成联会复合体。精子细胞之间存在细胞联系(桥粒)。赤点石斑鱼成熟精子的特点是细胞核圆形,核内染色质致密,没有核泡(核空隙)。精子尾部细长,横切面为典型的“9+2”轴丝结构。

关键词：赤点石斑鱼精子发生精子形成超微结构

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斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达特性研究

斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达...

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：冯少珍李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

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斜带石斑鱼(Epinephelus coiodes)orexin cDNA的克隆及组织表达特性

斜带石斑鱼(Epinephelus coiodes)orexin cDNA的克隆及组织表达特...

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：张玲娟李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

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斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达特性研究

斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达...

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会

作者：冯少珍李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体,属于天冬氨酸蛋白酶家族,有5种类型,包括胃蛋白酶原A/B/C/F和凝乳蛋白酶原.目前胃蛋白酶原或胃蛋白酶的研究大多数是关于人类或其它哺乳动物,而有关鱼类的报道很少,尤其在细胞分子生物学水平的研究,目前只... 详细信息

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体,属于天冬氨酸蛋白酶家族,有5种类型,包括胃蛋白酶原A/B/C/F和凝乳蛋白酶原.目前胃蛋白酶原或胃蛋白酶的研究大多数是关于人类或其它哺乳动物,而有关鱼类的报道很少,尤其在细胞分子生物学水平的研究,目前只有在冬季比目鱼(Pleuronectesamericanus)、河豚(Takifugurubripes)、伯氏豚(鱼叚)虎鱼(Trematomusbernacchii)、庸鲽(Hippoglossushippoglossus)克隆了胃蛋白酶原基因或部分/全长cDNA序列,并研究了其表达特性.研究鱼的消化生理,包括消化酶生理,有助了解鱼的营养生理以及解决养殖过程中遇到的某些营养问题,如研究出满足仔稚鱼和幼鱼生长所需营养的人工配合饵料来代替现在普遍用于投喂仔鱼的浮游动物.本研究的目的在于通过构建斜带石斑鱼胃cDNA文库,初步探讨有关胃基因方面的生物信息;并研究胃蛋白酶原基因结构及其在斜带石斑鱼不同发育阶段的表达差异,探索发育中的仔鱼调节胃蛋白酶的消化能力,以及探讨胃蛋白酶原的表达与某种胃肠激素(如胃泌素)的关系。

关键词：斜带石斑鱼胃cDNA文库胃蛋白酶原基因克隆组织表达营养生理

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