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补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的实验研究

中国医科大学学报 2014年第1期43卷 14-18页

作者：刘亚莉易佳丽王莹井欢刘春英辽宁中医药大学基础医学院病理学教研室沈阳110032 辽宁卫生职业技术学院医学技术系卫生检验教研室沈阳110101

目的观察补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的抑制作用,并探讨其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白和mRNA表达的影响。方法以SD大鼠制备高、中、低剂量的补中益气汤含药血清和空白对照血清。MTT法筛选... 详细信息

目的观察补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的抑制作用,并探讨其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白和mRNA表达的影响。方法以SD大鼠制备高、中、低剂量的补中益气汤含药血清和空白对照血清。MTT法筛选最佳含药血清组。培养细胞分为空白血清组、最佳含药血清组、LY294002组(阻滞剂组)、最佳含药血清+LY294002组(联合组)和阴性对照组。免疫细胞化学方法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测PI3K、p-AKT蛋白和mRNA的表达情况。结果随着含药血清浓度的升高,对顺铂的逆转倍数不断增加;中剂量含药血清作用48 h为最佳含药血清及最佳作用时间;最佳含药血清可使A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT蛋白表达减少,与空白血清组比较差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤诱导A549/DDP细胞PI3K、p-AKT mRNA表达显著减少,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与阻滞剂联合作用p-AKT mRNA下降更为明显。结论补中益气汤可通过降低A549/DDP细胞中PI3K、p-AKT mRNA的表达而影响PI3K/AKT信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用。

关键词：补中益气汤磷脂酰肌醇3激酶磷酸化蛋白激酶

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阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护作用

阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护作用

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中国生理学会第24届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：连加辨吴枝娟方秋娟余靖何瑞岚三明职业技术学院医学与护理系基础医学教研室福建医科大学基础医学院生理学与病理生理学系

目的:探讨酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护作用及其机制。方法:雄性幼SD大鼠随机分成四组(n=10):对照组(Control)、柔红霉素组(DNR)、阿魏酸钠干预组(DNR+SF)和阿魏酸钠单用组(SF)。Control组和SF组,均腹腔注射0.9%Na Cl(NS),5ml/Kg... 详细信息

目的:探讨酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护作用及其机制。方法:雄性幼SD大鼠随机分成四组(n=10):对照组(Control)、柔红霉素组(DNR)、阿魏酸钠干预组(DNR+SF)和阿魏酸钠单用组(SF)。Control组和SF组,均腹腔注射0.9%Na Cl(NS),5ml/Kg,每周1次,共4次;DNR组和SF干预组,均腹腔注射DNR(0.5mg/ml),5ml/Kg,每周1次,共4次,制备未成熟心肌DNR损伤模型。其中Control组和DNR组,自第1次注射DNR开始,NS灌胃,5ml/kg.d,连续25天;SF组和DNR+SF组,12mg/ml SF灌胃,5ml/kg.d,连续25天,制备SF干预未成熟心肌模型。SF末次给药后第3天左心室插管测左心室压力及其对异丙肾上腺素反应;取心肌组织观察大鼠心肌超微结构改变;Western blot和RT-PCR检测大鼠心肌组织c TNI表达。结果:SF干预抑制DNR损伤引起的心率下降(P<0.05);增加LVEDP、HR、+dp/dtmax和-dp/dtmax对异丙肾上腺素激发的增量(P<0.01);改善心肌细胞超微结构损伤;抑制DNR损伤引起的c TNI表达下降(P<0.05)。结论:阿魏酸钠干预能减轻柔红霉素所致幼大鼠心力储备下降,其机制可能与阿魏酸钠能有效逆转DNR致幼大鼠心肌收缩舒张相关蛋白c Tn I表达下降有关。

关键词：阿魏酸钠柔红霉素心肌保护异丙肾上腺素

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Cyclin E RNA干扰载体的构建及其对EC9706细胞Cyclin E表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2013年第2期48卷 163-167页

作者：王娜冷弘李敏臧文巧王媛媛郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 洛阳职业技术学院免疫学与病原生物学教研室洛阳471000

目的:构建CyclinE基因干扰载体,转染食管癌EC9706细胞,观察其对CyclinE基因表达的影响。方法:设计、合成靶向CyclinE基因siRNA,退火成双链后与pRNAT-CMV3.1/Neo载体连接。转染EC9706细胞后,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,RT-PCR、We... 详细信息

目的:构建CyclinE基因干扰载体,转染食管癌EC9706细胞,观察其对CyclinE基因表达的影响。方法:设计、合成靶向CyclinE基因siRNA,退火成双链后与pRNAT-CMV3.1/Neo载体连接。转染EC9706细胞后,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,RT-PCR、Western-blot分别检测CyclinE基因mRNA和蛋白表达水平。结果:构建的2个CyclinE基因siRNA载体插入序列与所设计序列均一致;转染EC9706细胞后,干扰1组、干扰2组与无关siRNA对照组均产生绿色荧光,空白对照组无荧光产生。干扰1组、干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组CyclinEmRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=15.381,P=0.002),且干扰1组、干扰2组与空白对照组和无关siRNA对照组比较,CyclinEmRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。结论:构建的靶向CyclinE基因RNA干扰载体能有效抑制转染细胞CyclinE基因的表达。

关键词： CyclinE RNA干扰 EC9706细胞

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人类疱疹病毒8抗原融合的构建及初步应用

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重庆医学 2013年第23期42卷 2703-2705,2709页

作者：王娜冷弘燕备战王媛媛臧文巧李敏赵国强郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 洛阳职业技术学院免疫学与病原生物学教研室河南洛阳471000 河南省人民医院输血科郑州450003

目的构建人疱疹病毒8型(HHV-8)融合蛋白原核表达载体,为诊断HHV-8感染奠定基础。方法构建HHV-8融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白ORF59-ORF65-K8.1。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)法鉴... 详细信息

目的构建人疱疹病毒8型(HHV-8)融合蛋白原核表达载体,为诊断HHV-8感染奠定基础。方法构建HHV-8融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白ORF59-ORF65-K8.1。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)法鉴定融合蛋白。融合蛋白对无偿献血人员血清进行检测。结果 SDS-PAGE显示融合蛋白约24KD,与预期值一致;Western blot提示该融合蛋白可以和HHV-8阳性血清特异性结合。融合蛋白包被酶连免疫吸附实验(ELISA)板后与无偿献血人员血清反应检测HHV-8感染情况,检测结果与市售HHV-8ELISA试剂盒检测结果一致。结论本文构建的融合蛋白可作为HHV-8感染的检测抗原用来筛查献血人员HHV-8感染情况及普通人群HHV-8感染流行病学调查。

关键词： HHV-8 ORF59,ORF65,K8 1 融合抗原融合PCR

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结核病患者外周血细胞因子的监测及意义

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临床肺科杂志 2013年第1期18卷 155-156页

作者：虎永兰耿排力青海卫生职业技术学院病原生物教研室青海大学医学院基础部青海西宁810000

目的探讨结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验测定70例结核病患者及25例健康人血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平,并进行方差分析和组内两两比较的SNK分析。结果结核病患者血清TNF-α为(0.117... 详细信息

目的探讨结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验测定70例结核病患者及25例健康人血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平,并进行方差分析和组内两两比较的SNK分析。结果结核病患者血清TNF-α为(0.117±0.03)ng/ml,健康对照组为(0.058±0.012)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05);结核组内两两比较发现,初治结核组、抗结核治疗3月组及活动性结核组患者的血清IFN-γ、IL-4、TNF-α含量均有改变,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-4的含量与结核病的发生与发展密切相关,提示细胞因子的水平与结核的发生、发展、转归与预后密切相关,因此检测TNF-α、IFN-γ、IL-4对结核的诊断及预后判断有一定价值。

关键词：外周血细胞因子结核病患者血清TNF TNF-a 酶联免疫吸附试验 IL-4 监测两两比较

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人肠道病毒71型VP1和VP4的抗原融合表达及鉴定

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世界华人消化杂志 2012年第34期20卷 3366-3369页

作者：冷弘王娜王媛媛臧文巧李敏赵国强洛阳职业技术学院免疫学与病原生物学教研室河南省洛阳市471000 郑州大学基础医学院河南省郑州市450001

目的:构建人肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)VP1-VP4重组融合蛋白表达体系.方法:构建EV71 VP1-VP4重组融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白VP1-VP4,SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定.用融和蛋白包被ELIS... 详细信息

目的:构建人肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)VP1-VP4重组融合蛋白表达体系.方法:构建EV71 VP1-VP4重组融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白VP1-VP4,SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定.用融和蛋白包被ELISA板检测41例已知血清.结果:重组片段VP1-VP4测序结果与设计目的片段序列相符,重组载体构建成功;SDS-PAGE显示融合蛋白约42.8kDa,与预期值一致;Westernblot提示该融合蛋白可以和EV71 VP1、VP4抗体特异性结合.融合蛋白包被ELISA板能准确检测出41例血清中16例EV71阳性血清,与CA16无交叉反应.结论:表达的EV71 VP1-VP4融合蛋白具有良好的抗原性,可作为EV71感染检测抗原,为EV71诊断试剂和疫苗的研究奠定实验基础.

关键词： EV71 VP1,VP4 融合抗原融合PCR

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血卟啉单甲醚介导的光动力作用后人类乳腺癌Bcap-37细胞白细胞介素-2和白细胞介素-6的检测分析

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肿瘤研究与临床 2012年第8期24卷 530-532页

作者：刘力华黄明辉钱燕春张宏波湖南永州职业技术学院医学院病理科及病理教研室 425006 湖南永州职业技术学院医学院病胸外科 425006 湖南永州职业技术学院医学院基础医学部实验中心 425006 中南大学湘雅二医院病理科

目的观察乳腺肿瘤细胞经血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法（HMME—PDT）作用后白细胞介素（IL）-2和IL-6的变化。方法常规传代培养乳腺癌Bcap-37细胞，取对数生长期的细胞，按空白对照组、实验组（激光照射组、光敏剂组、综合组）进行HMM... 详细信息

目的观察乳腺肿瘤细胞经血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法（HMME—PDT）作用后白细胞介素（IL）-2和IL-6的变化。方法常规传代培养乳腺癌Bcap-37细胞，取对数生长期的细胞，按空白对照组、实验组（激光照射组、光敏剂组、综合组）进行HMME-PDT作用，采用放射免疫法检测不同时间点细胞IL-2、IL-6的含量变化。结果在HMME-PDT作用后，IL-2含量随时间延长增加，综合组在12、24和48h与对照组、激光照射组、光敏剂组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。IL-6的含量随时间延长降低，在12、24h变化最明显，综合组与对照组、激光照射组和光敏剂组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HMME-PDT可能通过改变IL-2、IL-6的活性对乳腺肿瘤细胞产生杀伤作用，为临床患者调节免疫功能和辅助诊断提供客观指标。

关键词：乳腺肿瘤白细胞介素-2 白细胞介素-6 血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法

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肠道病毒71型河南分离株2株全基因组序列分析

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郑州大学学报（医学版） 2012年第2期47卷 170-174页

作者：冷弘卢欣刘慧涛马云云王媛媛马晶郭茂峰李敏赵国强洛阳职业技术学院免疫学与病原生物学教研室洛阳471000 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 南阳油田总医院消化肾病科南阳473132 河南省职工医学院微生物学与免疫学教研室郑州451191

目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国... 详细信息

目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国内流行株都具有较高同源性,与2008年广东流行株亲缘关系最近。这2株全基因核苷酸序列同源性为99.3%,氨基酸序列同源性为97.6%,并且氨基酸均没有发生明显改变。结论:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011属于C4亚型,与我省及我国既往流行株相比,未发生大的变异。

关键词：肠道病毒71型手足口病同源性分析河南

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地方高校医学专业教师职业倦怠与应付行为研究

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中华医学教育杂志 2012年第5期32卷 701-705页

作者：吴松泉王光丽黄阳生丁明星王志平丽水学院医学院基础医学部 323000 丽水学院医学院护理系 323000 金华职业技术学院医学院基础系解剖学教研室浙江医学高等专科学校检验系临床检验教研室

目的研究地方高校医学专业教师的职业倦怠现状和应付行为及其相互关系。方法采用Maslach职业倦怠量表（MBI—GS）修改版和肖计划编制的“应付行为问卷”，对浙江省4所地方高校医学专业347名教师进行调查和分析。结果地方高校医学专业教... 详细信息

目的研究地方高校医学专业教师的职业倦怠现状和应付行为及其相互关系。方法采用Maslach职业倦怠量表（MBI—GS）修改版和肖计划编制的“应付行为问卷”，对浙江省4所地方高校医学专业347名教师进行调查和分析。结果地方高校医学专业教师的职业倦怠处于中等程度，不同性别、岗位、职称和教龄的教师在情绪衰竭、去人性化和低成就感三个维度的差异均有统计学意义；不同人口统计学特征的高校医学专业教师在应付行为因子上的差异具有统计学意义，且与职业倦怠的三个维度相关。结论地方高校医学专业教师普遍存在职业倦怠现象，倦怠强度与性别、岗位、职称、教龄等人口统计学特征有关；职业倦怠与应付行为相关，检测并预处理消极应付行为可以提高职业倦怠的干预效果。

关键词：职业倦怠应付行为地方高校医学专业教师

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miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

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世界华人消化杂志 2012年第15期20卷 1323-1327页

作者：冷弘臧文巧王涛王媛媛马晶赵国强洛阳职业技术学院免疫学与病原生物学教研室河南省洛阳市471000 郑州大学基础医学院河南省郑州市450000 河南中医学院第一附属医院血液肿瘤科河南省郑州市450000

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测mi... 详细信息

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.

关键词：食管癌细胞系 miR-451 增殖凋亡侵袭

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