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汕头大学医学院学报 2014年第1期27卷 16-17,42,F0002页

作者：邓玉雪李蕊张驰代剑平陈小璇王革非李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室广东汕头515041

目的:研究人天然免疫分子Tetherin的抗流感病毒作用。方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆Tetherin基因并构建真核表达质粒,经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定后,脂质体转染法将Tetherin导入犬肾上皮细胞(MDCK),间接免疫荧光检测Tethe... 详细信息

目的:研究人天然免疫分子Tetherin的抗流感病毒作用。方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆Tetherin基因并构建真核表达质粒,经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定后,脂质体转染法将Tetherin导入犬肾上皮细胞(MDCK),间接免疫荧光检测Tetherin细胞中的定位。利用流感病毒H1N1(PR8)病毒空斑形成实验检测Tetherin与流感病毒增殖的关系。结果:RT-PCR扩增出543 bp片段,成功克隆Tetherin;免疫荧光结果表明Tetherin定位于细胞膜。PR8空斑形成实验提示在转染与未转染Tetherin的MDCK中,病毒空斑没有明显形状大小或数量的区别。结论:Tetherin不能有效抑制流感病毒增殖。

关键词：天然免疫 Tetherin 流感病毒抗病毒基因克隆

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A型流感病毒不同亚型/毒株NS1蛋白之间的异源性相互作用

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中国科学：生命科学 2012年第7期42卷 544-552页

作者：李卫中张衡王革非张弛曾祥兴刘辉陈小璇许燕璇李康生汕头大学医学院微生物学及免疫学教研室广东省免疫病理学重点实验室汕头515041 Department of Veterinary Medicine University of MarylandCollege Park 洛阳市中心医院超声科洛阳471009

流感病毒NS1蛋白在调控宿主免疫反应和促进病毒复制过程中发挥了重要作用.形成同源二聚体或寡聚体对于NS1蛋白有效发挥生物学功能是必要的.本研究发现流感病毒株A/Shantou/602/06(H3N2)的NS1蛋白(NS32)能够与流感病毒株A/Shantou/169/06... 详细信息

流感病毒NS1蛋白在调控宿主免疫反应和促进病毒复制过程中发挥了重要作用.形成同源二聚体或寡聚体对于NS1蛋白有效发挥生物学功能是必要的.本研究发现流感病毒株A/Shantou/602/06(H3N2)的NS1蛋白(NS32)能够与流感病毒株A/Shantou/169/06(H1N1),A/Chicken/Guangdong/1/05(H5N1)以及A/Quail/Hong Kong/G1/97(H9N2)的NS1蛋白(NS11,NS51和NS92)相互作用,尽管NS32与NS11,NS51和NS92之间存在17.4%～20.9%的氨基酸序列差异.这表明,A型流感病毒不同亚型/毒株NS1蛋白之间的异源性相互作用可能是流感病毒共感染过程中的一个常见事件.

关键词： A型流感病毒 NS1蛋白异源性相互作用

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β-淀粉样肽对原代培养小鼠大脑皮质小胶质细胞形态学及细胞因子表达的影响

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汕头大学医学院学报 2011年第2期24卷 75-77页

作者：辛岗苏芸王革非许燕璇陈小璇李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东高校免疫病理学重点实验室广东汕头515041

目的:研究原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞经β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)刺激后的形态学变化及细胞因子表达情况。方法:小胶质细胞用2次温和胰酶消化法分离,经预处理的Aβ1-42刺激后,相差显微镜观察形态学改变,RT-PCR检测IL-1β... 详细信息

目的:研究原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞经β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)刺激后的形态学变化及细胞因子表达情况。方法:小胶质细胞用2次温和胰酶消化法分离,经预处理的Aβ1-42刺激后,相差显微镜观察形态学改变,RT-PCR检测IL-1β、-6基因表达水平。结果:小胶质细胞经Aβ1-42刺激后6 h细胞形态学发生明显改变;刺激24 h后IL-1β、-6基因表达水平明显上调(P<0.05)。结论:Aβ1-42可明显活化小胶质细胞,并诱导炎性细胞因子的表达。

关键词： β-淀粉样肽小胶质细胞白细胞介素-1β 白细胞介素-6

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人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

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汕头大学医学院学报 2011年第2期24卷 81-84页

作者：张驰王革非李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东高校免疫病理学重点实验室广东汕头515041

目的:研究人流感病毒(H1N1)及禽流感病毒(H5N1)感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法:分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素(IL)-1β、-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。结果:... 详细信息

目的:研究人流感病毒(H1N1)及禽流感病毒(H5N1)感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法:分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素(IL)-1β、-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。结果:与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论:H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。

关键词： H1N1 H5N1 人神经胶质细胞流感病毒

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A型流感病毒NS1蛋白羧基端PL结构域影响NS1在细胞核内的定位

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生物化学与生物物理进展 2010年第9期37卷 975-982页

作者：张丹桂李卫中王革非张衡曾俊陈幼莹张驰曾祥兴李康生汕头大学医学院微生物学及免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室汕头515031

A型流感病毒NS1蛋白羧基端4个氨基酸可以与PDZ结构域(the domain of PSD95,Dig and ZO-1)相结合,称为PL结构域(PDZ ligand domain).对不同亚型或毒株的流感病毒而言,其NS1蛋白PL结构域的组成存在比较大的差异.有研究发现这种差异能够影... 详细信息

A型流感病毒NS1蛋白羧基端4个氨基酸可以与PDZ结构域(the domain of PSD95,Dig and ZO-1)相结合,称为PL结构域(PDZ ligand domain).对不同亚型或毒株的流感病毒而言,其NS1蛋白PL结构域的组成存在比较大的差异.有研究发现这种差异能够影响NS1与宿主细胞蛋白的相互作用进而影响病毒的致病力.为进一步探讨PL结构域对NS1蛋白生物学特性的影响,首先构建出4种不同亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H9N2)来源的NS1绿色荧光蛋白表达质粒.在此基础上,对野生型H3N2病毒NS1表达质粒进行人工改造,将其PL结构域缺失或者替换为其他亚型流感病毒的PL结构域,制备出4种重组NS1蛋白表达质粒.通过比较上述不同NS1蛋白在HeLa细胞中的定位情况发现,只有野生型H3N2病毒的NS1蛋白可以定位于核仁当中,而野生型H1N1、H5N1、H9N2病毒的NS1蛋白以及PL结构域缺失或替代的H3N2病毒NS1蛋白都不能定位于核仁.而通过比较上述NS1蛋白在流感病毒易感的MDCK细胞中的定位,进一步发现所有这些蛋白均不定位于核仁.上述结果表明:PL结构域的不同可以明显影响NS1蛋白在HeLa细胞核内的定位和分布,这有可能造成其生物学功能的差异.同时,NS1蛋白在细胞核内的定位还与宿主细胞的来源有着密切关系.

关键词： A型流感病毒 NS1蛋白 PL结构域核仁

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人免疫缺陷病毒TAT蛋白转导肽与人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G串联锌结合域的融合表达

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汕头大学医学院学报 2010年第2期23卷 84-88页

作者：王革非彭程张驰曾祥兴李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室广东汕头515041 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科湖北武汉430030

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多... 详细信息

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。

关键词：载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G 锌结合域蛋白转导

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H1N1亚型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

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生物化学与生物物理进展 2009年第6期36卷 770-775页

作者：张衡王革非高媛丽陈小璇林桂梅李康生汕头大学医学院微生物学及免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室汕头515031

A型流感病毒能诱导淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡,为进一步探讨淋巴细胞和单核巨噬细胞在凋亡中可能存在的相互作用,用H1N1亚型流感病毒诱导人外周血淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡.结果显示,前48h,H1N1流感病毒能诱导淋巴细胞和单核巨... 详细信息

A型流感病毒能诱导淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡,为进一步探讨淋巴细胞和单核巨噬细胞在凋亡中可能存在的相互作用,用H1N1亚型流感病毒诱导人外周血淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡.结果显示,前48h,H1N1流感病毒能诱导淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡,但在培养48h后,流感病毒对单核巨噬细胞表现为凋亡抑制作用,同时流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细胞术检测凋亡未见明显差异,说明细胞凋亡与病毒吸附时间长短并无相关性.检测p53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)加入前后淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡情况,结果显示,淋巴细胞和单核巨噬细胞的凋亡均被抑制,提示通过p53诱导的凋亡可能是流感病毒诱导细胞凋亡的一条重要途径.

关键词：外周血单个核细胞 A型流感病毒凋亡 p53

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A型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

A型流感病毒诱导外周血单个核细胞凋亡研究

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第六届全国免疫学学术大会

作者：张衡高嫒丽王革非陈小璇林桂梅李康生汕头大学医学院微生物学及免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室

通过使用流感病毒感染人外周血单个核细胞,结果显示其对单个核细胞包括淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡起促进作用,而对于感染后培养48h的单核巨噬细胞其作用则表现为凋亡抑制;同时在流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细... 详细信息

通过使用流感病毒感染人外周血单个核细胞,结果显示其对单个核细胞包括淋巴细胞、单核巨噬细胞的凋亡起促进作用,而对于感染后培养48h的单核巨噬细胞其作用则表现为凋亡抑制;同时在流感病毒对淋巴细胞吸附不同时间后,荧光染色和流式细胞术检测凋亡

关键词：单核巨噬细胞病毒诱导外周血单个核细胞

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