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汕头大学医学院学报 2025年第1期38卷 58-64页

作者：曾东禹陈纯晴蒙诗韵李海瑞陈若楠庄菡菁郑立宏方王楷汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东汕头515041

食管鳞癌容易发生转移,导致患者晚期的5年生存率显著降低,因此,对食管鳞癌进行早期筛查和长期监测显得尤为重要。长链非编码RNA能够通过调控多种生物信号通路来重塑食管鳞癌的肿瘤微环境,进而促进肿瘤的转移。尽管如此,目前对于长链非编... 详细信息

食管鳞癌容易发生转移,导致患者晚期的5年生存率显著降低,因此,对食管鳞癌进行早期筛查和长期监测显得尤为重要。长链非编码RNA能够通过调控多种生物信号通路来重塑食管鳞癌的肿瘤微环境,进而促进肿瘤的转移。尽管如此,目前对于长链非编码RNA调控机制的综合分析还相对较少。本文旨在总结长链非编码RNA在不同肿瘤微环境下对食管鳞癌远处转移的调控作用机制,探讨其在临床上的应用价值。

关键词：长链非编码RNA 肿瘤微环境转移食管鳞癌

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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究

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生物化学与生物物理进展 2008年第6期35卷 661-670页

作者：孟令英缪成贵杜则澎蔡唯佳许丽艳李恩民汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515041 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515041

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子.

关键词： NGAL基因寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性

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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定

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生物化学与生物物理进展 2009年第3期36卷 288-296页

作者：高书颖李恩民孟令英崔磊袁华敏杜则澎许丽艳汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515041 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515041

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 详细信息

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要.

关键词： ezrin基因转录调控元件转录因子双荧光素酶报告基因分析系统凝胶电泳迁移率变动分析

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CYP1A1、GSTM1基因多态性与食管癌遗传易感性的关系

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中华流行病学杂志 2000年第6期21卷 420-423页

作者：邵根泽苏艳蓉黄革温博贵汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室 515031

目的　探讨CYP1A1、GSTM 1基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法　采用PCR法对正常人和食管癌患者基因组DNA进行CYP1A1、GSTM 1基因分型。结果　食管癌组GSTM1(- /- )型频率 (6 4% )高于正常对照组 (5 0 % ) (P <0 .0 5 ) ... 详细信息

目的　探讨CYP1A1、GSTM 1基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法　采用PCR法对正常人和食管癌患者基因组DNA进行CYP1A1、GSTM 1基因分型。结果　食管癌组GSTM1(- /- )型频率 (6 4% )高于正常对照组 (5 0 % ) (P <0 .0 5 ) ;食管癌CYP1A1基因I/I、I/V、V/V基因型频率与正常组相比差异无显著性 ,尽管食管癌CYP1A1基因I/V、V/V型频率 (6 0 % )稍高于正常对照组 (5 0 % ) (P =0 .16 )。当研究对象按CYP1A1(I/I)和GSTM 1基因分类时 ,发现 :①在GSTM1(+ )人群中 ,食管癌组CYP1A1(I/V、V/V)基因型频率 (6 4% )高于正常组 (4 1% ) (P <0 .0 5 )。②在CYP1A1(I/I)型人群中 ,食管癌组GSTM 1(- /- )型频率 (6 7% )显著高于正常对照组 (4 0 % )(P <0 .0 1)。结论　GSTM 1、CYP1A1基因多态性与食管癌易感性相关 ,GSTM1(- /- )型个体食管癌易感性增高 ;GSTM 1(+ ) /CYP1A1(I/V、V/V)型和GSTM 1(- /- ) /CYP1A1(I/I)型个体比GSTM1(+ ) /CYP1A1(I/I)

关键词：食管肿瘤 CYP1A1 GSTM1 基因多态性

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NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究

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生物化学与生物物理进展 2001年第6期28卷 839-843页

作者：许丽艳李恩民熊华淇蔡唯佳沈忠英汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515031 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515031

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后... 详细信息

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用。

关键词： NGAL cDNA微列阵差异表达基因食管癌永生化食管上皮细胞恶性转化过表达

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一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 378-384页

作者：李恩民许丽艳杨帆袁兰陈跃汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515031 汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515031 北京大学医药卫生分析中心北京100083

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的... 详细信息

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况 .然后对过表达基因的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)实施序列测定 ,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析 .结果先后两次从 6 9个SSH阳性克隆中共鉴定出 6个线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)编码的基因 ,即ND 4L、ND 4、COX 2、Lys tRNA、ATP 8和ATP 6 .表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达 .另外 ,在ND 4L/ND 4基因的片段 (10 736～ 114 4 9)上发现了三处同型单核苷酸置换 (10 872T→C ,110 0 1A→G ,11346A→G) ,在COX 2 /Lys tRNA/ATP 8/ATP 6基因片段 (80 11～ 85 89)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A) .氨基酸序列分析表明 ,在NO诱导的EC10 9中可能存在着一种结构异常的ATP 8肽链 (一条在N端被截短的只有 11个氨基酸残基的肽链 ,而正常的ATP 8肽链为 6 8个氨基酸残基 ) .

关键词：一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因基因过表达抑制消减杂交

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新候选癌基因STRBP8在人永生化食管上皮细胞癌变过程中差异表达的分析

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癌症 2005年第4期24卷 385-390页

作者：熊兴东李恩民许丽艳刘新光蔡唯佳韩雅莉沈忠英广东医学院生物化学与分子生物学教研室广东湛江524023 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东汕头515031 汕头大学医学院肿瘤病理研究室广东汕头515031 汕头大学生物系广东汕头515063

背景与目的:近年来,核基质蛋白(nuclearmatrixproteins,NMPs)成分、结构与功能改变在肿瘤发生发展过程中的作用已成为人们研究的热点问题。分离并鉴定肿瘤相关的NMPs,是寻找肿瘤特异性标志物并进一步研究肿瘤发病机制的一个新途径。本... 详细信息

背景与目的:近年来,核基质蛋白(nuclearmatrixproteins,NMPs)成分、结构与功能改变在肿瘤发生发展过程中的作用已成为人们研究的热点问题。分离并鉴定肿瘤相关的NMPs,是寻找肿瘤特异性标志物并进一步研究肿瘤发病机制的一个新途径。本研究通过检测类视网膜母细胞瘤结合蛋白8(similartoretinoblastomabindingprotein8,STRBP8)在人永生化食管上皮细胞癌变过程中的差异表达,为寻找食管癌特异性标志物和研究食管癌的发病机制提供新线索。方法:硫酸铵沉淀法提取人胚永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的NMPs,利用双向电泳、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI鄄TOF鄄MS)和RT鄄PCR等技术检测STRBP8在SHEE和SHEEC中的差异表达。将STRBP8cDNA序列连接到pGEM鄄Teasy载体后,转化TOP10F蒺大肠杆菌感受态细胞,经筛选获得含STRBP8的阳性克隆,DNA序列测定后进行BLAST比对。结果:通过双向电泳和MALDI鄄TOF鄄MS技术分离并鉴定出核基质蛋白STRBP8只在SHEEC中表达,RT鄄PCR分析发现STRBP8mRNA也只出现在SHEEC细胞中。将其cDNA序列插入pGEM鄄Teasy载体后,经转化和筛选获得含STRBP8的阳性克隆。测序结果显示克隆得到的STRBP8cDNA片段与Genbank数据库上的序列完全一致。结论:STRBP8作为一种新?

关键词：食管肿瘤核基质蛋白 STRBP8 双向电泳 MALDI-TOF-MS

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人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用

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生物化学与生物物理进展 2003年第2期30卷 295-300页

作者：许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳韩溟吴炳礼张灿沈忠英曾毅汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515031 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515031 中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedli... 详细信息

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验?

关键词：人食管癌 cDNA文库构建鉴定应用酵母杂交

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SHEEC食管癌细胞中NGAL基因的功能

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生物化学与生物物理学报 2003年第3期35卷 247-254页

作者：李恩民许丽艳蔡唯佳熊华淇沈忠英曾毅汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室中国预防医学科学院病毒学研究所汕头515031 汕头515031 北京100052

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现NGAL基因在SHEEC食管癌细胞... 详细信息

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现NGAL基因在SHEEC食管癌细胞中显著过表达 ,表明该细胞是一种用来揭示NGAL基因在肿瘤中功能的良好模型。采用反义封闭技术 ,同时结合裸鼠成瘤实验等研究了反义封闭NGAL基因转录对SHEEC食管癌细胞的浸润和分裂增殖等行为的影响。结果发现 ,反义封闭NGAL基因转录不但可以有效地降低SHEEC细胞分泌的基质金属蛋白酶 9和基质金属蛋白酶 2的活性 ,而与此同时裸鼠成瘤细胞的浸润行为也相应地受到了明显抑制 ,然而SHEEC细胞端粒的长度、拓扑异构酶II的含量以及细胞增殖指数等未发生明显变化。表明NGAL基因在食管癌细胞SHEEC中的功能可能主要是通过明胶酶在促进肿瘤细胞的浸润中发挥作用 ,而可能与肿瘤细胞分裂增殖的相关性不明显

关键词： NGAL基因食管癌细胞肿瘤细胞浸润明胶酶裸鼠成瘤实验

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HeLa细胞中ezrin基因主要转录调控区的定位分析

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肿瘤 2008年第2期28卷 101-103页

作者：高书颖许丽艳崔磊周飞郭张燕蔡唯佳李恩民汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515041 汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515041

目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统... 详细信息

目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测启动子的转录活力,并利用在线分析程序预测ezrin基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果:获得一系列含不同长度ezrin基因5′侧翼区序列的重组pGLB质粒;当ezrin基因5′侧翼区序列从-1324截短到-890时,转录活力降低约80%,从-146截短到-32时,转录活力几乎完全丧失;在-1324/-890和-146/-32区,存在大量的Sp1转录因子结合位点。结论:在HeLa细胞中,ezrin基因的-1324/-890和-146/-32区是主要的转录调控区。Sp1可能是调控基因转录的重要转录因子。

关键词：肿瘤,实验性调节元件,转录转录因子荧光素酶类,萤火虫基因,ezrin 细胞,HeLa

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