检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 1997年第4期5卷 409-412页

作者：李震宇王泳万海英台虹阮长耿苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所血栓与止血研究室苏州215006 云南省人民医院检验科血液室昆明650091

为了解中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性特点,应用PCR技术结合HhaⅠ和SmaⅠ酶切分析研究了48个汉族人96条染色体等位基因的杂合情况。结果发现,96条染色体中HhaⅠ^+:HhaⅠ^-和SmaⅠ^+:SmaⅠ^-染色体的频率均分别为0.3... 详细信息

为了解中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性特点,应用PCR技术结合HhaⅠ和SmaⅠ酶切分析研究了48个汉族人96条染色体等位基因的杂合情况。结果发现,96条染色体中HhaⅠ^+:HhaⅠ^-和SmaⅠ^+:SmaⅠ^-染色体的频率均分别为0.38:0.62(36:60),理论杂合率为0.47,且发现HhaⅠ和SmaⅠ呈完全连锁,未发现HhaⅠ^+/SmaⅠ^-或HhaⅠ^-/SmaⅠ^+染色体。提示在我国汉族人群中,在vWF基因的5’端均存在HhaⅠ和SmaⅠ的多态性位点。新的vWF基因分子遗传标记的建立和应用,对vWD的遗传咨询和产前诊断具有较高的实用价值。

关键词：血管性血友病多态性 vWF基因 HhaI SmaI

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血小板第4因子抑制巨核细胞系膜结合型c-kit的表达(英文)

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中国实验血液学杂志 1997年第2期5卷 190-201页

作者：顾学范奚晓东 Jacques P Caen 上海第二医科大学附属新华医院分子医学实验室上海市儿科医学研究所上海200092 江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室苏州215007 拉里布瓦西埃医院血管和血液研究所

细胞表面受体c-kit与干细胞因子(SCF)对维持血细胞的生成起重要作用。血小板第4因子(PF4)能特异性地抑制巨核细胞生成。在本实验中研究了PF4对两个巨核细胞系HEL和Dami的c-kit表达影响。结果显示,经PF4处理的两株细胞,其c-kit mRNA表达... 详细信息

细胞表面受体c-kit与干细胞因子(SCF)对维持血细胞的生成起重要作用。血小板第4因子(PF4)能特异性地抑制巨核细胞生成。在本实验中研究了PF4对两个巨核细胞系HEL和Dami的c-kit表达影响。结果显示,经PF4处理的两株细胞,其c-kit mRNA表达量均下降,细胞表面受体数量降低,SCF与c-kit的结合量亦下降,两组差异有显著意义。在对细胞膜CD34表达影响方面,PF4与TGFβ1的作用相反,PF4促进CD34的表达,而TGFβ1抑制CD34的表达。研究表明,PF4抑制巨核细胞生长的机理,部分途径可能是通过抑制c-kit/SCF而产生。

关键词：血小板第4因子巨核细胞生成 c-kit原癌基因 CD34 基因表达

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纤维蛋白单抗SZ-58嵌合Fab片段在大肠杆菌中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第2期16卷 100-103页

作者：刘跃夏利军顾建明傅建新万海英阮长耿江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室215007

为减少鼠源单抗的免疫原性，降低其分子量，应用基因重组技术将纤维蛋白单抗ＳＺ－５８可变区基因与人ＩｇＧ１恒定区基因Ｃ_Ｈ１、Ｃｋ进行拼接、扩增。将扩增后的ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ基因克隆至噬菌体质粒，并导入大肠杆菌中进行表... 详细信息

为减少鼠源单抗的免疫原性，降低其分子量，应用基因重组技术将纤维蛋白单抗ＳＺ－５８可变区基因与人ＩｇＧ１恒定区基因Ｃ_Ｈ１、Ｃｋ进行拼接、扩增。将扩增后的ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ基因克隆至噬菌体质粒，并导入大肠杆菌中进行表达。表达的嵌合Ｆａｂ片段为可溶性。放免检测其在表达上清中的含量约为２００μｇ／Ｌ，免疫印迹电泳证实ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ片段能特异地与纤维蛋白Ｄ－Ｄｉｍｅｒ结合。

关键词：单克隆抗体纤维蛋白嵌合Fab片段大肠杆菌

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2N型血管性血友病临床表现与基因突变

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中华血液学杂志 1996年第3期17卷 116-120页

作者：阮长耿顾建明傅建新程大卫江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室

报道１例２Ｎ型血管性血友病（ｖＷＤ）患者，其临床表现和实验室检查与血友病甲完全相似，以前一直被误诊为血友病甲。运用ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）－ＦⅧ结合试验，发现患者血浆ｖＷＦ不能与ＦⅧ结合。为了阐明该患者... 详细信息

报道１例２Ｎ型血管性血友病（ｖＷＤ）患者，其临床表现和实验室检查与血友病甲完全相似，以前一直被误诊为血友病甲。运用ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）－ＦⅧ结合试验，发现患者血浆ｖＷＦ不能与ＦⅧ结合。为了阐明该患者ｖＷＦ缺陷的分子病理机制，通过多聚酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳，发现该患者在１８号外显子内存在Ｇ→Ａ突变，序列分析表明患者成熟ｖＷＦＮ端ＦⅧ结合区域２２位氨基酸残基甘氨酸（Ｇｌｙ）突变为谷氨酸（Ｇｌｕ）。该Ｇ→Ａ突变产生了一个ＳａｃⅠ限制性酶切位点。

关键词：血管性血友病基因突变临床表现

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变性梯度凝胶电泳检测到一种新的凝血因子Ⅷ基因突变

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中华血液学杂志 1996年第9期17卷 466-468页

作者：李震宇傅建新万海英王泳张威顾建明阮长耿江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室

凝血因子Ⅷ基因的第８号和第１４号外显子的３′端编码ＦⅧ的重要功能区，涉及凝血酶的激活、蛋白Ｃ的降解灭活及与ｖＷＦ结合。应用ＰＣＲ和变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃ－ｔｒｏｐｈｏｒｅ... 详细信息

凝血因子Ⅷ基因的第８号和第１４号外显子的３′端编码ＦⅧ的重要功能区，涉及凝血酶的激活、蛋白Ｃ的降解灭活及与ｖＷＦ结合。应用ＰＣＲ和变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃ－ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ）技术，研究了２８例血友病甲患者ＦⅧ基因的这两个外显子，发现一例轻型血友病甲患者ＦⅧ基因第８号外显子的ＤＧＧＥ行为发生了改变，经双脱氧链终止法测序证实，该外显子发生了单个碱基的置换：Ｔ（ＧＡＴ）→Ｇ（ＧＡＧ），导致Ａｓｐ３４９Ｇｌｕ。

关键词：血友病甲 FⅧ基因凝胶电泳基因突变凝血因子

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von　Willebrand因子基因外显子28　Arg611　His突变导致的2型血管性血友病

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中华血液学杂志 1996年第9期17卷 451-454页

作者：阮长耿顾建明傅建新张威江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室法国Bicetre医院

为阐明ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因外显子２８发生突变导致的血管性血友病（ｖＷＤ）的基因缺陷，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术获得ｖＷＦ基因外显子２８，分１０个基因片段（Ｃ～Ｌ）用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ... 详细信息

为阐明ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因外显子２８发生突变导致的血管性血友病（ｖＷＤ）的基因缺陷，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术获得ｖＷＦ基因外显子２８，分１０个基因片段（Ｃ～Ｌ）用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）技术筛选ｖＷＤ患者的基因突变，对变性行为有改变的片段直接测序。在一例２型ｖＷＤ患者ｖＷＦ基因外显子２８的５′端，ＤＧＧＥ显示泳动明显减慢的条带，直接测序表明发生Ｇ→Ａ杂合突变，导致ｖＷＦ成熟蛋白Ａ１区Ａｒｇ６１１Ｈｉｓ替换；此外还发现在中国人群存在Ａｌａ６１８／Ｔｈｒ６１８（Ｇ４１４０Ａ）双态性。位于Ａ１区的Ａｒｇ６１１Ｈｉｓ突变产生血小板依赖性功能减低的２型ｖＷＤ，有助于了解ｖＷＦ的结构与功能的关系；

关键词：血管性血友病点突变病因子

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抗人活化血小板单抗SZ一51嵌合抗体的构建及表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第5期 20-26页

作者：顾建明刘跃万海英李佩霞阮长耿苏州医学院血栓与止血研究室江苏省血液研究所

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体，并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗，我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙ... 详细信息

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体，并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗，我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙｓ３０－５１ＶＨ／Ｈｕ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法分别将重、轻链表达载体导入骨髓瘤细胞ＳＰ２／０中，并在相应的选择性培养基中进行耐药克隆筛选，经过体外长期传代培养和二次单克隆化，获得了一株高效表达重组ＳＺ－５１嵌合抗体的细胞株。培养上清中抗体蛋白的表达量为５ｍｇ／Ｌ，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实重组嵌合抗体具有与亲本鼠源单抗相同的ＧＭＰ－１４０结合特性，而且能与鼠源ＳＺ－５１单抗竞争结合活化血小板。本研究结果表明，基因工程“人源化”ＳＺ－５１单抗可以作为导向载体进行导向显像与导向溶栓，并为今后进一步应用于临床展示了良好的前景。

关键词：单克隆抗体嵌合抗体 a－颗粒膜蛋白（GMP）－140

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凝血因子ⅤG1691A点突变的多聚酶链反应分析

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中华血液学杂志 1996年第9期17卷 490-491页

作者：何杨金坚阮长耿江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室法国巴黎RobertDe-bre'医院

凝血因子ⅤＧ１６９１Ａ点突变的多聚酶链反应分析何杨ＬＭａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ金坚ＳＢｉｎａｒｄＮＳｃｈｌｅｇｅｌ阮长耿最近，发现一些静脉血栓形成患者的血浆具有抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）现象，其主要原因是因子Ⅴ基因１６９１... 详细信息

凝血因子ⅤＧ１６９１Ａ点突变的多聚酶链反应分析何杨ＬＭａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ金坚ＳＢｉｎａｒｄＮＳｃｈｌｅｇｅｌ阮长耿最近，发现一些静脉血栓形成患者的血浆具有抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）现象，其主要原因是因子Ⅴ基因１６９１核苷酸位置上的鸟嘌呤核苷（Ｇ）被腺...

关键词：凝血因子点突变聚合酶链反应血栓形成

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11－去氢－血栓烷B_2测定及其临床应用

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中华血液学杂志 1996年第9期17卷 472-474页

作者：王兆钺王山喜阮长耿江苏省血液研究所苏州医学院血栓与止血研究室镇江医学院临床医学系内科教研室

为了评估１１－去氢－血栓烷Ｂ２（ＤＨ－ＴＸＢ２）作为体内血小板活化标志物的价值，测定了１００例患者（脑梗塞３２例，脑出血３４例，糖尿病１６例，妊娠高血压综合征１８例）血浆ＤＨ－ＴＸＢ２和血栓烷Ｂ２（ＴＸＢ２）的浓度，... 详细信息

为了评估１１－去氢－血栓烷Ｂ２（ＤＨ－ＴＸＢ２）作为体内血小板活化标志物的价值，测定了１００例患者（脑梗塞３２例，脑出血３４例，糖尿病１６例，妊娠高血压综合征１８例）血浆ＤＨ－ＴＸＢ２和血栓烷Ｂ２（ＴＸＢ２）的浓度，并与对照组相比。结果显示患者组ＤＨ－ＴＸＢ２较ＴＸＢ２升高更多；急性期脑血管病患者血浆ＤＨ－ＴＸＢ２均高于对照组最高值，无重叠；而其ＴＸＢ２及α颗粒膜蛋白－１４０（ＧＭＰ－１４０）浓度均与对照组有较多的重叠。结果表明，血浆ＤＨ－ＴＸＢ２浓度测定不受体外血小板活化的影响。

关键词：血小板活化血栓烷B2 血栓形成脑血管疾病

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8－表氧－前列腺素F_（2α）酶免疫测定及临床应用

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中华医学检验杂志 1996年第4期19卷 238-241页

作者：王兆钺王山喜阮长耿苏州医学院血栓与止血研究室江苏省血液研究所镇江医学院临床医学系内科教研室

目的建立乙酰胆碱酯酶标记的８－表氧－前列腺素Ｆ２α（８－表氧－ＰＧＦ２α）酶免疫法测定方法，并观察其在脑血栓患者与慢性肾功能衰竭患者血浆中的改变。方法将８－表氧－ＰＧＦ２α与人血清白蛋白共价联接完全抗原后，免疫家兔制... 详细信息

目的建立乙酰胆碱酯酶标记的８－表氧－前列腺素Ｆ２α（８－表氧－ＰＧＦ２α）酶免疫法测定方法，并观察其在脑血栓患者与慢性肾功能衰竭患者血浆中的改变。方法将８－表氧－ＰＧＦ２α与人血清白蛋白共价联接完全抗原后，免疫家兔制备抗血清，将８－表氧－ＰＧＦ２α与乙酰胆碱酯酶联接成酶标记物。在确定酶免疫法有关质量参数后，测定１７例正常人、１８例急性脑血栓患者及１６例慢性肾功能衰竭患者透析前后血浆８－表氧－ＰＧＦ２α的含量。用ＳｉｇｍａＳｔａｔ计算机软件进行统计与线性回归，标本数据用配对Ｓｔｕｄｅｎｔ′ｓ检验。结果８－表氧－ＰＧＦ２α抗体效价在５次加强免疫后达１／３０００００；酶免疫测定的线性范围为２～１２５ｎｇ／Ｌ，ＩＣ５０（结合率为５０％时的浓度）为８ｎｇ／Ｌ，抗血清与其他前列腺素及有关代谢产物的交叉反应甚低。批内变异系数４．８％（ｎ＝１４），批间变异系数７．５％（ｎ＝９）。急性脑血栓与慢性肾功能衰竭患者血浆浓度均显著高于正常人，慢性肾功能衰竭患者血液透析后降至正常范围。结论８－表氧－ＰＧＦ２α酶免疫法测定具有很高的敏感性与特异性，该指标可作为体内脂质过氧化及有关疾病研究的一个新的特异指标。

关键词：前列腺素F 酶免疫测定脑血栓肾功能衰竭

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